Option : BAPV

Module : Biodiversité et métabolisme secondaire

des plantes

TP Criblage phytochimique
des metabolites secondaires

NOM ET PRENOM :
ADNANI FATIMA EZZAHRAE
N apogée 2024779
AHMIDOU MARIEM
N apogée 1719363
GROUPE: 01

Année : 2022-2023
Introduction
Les métabolites secondaires sont des composés phytochimiques produisent par les plantes mais sont
pas impliqués directement dans les processus vitaux de bases (croissance, la division cellulaire, la
respiration, la photosynthèse, reproduction), contrairement aux métabolites primaires. Les métabolites
secondaires vont avoir des fonctions spécifiques en réponse à une adaptation à un environnement.
Certains des principaux rôles pour la plante sont :
 La protection des plantes contre ravageurs et pathogènes
 L’allélopathie (compétition plante-plante)
 La symbiose plante-microbe au niveau des nodules racinaires
 La couleur, l’odeur et le gout. Ils peuvent donc servir d’attractifs pour les pollinisateurs.
Les métabolites secondaires sont composés de plusieurs catégories, Parmi ces composés on trouve les
alcaloïdes et les flavonoïdes.
1-Principe et but du TP
Ce TP vise à mettre en évidence la présence de certains métabolites secondaires dans des
Plantes médicinale à l’aide des tests phytochimiques et également apprendre à faire une
Chromatographie sur couche mince (CCM).

2-Méthodes utilisés
Le TP concernent le criblage phytochimique qui permet la détection des principales familles
chimiques des métabolites secondaires à une façon quantitative ,On fait deux tests différents.
Test basé sur la formation de complexes insolubles=>réactions de précipitation [caractérisation des
alcaloïdes]
Test basé sur la formation de complexes colorés=>réaction de coloration [caractérisation des
flavonoïdes]
Remarque: Le criblage phytochimique en renseigne pas sur a structure chimique d’une molécules
bien déterminée mais permet seulement la mise en évidence de la présence ou l’absence d’une famille
chimique pouvant contenir des composes de structures voisines et présentant un ou plusieurs
caractères communs.
3- Matériels et Mode opératoire
3.1- Les alcaloïdes
a)-Extraction , caractérision et identification des alcaloïdes
Extraction des alcaloïdes est une extraction liquide-liquide
Caractérisation se fait par le réactif dragendorff
Identification des alcaloïdes se fait par la chromatographie sur couche mince
Matériel
Erlenmeyer, bécher , agitateur, une ampoule à décanter , Entonnoir ,coton ballon à fond rond, pissette
,Tube à essai ,éprouvette graduée , pipette, pipette Pasture, couche mince, une cuvette.
Mode opératoire
On a mis 5 g de la plante (camomille ou bien mandragore) pulvérisée dans un erlenmeyer,
Après on a ajouté 50 ml d’H2SO4 (0,1 N). L’ensemble est agité pendant 10 min, après l’agitation la
solution obtenue est filtrée dans un autre erlenmeyer puis on a alcalinisé l’extrait avec une solution
d’ammoniaque jusqu’à PH9, ensuite on a mis l’extrait dans une ampoule Avec 50 ml de
dichlorométhane après on a laissé la solution décanter jusqu'à l’obtention de deux phases dont une
aqueuse (en haut) et l’autre organique (en bas). La phase organique est introduite dans un erlenmeyer
tandis que la phase aqueuse est rejetée, et pour éliminer tous qui est aqueux on a refait la décantation
une deuxième fois pour la phase organique jusqu’à l’obtention d’une phase aqueuse en haut et une
autre organique en bas, cette dernière est introduite dans un petit erlenmeyer puis on a séché cette
phase avec du sulfate de sodium anhydre et après on a filtré la solution sur papier. Après que le ballon
vide et pesé on y introduit, le filtrat qui va s’évaporer sous vide à sec,puis on a repesé le ballon
contenant l’extrait ensuite 1ml de méthanol est ajouté, enfin 2 ml d’ H2SO4 (0,5 N) et quelques
gouttes du réactif de Dragendorff sont ajoutées à 0,5 ml de l’extrait méthanolique (MeOH) .

Figure1 illustration de protocole expérimental

H2SO4: réagi avec les alcaloïdes et se précipites pour donner sel.

Ammoniaque: alcalinisez le PH pour rendre les alcaloïdes solubles.
Dichlorométhane : se fixe avec les alcaloïdes et le ronde plus dense et le séparée de la phase
aqueuse qui moins dense.
 Chromatographie sur couche mince :
Sur un plaque de gel de silice et en présence de deux témoins des alcaloïdes (la scopolamine &
l’atropine) on a piqué 15 µl de chaque extrait de chaque plante donc on aura dans l’ensemble deux
extraits ; un pour la camomille et l’autre pour la mandragore.
La plaque est mise dans une cuvette contenant l’éluant (l’acétone-eau-ammoniaque [90-7-3]),
après la migration la plaque est mise sous la lampe UV à 365 nm pour pouvoir observer
les tâches sur la plaque puis on a vaporisé la plaque avec le réactif de Dragendorff et
enfin les alcaloïdes sont apparus orange-marron.
3.2-Les flavonoïdes
a)-Extraction et caractérisation
Pour extraire les flavonoïdes on a mis 5 g de la plante (camomille ou mandragore) pulvérisée sont
introduites dans un erlenmeyer avec 40 ml du méthanol, l’ensemble est agité avec chauffage pendant
10 min après on a filtré l’extrait dans un erlenmeyer puis on a ajouté 5 ml d’alcool à 50 % et 1 ml
d’HCL concentré plus quelques copeaux de magnésium dans 1 ml de l’extrait.

1ml d’extrait + 4ml d’alcool +

1ml d’Hcl + Mg++

Réaction de cyanidine

Figure2 illustration de protocole expérimental

-Le milieu chaud et très acide [méthanol] pour favorisée l’extraction des flavonoïdes
-Le solvant utilisé dans l’extraction des flavonoïdes est l’alcool à 50% qui présente un
Caractère polaire et on sait que les flavonoïdes sont aussi polaires donc ils sont solubles
Dans l’alcool.
La réaction de cyanidine :
Les composés flavoniques sont réduits en présence d'un acide concentré et de
Magnésium. Après élimination d'une molécule d'eau, le produit de réduction conduit à
Des anthocyanidines de couleur rouge-orange.
3-Résultats
3.1-Réaction de dragendorff
 Une réaction positive de dragendorff permet d’avoir un précipites rouge-orange en présence
des alcaloïdes.
 A partir de figure on remarque la présence d’une précipite dans l’extrait de l’mandragore
C’est une réaction positive qui indique la présence des alcaloïdes. Chez la camomille on a une
Réaction négative, donc ne contient pas des alcaloïdes ou il renferme un peu.
3.2- Chromatographie sur couche mince

Scopolamine

Atropine
mandragore

Camomille

 Calcule de Rf atropine = 2.4/8.2=0.29 ; Rf scopolamine= 0.68

Les Rf des Taches de mandragore : Rf1= 0.30 ; Rf2= 0.68cm
La figure ci-dessus montre les présences des trois taches dans la mandragore ce qui
renseigne la présence de deux type des alcaloïdes qui sont la scopolamine et l’atropine . Tandis
que la camomille ne le contient pas ou en faible quantité.
3.3-Réaction de la cyanidine

camomille mandragore

A partire la figure on remarque la présence d’une coloration rouge orangé dans le tube qui contient la
camomille, donc cette plante renferme les flavonoïdes, tandis que on a réactions négative dans le tube
qui contient la mandragore, ce qui indique l’absence des flavonoïdes ou renferme un peu
 4-Discussion et conclusion

A partir de l’exploitation de l’ensemble de résultats de TP, on peut conclure d’une part que
la mandragore est une plante médicinale caractérisé par la richesse en alcaloïdes de type atropine et
scopolamine, ceci est démontré grâce réactions dragendroff et la méthode de chromatographie sur
couche mince. En revanche cette plante ne contient pas des flavonoïdes (réaction négative de
cyanidine ). D’autre part la camomille est plante médicinale qui se caractérise par la richesse en
flavonoïdes comme il est montré par la réaction positive avec la cyanidine, tandis que cette plante il
est pauvre en alcaloïdes, car leurs extraits ne réagit pas avec la dragendroff et absence de taches dans
la chromatographie sur couche mince.

 Règne : végétal
 Division : Magnoliophyta
 Classe : Magnoliopsida
 Ordre : Solanales
 Famille : Solanacées
 Genre : Mandragora
 Nom binominal : Mandragora autumnalis
Mondragore

 Règne : Végétal
 Division : Magnoliophyta
 Classe : Magnoliopsida
 Ordre : Asterales
 Famille : Astéracées
 Genre : Matricaria
 Nom binominal : Matricaria chamomilla
Camomille
Les alcaloïdes sont des substances organiques qui sont principalement d'origines végétales. On les
retrouve dans les plantes comme Mandragore . Leur particularité est qu’elles contiennent toutes au
moins un atome d'azote dans la molécule. Ces substances peuvent avoir une puissante action toxique et
néfaste pour l’organisme et/ou stimulante voire thérapeutique, sont des composés qui sont extraits de
plantes [ex la mandragore] et qui sont utilisés dans de nombreux cas et pour diverses raisons :
antalgiques, antipaludéen, substances paralysantes, poisons ou encore en tant que stupéfiants. On les
retrouve, sans le savoir, au quotidien dans de nombreux cas. Elles ont un coté stimulant non
négligeable mais sont aussi des substances toxiques aux effets néfastes pour l’organisme. Tell que La
scopolamine et l’atropine, ont été utilisée pour lutter contre la maladie de Parkinson avant d'être
remplacée par les anti-parkinsoniens de synthèse tels que la L-Dopa. Actuellement, elle est utilisée
dans le traitement symptomatique de certaines douleurs digestives et gynécologiques, en soins
palliatifs, ainsi que dans la prévention du mal des transports.
Les flavonoïdes sont des substances présentes dans les plantes comme camomille . Ils sont à l’origine
des teintes brunes, rouges et bleues des fleurs et des fruits. Certaines plantes sont réputées pour leur
richesse en flavonoïdes : par exemple,camomille, le raisin, les oignons, les pommes, le cacao…
Certains flavonoïdes protègent les végétaux des bactéries, des virus et des moisissures. Les
flavonoïdes ont d’abord été appelés, à tort, vitamine P. Ils sont également connus sous de nombreux
autres noms, tels que bioflavonoïdes, polyphénols, proanthocyanidines, catéchines ou flavonols.
Les flavonoïdes viennent essentiellement de leurs qualités anti-inflammatoires, immunostimulantes,
anti oxydantes. Ils renforcent considérablement tous les vaisseaux sanguins et améliorent ainsi la
circulation. Quand il s’agit de protéger la paroi vasculaire, de la fortifier et de préserver sa résistance,
rien de tel que l’utilisation du pycnogénol issu de l’écorce de pin des Landes.

Scopolamine, squelette carboné des alcaloïdes

Le 2-phénylchromane, squelette carboné

des flavonoïdes .