Université Saad Dahleb Blida

Faculté des Technologies

Département Génie Des Procédés
L3 Pharmacie Industrielle

Compte rendu du TP méthode d’analyse

TP2 : Détermination de la teneur du Paracétamol dans le Paralgan (Comprimé) par
spectrométrie dans l’UV-Visible

Réaliser par :
Guerroudja Romaissa

Groupe : 5

Professeur : Ait Masbeh

Déposé le : 18/04/2022

Année universitaire : 2021/2022

Introduction :
L’industrie pharmaceutique utilise de façon intensive la majorité des techniques d’analyses
reconnues et cela à chaque étape de la conception d’un médicament pour garantir la qualité.
La teneur par spectrophotométrie est une teneur très utilisé dans la Pharmacopée et
généralement dans l'industrie Pharmaceutique.
La spectroscopie UV-Visible est la plus ancienne et la plus utilisée des méthodes d’analyse
dans les laboratoires. Elle est une technique courante de contrôle et d'analyse de composés
chimiques. Elle permet notamment des applications quantitatives par application de la loi de
Beer-Lambert. Cependant, elle ne fournit que peu d’informations structurales (Analyse
qualitative) comparées aux autres méthodes spectroscopiques (IR, RMN et SM).
Elle est basée sur la propriété des molécules d’absorber des radiations lumineuses de
longueur d’onde déterminée.
L’UV-visible s’applique à des produits contenant un groupement chromophore, surtout les
molécules contenant au moins noyau aromatique ou un radical, aussi sur les composés
hétérocycliques.
La spectrophotométrie UV visible utilise des longueurs d’onde incluse dans le domaine UV et
le domaine du visible.
Dans une molécule, les transitions électroniques ont lieu dans la région de l’ultraviolet et du
visible.
La spectrophotométrie UV-visible s’occupe des électrons de valence, les transitions possibles
seront les électrons des orbitales moléculaires liante ou non liante et orbitale moléculaire
anti liante.
Présentation des notions :
1.PARACETAMOL -PARALGAN :

 Définition du Paracétamol :
Le paracétamol, aussi appelé acétaminophène, est une substance active aux propriétés
analgésiques et antipyrétiques non salicylés qui rentre dans la composition de nombreuses
spécialités pharmaceutiques, il est classé par l’OMS comme antalgique de palier 1
« Analgésique non opioïde », utilisé seul ou en association avec d'autres antalgiques.
Substances qui combattent la fièvre et des douleurs d’intensité faible et modérée. Il peut
être seul ou en association à d’autres analgésiques.
Le Paracétamol vient donc comme la substance active d'une large gamme de spécialités
médicamenteuses telles que : DOLIPRANE, EFFERALGAN, DAFALGAN, PARALGAN.

 La formule chimique du Paracétamol :

Chimiquement, il s’agit de l’hydroxy-1-acétamido-4-benzéne ou N-Acétyl-paraacétamino-
phénol (abrégé NAPAP) :

Formule brute : C8H9NO2

 Caractéristiques physico-chimiques :
Le paracétamol se présente sous forme de poudre cristalline blanche assez soluble dans
l’eau, facilement soluble dans l’alcool et très peu soluble dans l’éther. Il se conserve à l’abri
de la lumière.

2. La spectrométrie UV Visible :
  Définition :
La spectroscopie ultraviolet-visible ou spectrométrie ultraviolet-visible est une technique de
spectroscopie mettant en jeu les photons dont les longueurs d'onde sont dans le domaine
des ultraviolets (200-400nm), du visible (400-800nm), et jusqu'au proche infrarouge. Soumis
à un rayonnement dans cette gamme de longueurs d'onde, les molécules, les ions ou
les complexes sont susceptibles de subir une ou plusieurs transitions électroniques. Cette
spectroscopie fait partie des méthodes de spectroscopie électronique. Les substrats analysés
sont le plus souvent en solution, mais peuvent également être en phase gazeuse et plus
rarement à l'état solide.
La spectroscopie d’absorption dans l’UV et le visible est basée sur la propriété des molécules
d’absorber des radiations lumineuses de longueur d’onde déterminée.

 Appareillage et principe :
L’étude des absorptions nécessite l’utilisation d’un appareil appelé spectromètre.

On dissout la substance à analyser dans un solvant et la solution obtenue est versée dans
une cuve destinée à être placée dans le spectromètre. Afin de ne pas fausser les mesures la
cuve et le solvant choisis ne doivent pas absorber les rayonnements émis par le
spectroscope.
Lorsque la cuve contenant la solution est placée dans un spectroscope, elle reçoit un
rayonnement d'intensité I0. Une partie de cette lumière incidente notée I0 est absorbée par
le milieu et le reste, noté I, est transmis. L'intensité (I) du rayonnement issu de la cuve est
donc inférieure à l'intensité du rayonnement initial (I0). La fraction de la lumière incidente
absorbée par une substance de concentration C contenue dans une cuve de longueur (L) est
donnée par la loi de Beer-Lambert :
A = log(I0/I) = ε. L. C

Schéma de principe de lecture d'un échantillon en spectroscopie UV-visible

Le spectrophotomètre UV-visible est constitué des éléments suivants :

Source : Le rôle de la source est de fournir la radiation lumineuse.
Dans la région de l’UV, la source est une lampe à décharge au deutérium. Ou lampe à
hydrogène. Une lampe à filament de tungstène est utilisée pour la région allant du visible.
Monochromateur : a pour rôle de disperser le rayonnement polychromatique provenant de
la source et d’obtenir des radiations monochromatiques.
Cellule d’analyse : UV : cellule en quartz.
Visible : cellule en quartz ou en verre.
Détecteur : est un tube photomultiplicateur qui convertit la lumière reçue en courant
électrique.
Enregistreur : Enregistrement des mesures. Il permet de tracer un spectre d’absorption de
l’échantillon analysé.

3.Uniformité de teneur :
Selon la Pharmacopée Européenne, chapitre 2.9.6, « l’essai d’uniformité de teneur des
préparations uni doses est basé sur la détermination de la teneur individuelle en
substance(s) active(s) des unités composant l’échantillon, permettant de vérifier que les
teneurs individuelles en substance active se trouvent dans les limites établies par rapport à
la teneur moyenne de l’échantillon ». Ce dernier consiste à dissoudre 10 comprimés
séparément dans un milieu adéquat et de doser, à l’aide de techniques analytiques
appropriées, la libération de principe actif. Les comprimés pesés doivent contenir une
concentration semblable pour assurer au patient une dose constante. La limite admise par la
Pharmacopée Européenne est un écart limite de ±15% de la moyenne. Si une valeur se situe
entre ±15% et ±25%, le test doit être refait sur 20 unités. Aucune de ces concentrations
doivent dépasser l’écart limite si non le test est rejeté.

4. L’absorbance et la transmittance :
L’absorbance (A), également appelée densité optique (DO), est la quantité de lumière
absorbée par une solution. La transmittance est la quantité de lumière traversant une
solution. L’absorbance et la transmittance en % sont souvent utilisées en
spectrophotométrie

5.Transitions électroniques :
Elles correspondent pour chacune d’elles au passage d’un électron d’une orbitale liante à
une orbitale anti liante et donne lieu à une absorption d’énergie sous forme d’une radiation
lumineuse d’une longueur d’onde déterminée il est évident que l’environnement (nature des
groupements substituants portés par les atomes impliqués) aura un retentissement plus au
moins important sur les niveaux énergétiques correspondant à cette transition.
Il est nécessaire de rappeler la signification des principaux termes utilisés dans la
spectroscopie UV-Vis.

 : Les différentes transitions électroniques :

- Transition σ→σ* :
La grande stabilité des liaisons des composés organiques se traduit par un écart important
entre les niveaux orbitélaires frontières correspondants. Cette transition d'un électron d'une
OM liante dans une OM anti liante demande beaucoup d'énergie ; elle est intense et située
dans le lointain UV, vers 130 nm (max, éthane = 135 nm, = 10 000). C'est pourquoi les
hydrocarbures saturés, tels l'hexane ou le cyclohexane, qui ne présentent que des liaisons de
type, sont pratiquement transparents dans le proche UV.
Le cyclohexane et l'heptane constituent de bons solvants d'un point de vue optique ; à 200
nm l'absorbance est de 1, pour une épaisseur traversée de 1 cm. C'est la longueur d'onde
limite pour l'usage de ces solvants. Malheureusement, leur pouvoir de solvatation est
insuffisant pour dissoudre les composés très polaires.
-Transition n→π* :
Cette transition résulte du passage d'un électron d'une OM non-liante n à une OM anti
liante π*. Ce type de transition est rencontré, dans le cas des molécules comportent un
hétéroatome porteur de doublets électroniques libres appartenant à un système insaturé. La
plus connue est celle qui correspond à la bande carbonyle, facilement observable, située
entre 270 et 280 nm. Le coefficient d'absorption molaire est faible : pour l'éthanal par
exemple, max= 293 nm et = 12 (éthanol). La polarité de la liaison est modifiée après
absorption du photon. Ceci permet de comprendre pourquoi la nature du solvant peut
influer sur la position de la bande d'absorption.
- Transition n→σ* :
Le transfert d'un électron d'une paire libre (doublet n) des atomes O, N, S, X à un
niveau σ* est observé pour les alcools vers 180 nm, pour les amines vers 220 nm, pour les
éthers vers 190 nm ainsi que pour les dérivés halogénés. Cette transition d'intensité
moyenne, se situe à l'extrême limite du proche UV. Exemples méthanol : max= 183 nm (=
500) éther max= 190 nm (= 2 000) éthylamine : max = 210 nm (= 800).
- Transition π→π* :
Les composés, qui possèdent une double liaison éthylénique isolée, conduisent à une forte
bande d'absorption vers 170 nm (éthylène max = 165 nm, = 16 000) dont la position dépend
de la présence de substituants hétéroatomiques.
On voit couramment réunies les quatre types de transitions ci-dessus sur un unique
diagramme énergétique pour les situer les unes par rapport aux autres dans le cas général.
-Transition d→d :
En chimie inorganique de nombreux composés comportent des électrons, engagés dans des
orbitales moléculaires d, conduisent à des transitions de faible absorptivité situées dans le
domaine visible, responsables de colorations. Ainsi les solutions des sels métalliques de
titane Ti (H2O)63+ et de cuivre [Cu (H2O)6]3+sont bleues.

6.La loi de Beer-Lambert :

L’absorbance A (sans unité) d’une espèce chimique colorée en solution suffisamment diluée
est proportionnelle à la concentration molaire c (en mol. L-1) de cette espèce et à l’épaisseur
ℓ (en cm) de la solution traversée. Cette relation est appelée loi de Beer-Lambert et s’écrit
mathématiquement :
A = ε×ℓ×c
Où : ε : est le coefficient d’extinction molaire, en L.cm-1.mol-1. Ce nombre est propre à
l’espèce chimique et à la longueur d’onde considérée.

 Condition d’utilisation de la loi de Beer et Lambert :

_La lumière doit être monochromatique (une seule longueur d’onde).
_Les solutions doivent êtres diluées (Concentration faibles).
_Les solutions utilisées ne doivent pas être colloïdales (homogenèse) Ce qui éviterait les
pertes de rayonnement par réflexion ou diffusion.

6.Analyse quantitative :
L’analyse quantitative par la spectrométrie UV-visible est très employée (beaucoup plus que
l’analyse qualitative) grâce à l’utilisation de la loi de Beer-Lambert.
Comme applications, on peut citer :
-Le dosage d’impureté dont l’identité est connue.
- Le dosage d’un principe actif d’un médicament.
- Le dosage des métaux de transition par compléxométrie.
7.Les chromophores :
L'absorbance provient de groupements chimiques appelés chromophores.
Sont des molécules chimiques contenant dans leur structure des doubles liaisons
conjuguées. Un chromophore est un groupement fonctionnel qui peut donner une transition
électronique.
Les systèmes conjugués sont définis par une alternance de liaisons simples et de liaisons
doubles ou par un système constitué d’une liaison double suivi d’une liaison simple lié à un
atome portant un doublet d’électrons non lié.

8.Etalonnage :
L'étalonnage se fait par une méthode simple, qui consiste à préparer une série de Solutions
de concentrations bien déterminées. Celles-ci sont, par la suite analysées par
spectrophotométrie. Nous d'étalonnage représentant la densité optique D.O, au maximum
de la bande d'absorption, établissons ainsi, dans les deux techniques, la droite en fonction
de la concentration initiale C.
Considérons une radiation monochromatique (de longueur d’onde λ) incidente, d’intensité
I0(λ). Cette radiation traverse une épaisseur de solution du composé X de concentration c qui
absorbe la lumière partiellement. L’intensité transmise est I.

9.La courbe d’étalonnage :

Une courbe d'étalonnage est une méthode utilisée en chimie analytique pour déterminer la
concentration d'une solution d'échantillon inconnue. Il s'agit d'un graphique généré par des
moyens expérimentaux, avec la concentration de la solution sur l'axe des x et la variable
observable, par exemple l'absorbance de la solution, sur l'axe des y. La courbe est construite
en mesurant la concentration et l’absorbance de plusieurs solutions préparées, appelées
normes d’étalonnage. Une fois que la courbe a été tracée, la concentration de la solution
inconnue peut être déterminée en la plaçant sur la courbe en fonction de son absorbance ou
d'une autre variable observable.

Le but de TP :
Le but de ce TP est de déterminer la teneur du paracétamol dans le comprimé paralgan
500mg par UV-visible pour exploiter cette technique spectrométrie (méthode d’analyse).

Mode opératoire :
1.Préparation des solutions de référence :
_Préparer une gamme d’étalonnage par dilution de la solution mère (référence) de
paracétamol.

 Dans une fiole, mettre 25mg de matière première paracétamol et ajouter 25ml
d’éthanol (Solution mère).
 De cette solution mère, faire une dilution, et prélever 1ml de solution mère et ajouter
25ml d’éthanol.
 A partir de la solution diluée préparer la gamme d’étalonnage par prélèvement
successivement les volumes suivants : 0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1ml dans des fioles de
10ml et complèter au volume avec de l’éthanol.

2.Préparation de la solution échantillon :

_Prendre 10 comprimés de paralgan et mesurer le poids moyen.
_Broyer un comprimé (fine poudre) dans un mortier.

_Prendre 25mg de poudre paracétamol dans une fiole de 25ml et on ajouter l’éthanol
jusqu’à trait de jauge.
_Faire une dilution, prélever 1ml et ajoute l’éthanol (25ml), de cette solution diluée prélever
0,5ml dans une fiole de 10ml.

3.Proccédure d’UV-visible :
_Faire un balayage de 200nm à 400nm dans un spectrophotomètre UV-visible d’une solution
de référence de paracétamol et noter l’absorbance et longueur d’onde max.
_Vérifier la valeur obtenue à celle de la solution échantillon.
_Fixer la longueur d’onde max et déterminer les absorbances des différentes solutions
diluées de la gamme d’étalonnage et de l’échantillon.

Résultats et interprétation :
1.Tableau des concentrations des solutions de référence et les absorbances A :

Les volumes 0,2ml 0,4ml 0,6ml 0,8ml 1ml

(ml)
Les
concentrations 8×10-4 1,6×10-3 2,4×10-3 3,2×10-3 4×10-3
de solution de =0,0008 =0,0016 0,0024 =0,0032 =0,004
référence
(mg/ml)
Les
absorbances 0,066 0,210 0,201 0,249 0,331
(A)

 Calculs :

Solution mère : C1V1=C2V2

1×25=C2×25
C2= (1×25) /25

C2=1mg/ml

Solution diluée : C1V1=C2V2

1×1=C2×25
C2= (1×1) /25

C2=0,04mg/ml

Solutions de référence :

Solution 1 : C2V2=C3V3
 0,04×0,2=C3×10

C3=8×10-4mg/ml

Solution 2 : C2V2=C4V4
0,04×0,4=C4×10

C4=1,6×10-3mg/ml

Solution 3 : C2V2=C5V5
0,04×0,6=C5×10

C5=2,4×10-3mg/ml

Solution 4 : C2V2=C6V6
0,04×0,8=C6×10

C6=3,2×10-3mg/ml

Solution 5 : C2V2=C7V7
0,04×1=C7×10

C7=4×10-3mg/ml

2. D’après la courbe d’étalonnage, c’est une droite donc la loi de BEER LAMBERT est vérifiée
dans le domaine d’analyse.
Y=aX+b avec : b négligable.
3.Détermination graphiquement le coefficient d’absorption massique et molaire du
Paracétamol :

 Le coefficient d’absorption molaire :

On a : La loi de BEER LAMBERT : A = ε×ℓ×c

Avec : ℓ =1cm et ε×ℓ=a
Donc : A=a×C a : c’est la pente de la courbe d’étalonnage

a = (0,331-0,066)/ (4×10 -3-8×10-4)

a =82,81cm-1ml mg-1

 Le coefficient d’absorption massique :

On a : εm = ε/ ρ avec : ρ=m/V
Donc : εm = ε×v/m
D’où : εm= (82,81×25) /25,3

=82,71mg-1cm2

_Il représente la pente de la courbe d’étalonnage.

4. Détermination graphiquement la quantité du Paracétamol contenue dans la solution

diluée et en déduire la teneur du Paracétamol dans le médicament :

Solution échantillon : λmax=0,249

Absorbance=0,12
_Avec extrapolation sur la courbe d’étalonnage la concentration du Paracétamol dans la
solution diluée c’est : CX=1,45×10-3mg/ml= 0,00145mg/ml

 La teneur du Paracétamol dans le médicament :

CX=0,00145mg/ml

CX1 0,5ml
CX2 25ml
Avec : CX=0,00145mg/ml

Donc : CX2=0,0725mg/ml

CX2 1ml
CX3 25ml
Avec : CX2=0,0725mg/ml

Donc : CX3=1,8125mg/ml

CX3 25,3mg=P échantillon

X 5,8541g =Poids moyen
PM= 5,8541g=5854,1mg
Donc :

X=419mg

_La teneur du Paracétamol est de :419mg.

_La teneur du Paracétamol n’est pas dans les normes de conformité (500mg ±10%) car peut-
être il y a des fautes pendant la manipulation, les solutions sont pas précises.

5. On ne peut pas analyser toutes les molécules par la technique spectrométrique UV-
Visible.
Le cas où la technique est possible lorsque on a un chromophore et une solution coloré.
Dans le cas contraire, un moyen pour rendre l’analyse possible c’est la rendre complexe
(coloré la solution) donc il faut une coloration pour mettre une réaction de complexation.
6.Les avantages et les inconvénients de cette méthode d’analyse :

 Avantages :
_La spectrométrie UV Visible est une méthode d’analyse très facile, rapide, simple, fiable et
précise :1_5%e erreur.
_Elle est utilisée dans les différents produits ou bien large domaine d’application
(pharmaceutique, chimie analytique, minérale, organique, biochimie…) et 90% des analyses
médicales.
_Assurer la qualité et la conformité des produits par rapport aux spécifications techniques
préétablies par la pharmacopée.
_Une sélectivité largement adaptable : il existe souvent une longueur d’onde que seuls certains corps
à doser absorbent.

 Inconvénients :
_ Le principal inconvénient de l'utilisation d'un spectromètre UV-VIS est le temps qu'il prend
pour se préparer à en utiliser un (prend beaucoup du temps).
_Il faut nettoyer la zone de toute lumière extérieure, bruit électronique ou autres
contaminants extérieurs qui pourraient interférer avec la lecture du spectromètre .

Conclusion :
La spectrométrie UV Visible est très importante dans le domaine pharmaceutique, elle
permet d’assurer la qualité et la conformité du médicament.
Le dosage par spectrophotométrie est un dosage très utilisé dans la Pharmacopée et
généralement dans l'industrie Pharmaceutique. Beaucoup de principes actifs que l’on
retrouve dans les médicaments présentent dans leur structure des groupements chimiques
qui absorbent dans l’ultra-violet et qui peuvent ainsi être dosées.