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net/publication/366275128
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Khedidja Benarous
Université Amar Telidji Laghouat
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All content following this page was uploaded by Khedidja Benarous on 14 December 2022.
1. Les CP possèdent des activités biologiques : 2. L’extraction des CP s’effectue selon 2 méthodes :
a. antioxydants; a. à chaud et en présence d’un gaz ;
b. antiradicalaires; b. à chaud et à froid ;
c. anticancéreux. c. à froid en présence de l’azote liquide;
d. inhibiteurs d’enzymes. e. nécessite seulement 2 types de solvants.
3. Le choix de la méthode d’extraction des CP dépend 4. le rendement de chaque méthode est différent
de plusieurs facteurs : car:
a. selon la plante utilisée; a. la chaleur active l’extraction;
b. selon la nature de solvant; b. le froid accélère l’extraction;
c. ne dépend pas d’un facteur bien déterminé; c. l’existence des réactions chimiques
spécifiques
d. la structure des CP est différente.
Exercice 2 : Calcul des rendements d’extraction
Dans le but de comparer les rendements d’extraction entre les solvants et en appliquant les deux
méthodes d’extraction, nous avons choisi une plante locale, la broyer finement et après nous
avons suivi ce protocole d’extraction :
5 g de la plante a été macérée avec l’hexane pendant 24 h, après le même résidu est macéré avec
dichlorométhane pendant 24 h, après l’acétone et finalement le MeOH.
Le filtrat obtenu est évaporé à sec et le résidu obtenu est pesé pour calculer les rendements
d’extraction.
50 g de la plante a été met dans la cartouche et lancer une extraction par soxhlet, nous avons suivi
le même ordre des solvants ainsi la même procédure de calcul.
- Les différentes masses des résidus obtenus sont présentés dans le tableau suivant :
Dans le but d’étudier l’effet des systèmes de solvants sur la teneur en phénols totaux et
flavonoïdes, nous avons opté ce protocole d’extraction.
Une quantité de 5 g d’une plante médicinale locale a été macérée dans 3 systèmes de solvants
différents pendant 24 h, après chaque filtrat est évaporé à sec pour laisser que la phase aqueuse
dont elle est délipidée et dépigmentée par l’hexane, extraite par l’acétate d’éthyle (Ac-O-Et) et
finalement par le butanol (BuOH) et finalement la phase aqueuse (Tableau 1).
Dosage des phénols totaux selon la méthode de Singleton et Ross (Folin-Ciocalteu) (voir
cours)
- Le phénol standard utilisé pour établir la courbe d’étalonnage est l’acide gallique et les
absorbances sont représentés dans le tableau 2.
- Tableau 2. Les absorbances des solutions diluées de l’acide gallique.
C (g/l) 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
Abs 0,000 0,224 0,403 0,573 0,722 0,937 1,051 1,142 1,235 1,276 1,289
- Tracer la courbe d’étalonnage de l’acide gallique et calculer son coefficient d’extinction « ε ».
- Les extraits ont été dosés après dilution et les différents absorbances sont représenté dans le
tableau 3.
Facteur de
Système de solvant Abs C (en phé tot) (g/l) C(mg/g)
dilution
MeOH/EAU (Ac-O-
0,455 15
Et)
MeOH/EAU(BuOH) 0,647 20
MeOH/EAU (Ø
0,442 15
aqueuse)
EtOH/Eau (Ac-O-Et) 0,695 20
EtOH/Eau(BuOH) 0,640 15
EtOH/Eau (Ø
0,319 20
aqueuse)
Acétone/Eau (Ac-O-
0,711 20
Et)
Acétone/Eau(BuOH) 0,632 20
Acétone/Eau (Ø
0,177 10
aqueuse)
Compléter le tableau.
Commenter.
I II
Les valeurs des longueurs d’onde sont : 258, 253, 370 et 362 nm
- Même question pour les deux composés III et IV suivants :
III IV
Les valeurs des longueurs d’onde sont : 251, 245, 328 et 342 nm
Exercice 2 :
Un flavonoïde a pour structure chimique suivante :
1. Les alcaloïdes (alk) possèdent des activités 2. L’extraction des (alk) s’effectue selon 2
biologiques : méthodes :
a. Traitement de la goutte ; a. selon Ross et Rain ;
b. Analgésique; b. à chaud et à froid ;
c. anticancéreux. c. à froid en présence de l’azote liquide;
d. inhibiteurs d’enzymes. e. nécessite seulement l’éthanol.
3. Le choix de la méthode d’extraction des (alk) 4. le rendement de chaque méthode est différent
dépend de plusieurs facteurs : car:
a. selon la plante utilisée; a. la chaleur active l’extraction;
b. selon la nature de solvant; b. le froid accélère l’extraction;
c. ne dépend pas d’un facteur bien déterminé; c. l’existence des réactions chimiques
spécifiques
d. la structure des CP est différente.
Le Datura stramonium est une plante toxique connue depuis l’antiquité. Sa toxicité est due aux
alcaloïdes tropaniques que renferme la plante dans toutes ses parties.
L’extraction des alcaloïdes totaux à partir des graines sont obtenues par une extraction liquide-
liquide. 100 g de graines sèches de la plante, sont finement broyées par un broyeur électrique. La
poudre obtenue est délipidée par 250 ml d’éther de pétrole par macération et sous agitation
mécanique, à température ambiante pendant 3heures. Après filtration, la marc (graines moulues
débarrassées de la matière grasse) est alcalinisée par une solution 40 ml d’ammoniaque (0.5N)
pendant au moins 8 heures à température ambiante, permettant ainsi aux alcaloïdes, de passer de
la forme sel en forme organique. La poudre alcalinisée est placée dans une cartouche en cellulose,
celle-ci est placée à son tour dans l'appareil de Soxhlet. Ce dernier est monté sur un ballon
contenant 250 ml de dichlorométhane. Les alcaloïdes en première étape sont extraits à chaud sous
reflux par 250 ml de dichlorométhane pendant 3 à 4 heures (au moins 5 cycles sont nécessaires
pour un épuisement total des graines). A l’issue de cette opération, l’extrait brut est passé à la
purification par une extraction trois successives par une solution de 150ml d’acide sulfurique
(0.5N), les trois fractions sont reprises dans une ampoule à décantation, alcalinisées jusqu’à pH 9
par ajout de quelques ml d’ammoniaque (0.5N). Nous épuisons ensuite trois la solution par 150ml
de chloroforme, en agitant doucement l’ampoule à chaque fois. Nous récupérons les trois fractions
organiques dans un Erlenmeyer, qui seront déshydratées par filtration sur papier filtre soutenant
du sulfate de sodium anhydre. L’extrait recueilli dans un bêcher taré est évaporé à sec sur plaque
chauffante. Après refroidissement, nous pesons à nouveau le becher. Le résidu sec représente les
alcaloïdes totaux dont sa masse obtenu est de 0.07 ±0,0245 g.
La chromatographie analytique a été utilisée pour vérifier la présence des alcaloïdes au moins
majoritaires atropine et scopolamine dans l’extrait. Des plaques de CCM prêtes à l’emploi, de gel
silice 60F – Merck sur support d’aluminium de marque Macherey-Nagel avec des dimensions 20
x 20 cm ont été utilisées. La phase mobile utilisée est méthanol/chloroforme/ammoniaque:
80/20/1,5 (V/V/V). Nous avons fait dissoudre l’extrait dans 1 ml de méthanol. Les témoins
utilisés (sulfate d'atropine monohydrate et scopolamine hydrochloride), se présentent sous forme
de poudre blanche provenant de la firme «FLUKA - USA».
Après dissolution des témoins et de l’extrait dans du méthanol, nous déposons 10 μl de chaque
solution (témoins et extrait) à l’aide d’une micropipette sur la plaque, préalablement activée dans
une étuve à 110°C pendant 3 à 5 min, à 1 cm du bord inférieur sur la ligne de base .Chaque dépôt
est séché à l’aide d’un sèche-cheveux. La plaque est ensuite mise dans la chambre de migration
contenant la phase mobile. A la fin, les chromatogrammes sont retirés séchés et pulvérisés avec le
réactif de Dragendorff jusqu’à l’apparition des spots colorés, selon la méthode légèrement
modifiée de Kurt (1971). Le chromatogramme est montré ci-dessous :