MOOC Neurophysiologie Cellulaire – Aix-Marseille Université - INMED

Chapitre 1 – Gradients ioniques

Plan :
1. Observations et hypothèses
2. Transport des ions et équation de Nernst
3. Courant ionique
4. Technique du patch-clamp

Notions apprises apprès ce cours :

- Qu’est-ce que le gradient électrochimique ?
o Il permet le passage des ions qui crée les signaux électriques des
neurones
- Qu’est-ce qu’un potentiel de membrane ?
- Prédire dans quel sens les ions traversent la membrane à un potentiel donné
- Qu’est-ce qu’un courant ionique ?
o Un courant ionique change le potentiel de la membrane

Analogie différence de potentiel et un courant : château d’eau

- Altitude = différence de potentiel de part et d’autre de la membrane.

- Intensité = débit des ions (nbr de charges / sec).
o Ça dépendra du diamètre : plus le diamètre sera faible, plus le débit sera faible.
- Résistance = ouverture ou fermeture des canaux ioniques.

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Ch.1-1 : Observations et hypothèses

Observations :
1 : Inégale répartition des ions entre le milieu
intra et extracellulaire.
2 : électroneutralité.
3 : Différences des concentrations ioniques
constantes
Hypothèses :
1 : Membrane imperméable : pas de passage
2 : Membrane imperméable mais des mécanismes rétablissent les concentrations

Expérience : Axone géant de calmar

On le plonge dans une solution de Na*
_ Transport passif (pas dépendant de l’ATP) d’ions
Na* vers l’intérieur

L’expérience à l’inverse :
_ Transport actif (dépendant de l’ATP) d’ions Na*
vers l’extérieur  pompe Na+/K+
Si on bloque la production d’ATP rien ne sort
En
résumé : les ions entrent par des canaux et sortent par
des pompes  ils sont associés pour rééquilibrer en
permanence les concentrations du milieu intérieur et
extérieur.

Comment les ions passent-ils à travers la membrane ?

Expérience : on synthétise une bicouche lipidique qui sépare 2
milieux :
- Sans protéines : le Na* ne passent pas
- Avec protéines : le Na* passent
= Canaux ioniques (centre hydrophile)

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CH.1-2 : TRANSPORT DES IONS ET EQUATION DE NERNST

Forces qui font bouger les ions à travers la mb
plasmique : Gradient électrochimique
- Gradient de concentration : du + vers le - concentré
- Gradient électrique : Les ions sont attirés vers la
charge inverse.
L’intérieur est chargé + négativement que
l’extérieur.
 Potentiel de repos = -60mv

Potentiel de membrane : Vm = Vi-Ve

Pour connaitre le gradient électrochimique de Cl- et K+ il faut calculer le moment où ces 2
forces sont égales : c’est potentiel d’équilibre  Equation de Nernst
- Sachant que le gradient de concentration est constant,
- ce qui change c’est le gradient électrique qui varie avec le
potentiel de la membrane
 Potentiel pour lequel le flux net de l’ion est nul 
- ENa = +58mV  la membrane doit être à +58mV pour qu’il y ait
autant d’ions Na+ qui entre et qui sortent.
- EK = -97 mV  l’inverse de Na, très négatif
- ECa = +121 mV
- ECl = -59 mV
Na et Ca vont toujours rentrer et K va toujours sortir car la membrane n’attendra jamais leur
potentiel d’équilibre.

Résumé :
Un courant est un mouvement de charges. Dans le cas des courants ioniques, il
s’agit d’un mouvement d’ions. Dans le cas du courant électrique, il s’agit d’un
mouvement d’électrons.
Un transport passif des ions à travers la membrane plasmique ne nécessite pas
d'énergie. Il a lieu grâce à leur gradient électrochimique (Vm-Eion) : gradient de
concentration et gradient électrique de l’ion. La bicouche lipidique n'est pas
perméable aux ions car les ions sont entourés de molécules d’eau. Il faut donc un
environnement aqueux pour que les ions circulent : le pore aqueux des canaux
ioniques. 3
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Un gradient de concentration ionique est une différence de concentration d’une

espèce ionique de part et d’autre la membrane plasmique.
Un gradient électrique de part et d’autre d’une membrane est une différence de
charges entre la face externe et la face interne de la membrane. Cette différence
de charges crée une différence de potentiel transmembranaire ou potentiel de
membrane (Vm). Cette différence de charges d’une membrane au repos résulte
de la présence dans la membrane de canaux ioniques perméables aux ions K+.
Ainsi les ions K+ sortent passivement continuellement et Il en résulte un gain de
charges + par la face externe de la membrane et une perte de charges + par la face
interne.
De ce fait, le potentiel de membrane au repos est négatif ~ -60 mV. Il faut noter
que cette valeur de Vm n’est pas égale à EK car il y a aussi des canaux cationiques
continuellement ouverts dans la membrane qui laissent un peu entrer des ions
Na+.
Le potentiel d’équilibre d’un ion est le potentiel de membrane pour lequel le flux
net de cet ion est nul. Il renseigne donc sur le potentiel d’inversion du courant
porté par cet ion.

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CH.1-3 : COURANT IONIQUE ET LOI D’OHM

Courant ionique = mouvements d'ions à travers la membrane, puisqu'un courant, c'est un
déplacement de charges.
Q = charge transportée en coulombs par t, unité de temps, en secondes.
Dans les canaux ioniques, le courant s'exprime en picoampères, c'est-à-
dire 10-12 A
La loi d'Ohm :

U = c'est la force qui fait bouger les ions, donc :

Dans les neurones, on s’intéresse surtout au courant I donc on l’écrit :

Conductance = facilité avec laquelle les ions passent
S’il y a plusieurs canaux :
Iion = le courant total dépend du
courant unitaire, du nombre de
canaux présents dans la membrane,
et de leur probabilité d'ouverture.

Gion = la conductance dépend de la conductance unitaire

et du nombre de canaux ouverts
Quel est le rôle des courants ioniques :
- Changer le potentiel de membrane (Vm)  principal
o si des ions K+ sortent du neurone, Vm va s'hyperpolariser puisque la face
interne perd des ions chargés +
= si des charges - entrent
o Si des ions Na+ entrent, Vm va se dépolariser  potentiel d'action
- En hyperpolarisant /dépolarisant la membrane, ils peuvent ouvrir ou fermer d'autres
canaux voltage dépendants
- Localement, changer la concentration d'un ion
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o Petite augmentation transitoire du Ca  responsable de la libération des
neurotransmetteurs

CH1-4 : TECHNIQUE DU PATCH-CLAMP

Technique pour mesurer un courant ionique : le voltage imposé
On maintient le Vm à une valeur fixe (VH) connue, comme Eion
 La force électrochimique (VH- Eion) devient une constante
 Le courant I mesuré ne dépend plus que de la conductance

Pour mesurer un changement de potentiel :

Vm = variable que l'on veut mesurer,
Eion = constante.
On fixe, à une valeur connue, le courant I que l'on injecte à
travers l'électrode.
/!\ cela ne veut pas dire que le courant qui passe à
travers la membrane est constant
On laisse évoluer le potentiel de membrane et on mesure.
Comment mesure-t-on ? configuration de mesure en Patch-Clamp :
 Utilisation d’électrodes ou pipettes en verre remplies d’un liquide qui conduit l’électricité
 Mesure d’un courant unitaire :
- on colle la pipette : tout petit morceau de membrane
- liquide extracellulaire dans la pipete
/!\ pas en courant imposé
- l'extérieur reste à l'extérieur. On a tiré et excisé un petit
morceau de membrane, et on espère qu'il y a des canaux
dedans.
 Patch excisé
 Mesure d’un courant total ou des changements de potentiel (en
courant imposé) :
- on commence par faire une cellule attachée, puis on aspire à
travers la pipette  Le petit morceau de membrane est enlevé et le liquide qui
est dans la pipette passe à l'intérieur du neurone
 accès électrique à tout le neurone

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- liquide pseudo-intracellulaire dans la pipete

Résumé : Le mode voltage imposé permet de mesurer le courant I.

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ZOOMS
LA MORPHOLOGIE DES NEURONES
Technique de reconstruction 3D du neurone :
On met un colorant, révélé après l'enregistrement par un
procédé immunocytochimique, puis fait des images au
microscope confocal en trois dimensions.
/!\ Tranches de 400 micromètres = les neurones, et donc
l’arbre dendritique sont coupés
Ce type d'expérience permet de :
 Comprendre la morphologie d'un neurone,
 Connaître le nombre de troncs dendritiques,
le nombre de branchements,
le nombre de terminaisons dendritiques.
 Analyser la structure de l’axone : axone unique,
est-ce qu'il donne des collatérales, axones fils,
 Comparer avec les autres neurones d’une même
structure
Axone = lisse Dendrites = épines

VOLTAGE IMPOSE / COURRANT IMPOSE

2 modes d’enregistrement de l’activité neuronale :
 Voltage imposé (voltage clamp) : mesure du courant
Le potentiel de toute la membrane (configuration cellule-entière) ou d’un petit morceau de
membrane (cellule-attachée ou outside-out) est maintenu constant à une valeur fixée par
l’expérimentateur et appelée VH (V = potentiel et H = Hold, « maintenir » en anglais).
Pour maintenir ce potentiel, au cours de l’enregistrement, toute modification de sa valeur par
rapport à la valeur fixée est immédiatement compensée par l’injection d’un courant
inverse à travers l’électrode d’enregistrement.
 Métaphore : c’est comme si on rajoutait constamment de l’eau dans un récipient percé
pour que la hauteur d’eau soit toujours la même.

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Le mode voltage imposé permet de mesurer I (courant à travers toute la membrane
neuronale) ou i (courant à travers un canal ionique), suivant la configuration de patch
choisie. Les modifications de I ou i ne dépendent alors que de G ou γ (conductance totale ou
unitaire), suivant la formule I = GVH ou i = γVH
 Courant imposé : mesure des changements de potentiel mambranaire

DEPOLARISATION, HYPERPOLARISATION, REPOLARISATION

Le point de référence pour les changements de potentiels membranaires :
 Potentiel de repos (dans les enregistrements en courant imposé)
 Potentiel de maintien (dans les enregistrements en potentiel imposé)

Une dépolarisation est un changement de potentiel vers des potentiels - hyperpolarisés que
le potentiel de repos ou de maintien. Par exemple, si la membrane passe de -60 à -40 mV.
Une hyperpolarisation est un changement de potentiel vers des potentiels + hyperpolarisés
que le potentiel de repos ou de maintien. Par exemple, si la membrane passe de -60 à -80
mV.

Une repolarisation est un retour au potentiel de repos ou de maintien.

 A partir d’une valeur dépolarisée, la membrane se repolarise en s’hyperpolarisant.
 A partir d’une valeur hyperpolarisée, le potentiel de membrane se repolarise en se
dépolarisant.

LA VALENCE D’UN ION

La valence d’un ion (z) correspond au nombre d’électrons qu’un ion possède en plus ou en
moins par rapport à son nombre de protons.
 Si un électron est en excédent, l’ion est noté –  anion Cl-
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 Si un électron est en moins, l’ion est noté +  cation Na+

Les valences des ions étudiés dans le cours :

 Pour l’ion sodium Na+, z = +1.
 Pour l’ion potassium K+, z = +1.
 Pour l’ion calcium Ca2+, z = +2.
 Pour l’ion chlorure Cl-, z = -1.

L'EQUATION DE NERNST
 CALCULER LE POTENTIEL D’EQUILIBRE D’UN ION
Le sens du transport passif d’une espèce ionique dépend de
 sa concentration de part et d’autre de la membrane : du +  – concentré  constante
 du potentiel de la membrane (Vm = Vi – Ve) : les ions chargés – sont attirés par le
coté de la membrane chargé + et vice versa.  Variable
Prenons l’exemple des ions Na+ :
 Par gradient de concentration ils ont tendance à entrer dans
les neurones à travers les canaux Na+ ouverts.
 Par gradient électrique aussi tant que la face interne de la
membrane est chargée plus négativement que la face
externe.
 Le flux net d’ions Na+ est par conséquent entrant dans ces
conditions.

Mais quand Vm s’inverse pendant le potentiel d’action ?

Le gradient de concentration est constant mais le gradient
électrique a changé de sens. Est-elle supérieure ou inférieure à la
force liée au gradient de concentration ?
Pour résoudre ce problème, il faut le quantifier. C’est
l’équation de Nernst qui donne le potentiel d’équilibre d’un ion
(Eion).
La définition du potentiel d’équilibre est la suivante :
Quand Vm = Eion, le flux net de cet ion est nul, cet ion est à l’équilibre et le flux net de cet
ion s’inverse.
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Eion = RT/zF ln([ion]e/[ion]i)
ENa = 58/1 log(140/14) = +58 mV

Tant que Vm est plus hyperpolarisé que +58 mV, les ions Na+ entrent passivement dans
les neurones à travers les canaux Na+ ouverts. Comme Vm n’atteint jamais +58 mV, on peut
dire que les ions Na + entrent toujours passivement dans les neurones mais avec une force
variable.
Les ions K+ sortent toujours passivement à travers les canaux K +
 car [K+]e = 3 mM et [K+]i = 140 mM.
En revanche, la situation est beaucoup plus compliquée pour les ions chlorures. Elle est
expliquée au chapitre 5 (transmission synaptique GABAergique).

LE POTENTIEL DE REPOS
Lorsqu’on enregistre le potentiel de la membrane en configuration cellule entière et en mode
courant imposé, on constate l’existence d’une différence de potentiel entre les deux faces de
la membrane telle que la face interne est chargée plus négativement que la face externe. Cela
est vrai pour toutes les cellules vivantes.
Définition : le potentiel de repos est le potentiel de membrane d’un neurone lorsqu’il
n’émet pas de potentiels d’action. Il varie d’un neurone à un autre mais il est toujours
négatif, de l’ordre de -80 à -50 mV.

Comment mesurer le potentiel de repos ?

On mesure la différence de potentiel entre la pipette (qui
mesure Vi) et la « terre », autre électrode qui baigne dans
le milieu extracellulaire (Ve).

Mécanismes ioniques à l’origine du potentiel de repos :

Si uniquement des canaux K+ sont ouverts, les ions K+
vont sortir jusqu’à ce que Vm = EK (~ -90 mV)
 Autant d’ions K+ qui sortent que d’ions K+ qui entrent  stable.
Cependant, Vrepos = -60 mV => plus dépolarisé que EK
 Il y a toujours quelques canaux Na+ et quelques canaux cationiques (Na/K) ouverts.

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- Fait évoluer le potentiel de membrane Suivant la proportion de canaux K+ ouverts par
rapport aux canaux Na+ et cationiques
o Ex : les neurones du striatum du SNC  Vrepos ~ -80 mV

COURANT ENTRANT / SORTANT

Un courant est un mouvement de charges. En biologie, un courant est un mouvement
d’ions. Par définition, « courant entrant ou sortant » signifie « courant entrant de charges
+ ou sortant de charges + ».

Courant entrant : Entrée de charges + ou sortie de charges –

- Entrée d’ions Na+ à travers des canaux Na+ (Figure a)
- Sortie d’ions Cl- à travers des canaux GABAA
 Par convention, un courant entrant est négatif
Courant sortant : Sortie de charges + ou entrée de charges –
- Sortie d’ions K+ à travers des canaux K+ Figure b)
- Entrée d’ions Cl- à travers des canaux GABAA (Figure c)
 Par convention, un courant sortant est positif

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