Institut des Mines de Marrakech

Département Chimie Industrielle

Spectrophotométrie

Introduction / Généralités :
- Le spectre électromagnétique est le classement des rayonnements
électromagnétiques par fréquence et longueur d'onde dans le vide. Le spectre
électromagnétique s'étend sans rupture de zéro à l'infini. On le divise en plusieurs
grandes classes, dans lesquelles le rayonnement s'étudie par des moyens particuliers.

- La spectroscopie ou la spectrométrie est l’étude expérimentale de l'interaction entre

la matière et l'énergie rayonnée, c’est une méthode analytique quantitative et
qualitative qui consiste à mesurer l'absorbance ou la densité optique d'une substance
chimique donnée, généralement en solution.
- La spectrophotométrie est le domaine qui étudie la mesure de l'énergie transportée
par les rayonnements électromagnétiques dans le domaine de la lumière visible.
- Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière dans les limites de
proportionnalité énoncées par la loi de Beer-Lambert.
- La densité optique des échantillons est déterminée par un spectromètre
préalablement étalonné sur la longueur d'onde d'absorption de la substance à étudier.

Principe
Lorsqu’une lumière d’intensité I0 passe à travers une solution, une partie de celle-ci est
absorbée par le(s) soluté(s). L’intensité I de la lumière transmise est donc inférieure à I0. On
définit l’absorbance A de la solution comme :
A = Log (I0/I)
On parle aussi de transmittance T définie par la relation :
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T = I/I0 c'est-à-dire que A = - Log T.

L’absorbance est une valeur positive, sans unité. Elle est d’autant plus grande que l’intensité
transmise est faible.
La relation de Beer-Lambert décrit que, à une longueur d'onde λ donnée, l’absorbance d’une
solution est proportionnelle à sa concentration C, et à la longueur du trajet optique L (distance
sur laquelle la lumière traverse la solution).
Alors, pour une solution limpide contenant une seule substance absorbante :
Ai = ɛi . L . Ci

• Ai est l’absorbance ou la densité optique (sans unité) de la solution

pour une longueur d'onde λ ;
• Ci (en mol.m−3) est la concentration de la substance absorbante ;
• L (en cm) est la longueur du trajet optique ;
• ɛi (en m3.mol−1.cm−1) est le coefficient d’extinction
molaire (absorptivité molaire) de la substance absorbante en solution.
Il rend compte de la capacité de cette substance à absorber la lumière,
à la longueur d'onde λ.
Selon la loi de Beer-Lambert, l'absorbance est additive (mais non la transmittance). Ainsi, pour
une solution contenant plusieurs substances absorbantes, l’absorbance de la solution est la
somme de leurs absorbances. Pour n substances absorbantes :
An = ∑Ai

Un soluté coloré absorbe la lumière visible (longueurs d'onde comprises entre 400 et 800 nm).
Certaines solutions absorbent dans l'ultraviolet (longueurs d'onde inférieures à 380 nm), on
parle alors de spectrométrie UV. Les infrarouges ne sont pas utilisés en spectrométrie car ils
dépendent surtout de la température de la solution et non de sa concentration, ils sont plutôt
couverts par la spectroscopie en infrarouge. La spectrophotométrie est plus spécifique que
la spectroscopie qui couvre d'autres longueurs d'onde du spectre électromagnétique.

Spectromètre

Schéma de principe du spectromètre UV-visible monofaisceau

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Un spectromètre mesure l’absorbance d’une solution à une longueur d'onde donnée. Un

dispositif monochromateur permet de générer, à partir d’une source de lumière
visible ou ultraviolette, une lumière monochromatique, dont la longueur d'onde est choisie
par l’utilisateur. La lumière monochromatique incidente d’intensité I0 traverse alors une cuve
contenant la solution étudiée, et l’appareil mesure l’intensité I de la lumière transmise. La
valeur affichée par le spectrophotomètre est l’absorbance à la longueur d'onde étudiée.
N.B. : L’absorbance étudiée ne doit dépendre que de l’espèce colorée à analyser : il faut donc
éliminer toutes les autres causes d’absorption, liées à la cuve, au solvant, aux autres espèces
en solution, etc… En pratique, on procède à un réglage de zéro à l’aide d’une cuve contenant
le solvant et les espèces autres que celle à étudier : cette solution s’appelle le blanc. Le blanc
doit être fait chaque fois que la longueur d’onde d’étude est changée.

Applications

1- Détermination d'une concentration inconnue

Connaissant le spectre d'absorption d'une substance chimique, on peut mesurer, à l'une de
ses longueurs d'onde λmax (là où l'absorption est maximale) les variations de l'intensité I d'un
faisceau lumineux traversant une même épaisseur L de solutions de concentrations diverses.
Ceci permet d'établir expérimentalement la courbe A = f(C) reliant l'absorbance et la
concentration de la substance étudiée (avec L = 1 cm), en effectuant les mesures de A pour
diverses concentrations. Cette courbe est une courbe d'étalonnage.
La courbe expérimentale d'étalonnage permet ensuite de déterminer la concentration
inconnue d'une solution de cette substance par simple mesure de son absorbance et report
sur le graphe A = f(C).
La loi de Lambert-Beer a des limites. Elle n'est linéaire que dans un intervalle de
concentrations réduit regroupant des valeurs inférieures à 10 −2 mol.L−1.
N.B. : On se place à la longueur d’onde max correspondant au maximum d’absorption afin
d’obtenir la plus grande précision pour le dosage. Pour cela, on trace le spectre d’absorption
d’une solution contenant le soluté à étudier et on détermine graphiquement max.
2- Suivi de la cinétique d'une réaction chimique (Dosage spectroscopique)
Lorsqu'au cours d'une réaction chimique dont on veut étudier la cinétique de l'une des
substances chimiques en solution, on peut par spectrophotométrie d'absorption suivre la
concentration de cette substance (généralement colorée). Si cette substance est un réactif,
l'absorbance de la solution diminue au cours du temps. Si au contraire, c'est un produit de la
réaction, l'absorbance de la solution augmente au cours du temps.
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Annexe :

Longueurs d’onde des couleurs dans le spectre Cercle chromatique (Couleur absorbée VS. Couleur
visible. observée)

Techniques de spectroscopie électromagnétique par domaine de longueur d'onde

Domaine de Longueur
Type de spectroscopie Commentaires
longueur d'onde d'onde

Liaison chimique, conformation

Spectroscopie de résonance
moléculaire, distances
magnétique nucléaire
interatomiques

Radiofréquence > 100 µm Résonance paramagnétique Entités paramagnétiques

électronique (radicaux, espèces transitoires…)

Aimantation matériaux
Résonance ferromagnétique
ferromagnétiques

Structure petites molécules (eau,

ozone, chlorure d'hydrogène
Micro-ondes > 30 µm Spectroscopie rotationnelle
gazeux...) avec une haute
précision

Infrarouge Spectroscopie infrarouge

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Spectroscopie proche infrarouge

De 1 à une Groupements fonctionnels d'une
vingtaine de molécule organique, liaisons
µm chimiques, structure de la molécule
Spectroscopie vibrationnelle

Spectroscopie ultraviolet-visible
Dosage des composés organiques
conjugués et métaux de transition
Spectrophotométrie

Fréquences des modes de

Spectroscopie Raman vibration du cristal/de la molécule,
énergie des ondes de spin

Visible et ultraviolet 102 nm

Spectroscopie de fluorescence
Spectroscopie de corrélation de
fluorescence
Molécules fluorescentes,
environnement local de la molécule
(conformation et interactions)

Constantes élastiques et
Spectroscopie Brillouin caractéristiques magnétiques d'un
matériau (aimantation, échange…)

Spectrométrie d'absorption des EXAFS : environnement local d'un

rayons X (EXAFS et XANES) atome, distances avec les plus
proches voisins

XANES : état d'oxydation,

coordinence
Spectrométrie photoélectronique XPS : composition chimique à la
X (XPS) surface d'un matériau (état
Rayons X < 100 nm
d'oxydation, quantification
d'éléments…)

Spectrométrie de fluorescence
Quantification d'éléments
des rayons X classique et
chimiques
en réflexion totale
Quantification d'éléments
Microsonde de Castaing chimiques (analyse locale de
l'ordre de 1 µm3)
Spectrométrie gamma Éléments radioactifs
Rayons gamma 0.01 nm
Spectroscopie Mössbauer État d'oxydation, ordre magnétique