Svt question

1. Le gène transféré provient probablement d'une méduse (Aequorea victoria) et code

pour la protéine fluorescente GFP. Il est transféré à une bactérie, généralement
Escherichia coli.

2. Le matériel génétique d'une bactérie est constitué d'ADN circulaire, formant un

chromosome unique. On va transférer un plasmide étranger, généralement porteur de
gènes spécifiques.

3. Une fois l'expérience terminée, on s'attend à observer des colonies bactériennes

fluorescentes sous lumière UV en raison de l'expression du gène GFP contenu dans le
plasmide transféré.

4. On travaille en conditions stériles pour éviter la contamination des

échantillons. Les règles incluent l'utilisation de vêtements de protection, de
surfaces désinfectées et de matériel stérile. Il faut éviter d'ouvrir inutilement
les récipients et de toucher des surfaces non stériles.

5. Les règles de sécurité pendant ce TP incluent le port d'équipements de

protection individuelle, la manipulation prudente des produits chimiques et la
connaissance des procédures d'urgence.

6. On marque les tubes avec des inscriptions pour identifier les échantillons. Les
inscriptions peuvent inclure la date, le type d'échantillon, ou d'autres
informations pertinentes à l'expérience.

7. Les quantités prélevées dépendent du protocole spécifique de votre expérience.

Vérifiez le protocole pour des informations précises sur les quantités à prélever à
chaque étape.

8. La solution de transformation facilite l'entrée du matériel génétique étranger

(comme un plasmide) dans les cellules. Elle rend les cellules compétentes à
accepter le matériel génétique.

9. Le nombre de colonies bactériennes prélevées et d'ensemenceurs stériles utilisés

dépend également du protocole spécifique. Consultez-le pour des détails précis.

10. L'ADN plasmidique est ajouté dans le tube lors de l'étape 5. Un nouvel
ensemenceur stérile est utilisé à cette étape.

11. La durée d'incubation des tubes sur la glace lors de l'étape 6 dépend du
protocole. Consultez les instructions spécifiques.

12. Chaque boîte de Pétri contiendra différents milieux de culture :

- Boîte LB/amp/+pGLO : contenant antibiotique et gène fluorescent.
- Boîte LB/amp/ara/+pGLO : contenant antibiotique, arabinose et gène
fluorescent.
- Boîte LB/amp/-pGLO : contenant uniquement antibiotique.
- Boîte LB/-pGLO : contrôle sans antibiotique ni gène fluorescent.

13. On crée un choc thermique en alternant entre des températures élevées et basses
pour faciliter l'incorporation du plasmide dans les cellules.

14. Le milieu nutritif est ajouté à l'étape 9 dans une boîte de Pétri. Le nombre de
pipettes stériles utilisées dépend du protocole. Attendez le temps spécifié dans
des conditions appropriées.

15. Le nombre de pipettes stériles utilisées à l'étape 10 dépend du protocole.

16. Le nombre d'ensemenceurs stériles utilisés à l'étape 11 dépend du protocole.
Ils servent à transférer les échantillons dans les boîtes de Pétri.

17. Pour finir, respectez les conditions de sécurité, notamment le nettoyage

approprié du matériel et la disposition correcte des déchets, conformément aux
règles établies.