Colorations des microorganismes

Ziehl à l’huile - Ziehl-Neelsen modifié

Principe
D’après 1
Certains germes sont colorés par un mélange de fuchsine basique et de phénol. Les bacilles
acido-alcoolo-résistants (BAAR) restent colorés après la différenciation en alcool-acide.

Réactifs

HUILE DE PARAFFINE + XYLENE (V/V)

FUCHSINE BASIQUE

Fuchsine basique (CI 42510) ....................................................................................1 g

Ethanol à 90% ............................................................................................................ 10 ml

Phénol liquide............................................................................................................. 54 ml
Malaxer dans un mortier la fuchsine dans l’alcool.
Ajouter le phénol et bien malaxer pour obtenir un mélange homogène.
Ajouter petit à petit 100 mL d’eau distillée
Laisser reposer 24 h puis filtrer.
Utilisation possible d’une solution de fuchsine phéniquée prête à l’emploi.

ALCOOL ACIDE

Acide chlorhydrique à 1 % dans l’éthanil à 70 %

BLEU DE METHYLENE (CI 42770)

Bleu de méthylène à 1% dans l’acide acétique à 0,5%)
Utilisation possible d’une solution de bleu de méthylène prête à l’emploi.

Résultats :
- Bacilles Acido Alcoolo Résistants (BAAR) colorés en rouge
- Fond bleu

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Histochimie normale et pathologique - Ganter –
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour SEPTEMBRE 2007
Colorations des microorganismes
Ziehl à l’huile - Ziehl-Neelsen modifié

Technique :

Déparaffinage et réhydratation

Plonger la lame dans trois bains de mélange Huile-xylène 3x10 min

Essuyer les lames au papier Joseph

Rincer à l’eau courante 5 min

Essuyer les lames au papier Joseph

Coloration

Colorer à la fuchsine phéniquée 30 min

Rincer à l’eau courante 5 min

Plonger dans le mélange Alcool Acide (les coupes deviennent roses pâles)

Rincer à l’eau courante

Plonger dans un bain de bleu de méthylène 8s

Rincer à l’eau courante

Déshydratation et xylène

Montage sous lamelle à l’aide de résine.

Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour SEPTEMBRE 2007