Bioréacteurs

Enzyma'ques Cellulaires

Enz solubles Enzy immobilisées cellules libres cellules immobilisées

(fermenteurs, cytoculteurs)

Différents réacteurs biologiques

Réacteurs enzyma/ques
- Système qui permet d’uBliser une réacBon enzymaBque pour produire
une substance que l’on veut récupérer
-Construits en général sur les mêmes modèles que les réacteurs chimiques,
- Sont des cuves (enceintes) en verre ou en acier inoxydable.

des réacBons enzymaBques (réacteurs enzymaBques) ou

des réacBons à cellules (fermenteurs ou cytoculteurs)

Bioréacteurs.
-contrôler les condiBons de culture (température, pH, aéraBon, etc.),

récolter des informaBons de plus grande fiabilité.

Les bioréacteurs industriels fabricaBon de

nombreux produits : bière, yaourts, vaccins, anBbioBques,
anBcorps, vitamines, acides organiques …
 Les différents types de réacteurs

Les paramètres de classement des réacteurs

1- La forme soluble ou immobilisée de l’Enz u:lsée

a- Ez solubles: réac:on s’effectue en phase homogène enz solubles

b- Enz immobilisées:système hétérogène
- grande facilité de récupéra:on en fin de cycle dans le cas d’1 u:lisa:on discon:nue,
- meilleure réten:on dans réacteur en con:nu,
- grande stabilité l’enz notamment vis à vis de température

inconvénients: le coût de support et du procédé de fixa:on

diminu:on des performances due aux limita:ons diffusionnelles
 2- Le mode fonc,onnement du réacteur, mode d’alimenta,on de
substrat con,nu ou discon,nu
A- Un fonc,onnement discon,nu (en batch) consiste à une succession de cycles. Le
réacteur est chargé en enz et sub au début du cycle ; à la fin , le produit est
récupéré et séparé de l’enz que l’on u,lisera pour le cycle suivant

B- Un réacteur con,nu est un système ouvert, dans lequel l’enz est confinée,
alimenté en permanence par le sub et avec une sor,e en con,nu de la solu,on
réac,onnelle contenant le produit

3- La géométrie du réacteur, de type cuve (ou tank) ou tubulaire

réacteur con+nu, ouvert
4-Le comportement hydrodynamiques des fluides

- réacteur agité fermé à fonctionnement discontinu ou batch (Stired

Tank Reactor « BSTR »

- réacteur agité à fonctionnement continu ou Continus Flow Stired

Tank Reactor « CSTR »
- réacteur tubulaire à écoulement piston ou Plug-Flow
Reactor »PFR »
réacteur agité fermé discon+nu ou batch
(S+red Tank Reactor « BSTR » réacteur con+nu à piston

réacteur con+nu parfaitement mélangé CSTR

 Les principaux réacteurs
I/ Les réacteurs discon3nus

On travaille en lots ou « batch » avec ce type de réacteur.

Au départ on apporte les quan3tés nécessaires de sub et d’enz sous forme libre
ou immobilisée
on laisse la réac3on se dérouler sous agita3on sans ajouter d’enz ni de sub.

la mise œuvre facile, le coût est faible.

Il faut tenir compte le temps nécessaire du remplissage, à la vidange et au

nettoyage des cuves.

Ce type de fonctionnement ne peut être intégré dans une chaine continue qu’à
la condition de disposer de plusieurs cuves
 II/ Les réacteurs con;nus ou ouverts

Il faut considérer deux cas

- Les réacteurs avec enzyme soluble confinée

- Les réacteurs avec enzyme immobilisée
 A/ Les réacteurs avec enzyme soluble confinée

Les molécules de sub sont généralement de grosses molécules comme par

exemple des polysaccharides qui vont donner après réac:on enzyma:que
des substances de faible poids moléculaire (glucose).

L’enzyme est confinée par une membrane semi perméable (perméabilité

sélec:ve) dont cut-off (seuil de coupure) est tel qu’il re:ent l’enz et le
substrat dans le réacteur et laisse passer les molécules de produit.

Le réacteur est en permanence recyclé.

L’addi:on de substrat et le récupéra:on de produit en con:nu (débit

iden:que) dispensent de la récupéra:on de l’enz en fin du cycle et
diminuent le coût de fonc:onnement
La principale applica+on industrielle de bioréacteur à enz confinée

la clarifica+on enzyma+que des jus et spécialement les jus de pomme. Le

trouble cons+tué de débris cellulosiques et pec+ques est clarifié par u+lisa+on
de cellulase et pec+nase confinées par UF.

Le perméat est alors clair, stable dans le temps et stérile.

B/Les réacteurs continus à enzyme immobilisée

a) réacteur classique

Il est proche de celui de type batch sauf dans ce cas, le sub est introduit en
continu dans le réacteur et le produit est soutiré en permanence. dans ce
système l’enz est souvent immobilisée sur les billes et restent de ce fait dans le
réacteur
b) Réacteurs con/nus à enz immobilisées à lit fixe

- Il se présente sous forme de colonne chromatographique avec un garnissage qui

peut être par exemple une résine qui sert de support « lit » à l’enz (adsorp/on,
ré/cula/on, ..)

- Dans ce type de réacteur, il n’ y a pas d’agita/on, fonc/onnement est de

type piston (alimenta/on par un flux ascendant ou descendant).
- Il se peut que le sub ne soit pas complétement transformé en produit au cours
du passage dans la colonne aussi on peut par recyclage augmenter le taux de
conversion de S P

Risque de colmatage des par/cules s’établit 1 cheminement préféren/el du

La colonne de par/cule (court circuit)fluide à travers la colonne des par/cules
( court circuit) d’où varia/on du débit et modifica/on des temps de séjour
C) Réacteurs con/nu à lit fluidisé

Dans ce type de réacteur de par/cules (support de l’enzyme) qui sont

légèrement brassées par le flux du substrat qui est introduit par le bas.
En présence de flux, elles sont en suspension avec l’enzyme diminu/on
du risque de colmatage p
d) Réacteurs con/nus tubulaire

L’enzyme est fixée sur la paroi d’un tube enroulée en spirale

Son principe est que le substrat diffuse vers les parois où il est conver/ en produits
qui diffusent à leurs tour dans le tube jusqu’à leur sor/e du tube.
III/ Réacteurs semi continus

Il est très semblable au réacteur discontinu ou semi-fermés (fed-batch) qui se

situent entre le réacteur fermé et le réacteur ouvert
Le principal changement provient du fait que le volume change durant la
réaction.
Réacteurs à cellules immobilisées

- Ils sont u3lisés de + en + fréquemment.

- La technologie d’immobilisa3on des cellules microbiennes, végétales ou

animales est voisine de celle employée pour les enz
- Les technologies de d’inclusion étant les plus fréquentes

Ces bioréacteurs peuvent être u3lisés

- pour transformer une substance par une bioconversion meEant en jeu

une ou plusieurs réac3ons enzyma3ques.

-par une transforma3on mul3-étapes d’obtenir des métabolites

secondaires ou encore de biodégrader un composé
 A/ Réacteurs idéaux (con3nus ouvert)

Ce type de réacteur se compose d’une enceinte contenant : le

sub, milieu tamponné et l’enz

Avec ce type de réacteurs con3nus, on peut avoir deux comportement

hydrodynamiques différents

a) Réacteurs parfaitement mélangés (« Con3nus s3rred Tank Reactors »)(CSTR)

b) Réacteurs à piston « plug Flow Reactors »(PFR)

a) Réacteurs parfaitement mélangés (« Con7nus s7rred Tank Reactors »)(CSTR)

Dans ce cas on a un apport permanent en sub et un sou7rage permanent de

produits

La concentration de sub est homogène dans le réacteur lorsque la

concentration est constante à la sortie, on dit que le réacteur qui a démarré
en régime dynamique a atteint un équilibre et qu’il travaille en régime
stationnaire.
Ce graphe est obtenu car l’agita3on est con3nue
b) Réacteurs à piston « plug Flow Reactors »(PFR)

la concentra:on en substrat et en produit varient de façon con:nue de l’entrée vers la

sor:e car il n’y a pas d’agita:on.

Ce graphe est obtenu car il n’y a pas d’agita:on

 Etude de la distribu-on des temps de séjour dans le réacteur (DTS) ou (RTD
‘’reten-on -me distribu-on’’)

Ce paramètre fournit de précieux renseignement qu’au comportement

hydrodynamique des réacteurs

On u%lise une injec%on ponctuelle d’un marqueur (colorant, radioac%vité….)

à l’entrée du réacteur et on observe sa sor%e.

En théorie, le marqueur sort du réacteur avec 1 pic symétrique (pic fin).

Pic est parfaitement symétrique traduisant ainsi une distribu%on homogène

du marqueur dans le réacteur du fait d’une agita%on idéalement homogène.
En théorie, on peut calculer le temps de passage ou de séjour dans
le réacteur (‘’Space Time’’) t.
V
t=
Q
V: le volume liquide du réacteur et Q le débit du réacteur.

Ce temps de séjours sert de référence et permet de vérifier

les propriétés hydrodynamiques d’un réacteur.

t : temps théorique
 B/ Réacteurs réels
Pour déterminer les caractéristiques réels d’un réacteur,
on vérifie, s’il se comporte comme un réacteur idéal.

En pratiquant une injecton ponctuelle d’un marqueur

(colorant, radioactivité,…) à l’entrée du réacteur.

On observe sa sortie au bout d’un temps (ts) il apparait.

Ce temps de sortie expérimental est temps de séjour moyen

« ts moyen »

ts moyen est comparé au temps de passage du réacteur

t théorique calculer pour ce réacteur.
a) ts= t temps de séjour moyen coïncide avec le temps de passage
calculé pour ce même réacteur.
On dira qu’il se comporte comme un réacteur idéal

b) ts< t Concep?on du réacteur défectueux

les marqueurs restent moins longtemps que prévu (cheminement
direct entrée vers sor?e, mauvaise homogénéisa?on… ?)

C) ts > t Mauvaise concep?on : la molécule reste coincé quelque part

(qlq chose gène la molécule pour sor?r)
Différents facteurs gouvernant un réacteur enzyma5que
 Equa%on caractéris%ques des réacteurs

Réacteurs opérant en Batch

Dans ce mode fonc,onnement, la concentra,on en substrat évolue

au cours du temps
On vérifie le taux de conversion de S en P au cours du temps

On introduit au départ tout ce qui est nécessaire : Enz, sub , tampon,

cofacteurs

La vitesse de dispari,on du substrat est exprimée en mole ou en gramme

par unité de volume et par unité de temps

=
d [S ]
dt
 Equa%on bilan réacteur en batch

Vitesse de transforma%on de sub=vitesse d’entrée- (vitesse sor%e +Vitesse de varia%on

interne

vitesse d’entrée= Q1S0 vitesse sortie= Q2 S vitess variation interne= VR ds/dt

Q1S0 = Q2 S = 0 réacteur férmé

Vitesse de transforma%on de sub= - Vitesse de varia%on interne

Pour une ciné-que michaélienne :

d [S ]
=
dt

Après intégra-on l’équa-on de Michaelis devient

S0 représente la concentra/on du substrat au temps t = 0
St représente la concentra/on du substrat au temps t (sub non transformé)

On définit un taux de conversion Xp qui représente la propor/on de substrat ini/al

transformé

L’équa/on du réacteur de type batch devient :

On regarde les variations de Xp en fonction du temps et pour différentes
valeurs de S 0

S0 >> Km
Xp = VM /S0*t équa0on des réacteurs en batch

S0 << Km la courbe X= f(t) s’incurve ( concavité vers le bas)

 Réacteur con,nu

Réacteur con,nu CSTR

 Vitesse de transforma.on de sub=vitesse d’entrée- (vitesse sor.e +Vitesse de
varia.on interne.

VR * v =Q Se –(QS + v*ds/dt)
VR le volume du réacteur
v la vitesse de transformation du substrat par
unité de volume et par unité de temps,
Q le débit en l/h
S en mol/l

VR
(S e − S ) = .v !
Q
Avec un ciné9que michaélienne on a
 En u%lisant Xp l’équa%on devient

t = VR/Q

on a remplacé Km par K’m pour tenir compte des caractéris%ques de

l’enzyme immobilisée K’m= l Km

Expression permet de

* soit déterminer le volume du bioréacteur à meCre en oeuvre pour obtenir 1 taux de

conversion déterminé
• Soit déterminer la concentra%on finale du sub pour un volume et un débit donné
• soit déterminer les paramètres ciné%ques de l’enz mise en oeuvre
 réacteurs PFR
Ces réacteurs ont un écoulement piston. Il n’ y a pas de
mélange gradient de [sub]
Bilan de qté de sub sur totalité de réacteur est impossible
Il faut effectuer ce bilan dans 1 volume dV Calcul complexe

Le temps de passage dans le réacteur t

t = volume de liquide/débit t= Vliquide/Q
Avec une cinétique michaélienne on a après intégration entre l’entrée
et la sortie du réacteur de volume VR avec un temps de séjour de t

X p Se − K m ln (1− X p ) = VmaxT
T= t
t = Vliquide/ Q le volume liquide ne correspond pas au volume du réacteur
VR (cause du vide )
un taux de vide e = Vliquide/VR
Vliquide = e VR
t = e VR / Q
 la capacité de réac.on d’un réacteur CR = Vmaxe VR
Vmax = CR /e VR

Comme précédemment on u.sera K’m au lieu de Km pour globaliser

les modifica.on de Km avec l’enzyme immobilisée.

Si Q est constant alors l’équa.on peut être représentée

par une droite y = ax + b

On peut alors tracer XpSe en fonc.on de ln(1-Xp)

déterminer les pentes de valeur K’m. Il reste alors à porter

K’m en fonc.on de Q.
y = ax + b a : pente = K’m b= CR/Q