25/03/2023

Chapitre 4
La spectroscopie

La spectroscopie est l'étude des rayonnements

électromagnétiques émis, absorbés ou diffusés par la
matière.

L'analyse des rayonnements en leurs différentes

fréquences s'effectue à l'aide de spectrographes ou de
spectromètres: elle permet d'obtenir leurs spectres
électromagnétiques.

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I- Spectre électromagnétique
Un spectre électromagnétique est la décomposition d'un
rayonnement électromagnétique en fonction de sa
longueur d'onde ou de sa fréquence ou de l'énergie de
ses photons.

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Par longueur d'onde décroissante, ce sont :

 les ondes radio, les ondes radar et les micro ondes

sont produites par des courants électriques haute
fréquence ;

 les ondes infrarouges, la lumière visible et le

rayonnement ultraviolet sont produits par des
transitions électroniques dans les atomes,
concernant les électrons périphériques

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a- La lumière visible:
appelée aussi spectre visible ou spectre optique est la partie
du spectre électromagnétique qui est visible pour l'œil
humain.

Généralement, on considère que la réponse de l'œil couvre

les longueurs d'ondes de 400 nm à 800 nm. Ces extrêmes
correspondent respectivement aux couleurs violet et rouge.

b-Le rayonnement ultraviolet (UV)

Les ultraviolets peuvent être subdivisés en UV proches

(380-200 nm de longueur d'onde) et ultraviolets extrêmes
(200-10 nm).

La gamme des rayons UV est souvent subdivisée en UV-A

(400-315 nm), UV-B (315-280 nm) et UV-C (280-10 nm).

Les ultraviolets sont nocifs pour la santé humaine et

provoquent le bronzage. Ils peuvent provoquer des cancers
cutanés tel que le mélanome, provoquer un vieillissement
prématuré de la peau (rides), des brûlures (coup de soleil)

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c-Le rayonnement infrarouge (IR)

La longueur d'onde de l'infrarouge est comprise entre

700 nm et 1000 μm,

Les infrarouges sont subdivisés en:

- IR proches (0,7-5 μm),
- IR moyens (5-30 μm),
- IR lointains (30-1 000 μm).

d- Les rayons X
sont produits lors des transitions électroniques. Ils sont par
exemple générés par radioactivité, par freinage d'électrons

e- Le rayonnement γ
est produit par la radioactivité lors de la désexcitation d'un
noyau. Ils sont donc en particulier émis par les matériaux
radioactifs et les réacteurs nucléaires.

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II- La spectrophotométrie

La spectrophotométrie est une méthode analytique

quantitative qui consiste à mesurer l'absorbance ou la
densité optique d'une substance chimique donnée en
solution. Plus cette espèce est concentrée plus elle
absorbe la lumière dans les limites de proportionnalités
énoncées par la loi de Beer-Lambert.

La densité optique des solutions est déterminée par un

spectrophotomètre préalablement étalonné sur la
longueur d'onde d'absorption de l'espèce chimique à
étudier.

1-Principe
Lorsqu’une lumière d’intensité I0 passe à travers une solution,
une partie de celle ci est absorbée par le(s) soluté(s).
L’intensité I de la lumière transmise est donc inférieure à I0.
On définit l’absorbance de la solution comme :

On parle aussi de transmittance définie par la relation :

L’absorbance est une valeur positive, sans unité.

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La relation de Beer-Lambert décrit que,

à une longueur d’onde λ donnée, l’absorbance

d’une solution est proportionnelle à la
concentration des espèces de la solution,

et à la longueur du trajet optique (distance sur

laquelle la lumière traverse la solution).

Ainsi, pour une solution limpide contenant une seule

espèce absorbante :

A λ : est l’absorbance ou la densité optique de la solution

pour une longueur d'onde λ ;
C: (en mol.L-1) est la concentration de l’espèce
absorbante ;
l: (en cm) est la longueur du trajet optique ;

:est le coefficient d’extinction molaire de l’espèce

absorbante en solution. Il rend compte de la capacité de
cette espèce à absorber la lumière, à la longueur d’onde λ.
(en mol-1.L.cm-1)

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2- Domaine UV-visible de la spectrophotométrie

Un soluté coloré ou chromophore absorbe la lumière

visible (longueurs d'onde comprises entre 400 et 800 nm).
On parle de spectrophotocolorimétrie ou plus simplement
de colorimétrie.
Certaines solutions absorbent dans l'ultraviolet (longueurs
d'onde inférieures à 400 nm), on parle alors de
spectrophotométrie UV.
Les infrarouges ne sont pas utilisés en spectrophotométrie
car ils dépendent surtout de la température de la solution
et non de sa concentration.

3-Spectrophotomètre:
Un spectrophotomètre mesure l’absorbance d’une solution à une
longueur d’onde donnée.
Un dispositif monochromateur permet de générer, à partir d’une
source de lumière visible ou ultraviolette, une lumière
monochromatique, dont la longueur d’onde est choisie par
l’utilisateur. La lumière monochromatique incidente d’intensité
traverse alors une cuve contenant la solution étudiée, et l’appareil
mesure l’intensité de la lumière transmise. La valeur affichée par le
spectrophotomètre est l’absorbance à la longueur d’onde
étudiée.

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Le spectrophotomètre peut être utilisé pour mesurer de

manière instantannée une absorbance à une longueur
d’onde donnée, ou pour produire un spectre d’absorbance
(spectrophotomètre à balayage).
Dans ce dernier cas, le dispositif monochromateur décrit
en un temps court l’ensemble des longueurs d’onde
comprises entre deux valeurs choisies par l’opérateur.

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4- Applications : Dosage colorimétrique

(Détermination d'une concentration inconnue)

Un dosage colorimétrique est possible lorsque qu'une

réaction chimique donne des produits colorés et si
l'intensité de la coloration est proportionelle à la
concentration de l'élément à doser. Les dosage
colorimétriques s'appuie sur la loi de Beer-Lambert.

Plus une solution est colorée, plus la lumière a du mal à

traverser, donc plus l'absorbance de la solution augmente.

Protocole général des dosages colorimétriques

- la réaction doit donner une coloration proportionnelle à la
concentration

-la coloration doit être stable le temps de faire les mesures

-le composé à analyser doit être dans des concentrations faibles

-la gamme étalon doit être réalisée dans les mêmes conditions
physico-chimique que les essais

-la longueurs d'onde du spectrophotomètre doit être celle qui

permet la plus forte absorbance possible

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Réalisation d'une gamme d'étalonnage

La gamme d'étalonnage permet de déterminer
une absorbance à une longueur d'onde donnée
pour une concentration en composé recherché.

Lors de la réalisation de la gamme, le volume de solution doit être

identique dans tout les tubes.

Un tube 0 ou blanc doit impérativement être réalisé pour annuler

l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes.

Lors de l'obtention des valeurs d'absorbances, il faut tracer la droite

d'absorption en fonction des quantités de composé par tubes.
Elle doit passer par l'origine du repère

Reportez à cette droite les valeurs d'absorbance de vos essais pour

en déterminer la quantité de composé présent.

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III- Spectroscopie de fluorescence

La spectroscopie de fluorescence, ou encore fluorométrie
ou spectrofluorométrie, est un type de spectroscopie
électromagnétique qui analyse la fluorescence d'un
échantillon.
Elle implique l'utilisation d'un rayon de lumière
(habituellement dans l'ultraviolet) qui va exciter les
électrons des molécules de certains composés et les fait
émettre de la lumière de plus basse énergie.

Deux types généraux d'instruments existent :

- les fluorimètres à filtre.
- les fluorimètres à monochromateurs

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la lumière d'une source d'excitation passe par un filtre ou un

monochromateur, puis par l'échantillon. Ici, une partie peut
être absorbée, induisant la fluorescence de certaines molécules
de l'échantillon. Une partie de la lumière de fluorescence est
ensuite concentrée sur un filtre ou un monochromateur, qui est
parfois placé à un angle de 90° par rapport à la lumière
d'excitation. La lumière est ensuite captée par un détecteur.

Des sources lumineuses diverses peuvent être utilisées

comme sources d'excitation, comme les lasers et des
lampes.

Le détecteur peut soit être mono-canal, soit multi-canaux.

Un détecteur mono-canal peut seulement détecter
l'intensité d'une seule longueur d'onde, alors que le multi-
canaux détecte l'intensité pour plusieurs longueurs
d'ondes simultanées

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