2nde Enseignement d’exploration Biotechnologies 1

Rapport sur les Techniques de Culture et

d'Isolement des Micro-organismes
Introduction
L'isolement et la culture des micro-organismes sont des étapes cruciales en microbiologie.
L'objectif de cette expérience était de démontrer diverses techniques de culture et d'isolement
des micro-organismes à partir d'un échantillon de lait. Trois milieux de culture différents ont
été utilisés : Plate Count Agar (PCA), Agar Eosine Methylene Blue (EMB) pour les milieux
solides, et Bouillon Nutritif pour le milieu liquide. Les échantillons ont été ensemencés par
strie, par étalement et par piqûre, et une dilution en cascade a été réalisée à partir du lait. Les
cultures ont été incubées à 37 degrés Celsius pendant 24 heures.

Matériaux et Méthodes
Matériaux

• Plate Count Agar (PCA)

• Agar Eosine Methylene Blue (EMB)
• Bouillon Nutritif
• NaCl
• Lait
• Boîtes de Pétri
• Tubes à essai
• Seringue
• Pipette pasteur

Méthodes

1. Préparation des milieux de culture : Quatorze boîtes de Pétri contenant PCA, quatorze
boîtes de Pétri contenant EMB et huit tubes de 5 ml de Bouillon Nutritif ont été
préparés conformément aux instructions du fabricant.
2. Préparation de l'échantillon de lait : Un échantillon de lait a été prélevé et une dilution
en cascade a été réalisée en ajoutant 1 ml de lait dans un tube à essai contenant 9 ml de
NaCl. Cette dilution permettrait d'obtenir différentes concentrations d'organismes dans
le lait.
3. Ensemencement sur les milieux solides :
o Par strie : À l'aide d'une pipette pasteur, une petite quantité de la dilution a été
déposée sur la surface de la gélose PCA en utilisant la technique de
l'ensemencement par strie.
o Par étalement : Une autre portion de la dilution a été étalée sur la surface de la
gélose EMB.
o Par piqûre : À l'aide d'une seringue stérile, une portion de la dilution a été
ensemencée par piqûre dans la gélose PCA.
4. Ensemencement dans le milieu liquide : Un volume spécifique de la dilution a été
ajouté à des tubes de Bouillon Nutritif.
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5. Incubation : Toutes les cultures ont été incubées à 37 degrés Celsius pendant 24
heures.

Résultats
Après l'incubation, des colonies bactériennes ont été observées sur les milieux PCA et EMB.
Les différentes techniques d'ensemencement ont donné des résultats distincts en termes de
densité de colonies et de morphologie. Le Bouillon Nutritif liquide a montré une turbidité
accrue, indiquant la croissance bactérienne en suspension.

Les observations des colonies sont résumées ci-dessous :

• PCA (Ensemencement par strie) : 130 UFC/ml

• EMB (Ensemencement par étalement) : 95 UFC/ml
• PCA (Ensemencement par piqûre) : 160 UFC/ml
• Bouillon Nutritif (Milieu liquide) : Turbidité accrue

Discussion
Les différentes techniques d'ensemencement ont permis de mettre en évidence la diversité de
croissance bactérienne dans l'échantillon de lait. L'ensemencement par strie a permis d'obtenir
des colonies bien séparées, facilitant le comptage. L'ensemencement par étalement a donné
des colonies plus denses, tandis que l'ensemencement par piqûre a montré une croissance en
points distincts.

Le Bouillon Nutritif liquide a montré une turbidité accrue, indiquant une croissance
bactérienne en suspension dans le milieu liquide.

Conclusion
Cette expérience a illustré différentes techniques de culture et d'isolement des micro-
organismes à partir d'un échantillon de lait en utilisant des milieux de culture solides (PCA,
EMB) et liquides (Bouillon Nutritif). Les résultats montrent que les différentes techniques
d'ensemencement peuvent influencer la densité et la morphologie des colonies bactériennes
observées. Cette compréhension est essentielle en microbiologie pour l'isolement et
l'identification précise des micro-organismes présents dans un échantillon.