Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Polycopeboudoukha Enzymo Cours
Polycopeboudoukha Enzymo Cours
DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE
Cours de:
Enzymologie Appliquée
Cours destiné aux étudiants de:
0
CONTENU DE LA MATIERE
1. Introduction…………………………………………………………………….2
2. Rappel de la cinétique enzymatique…….………………………………………4
3. Enzymes immobilisée………..……………………………………………….....13
3.1. Propriétés des enzymes immobilisées.………………………………...........13
3.2. Méthodes d’immobilisation ………….……………………………………14
4. Modification chimique…………………………………………………….……22
4.1. Solubilité en milieu organique………………………………………..........22
4.2. Transformation de la catalyse………………………………………….......23
5. Domaines d’application des enzymes……………………………………….......24
5.1. Applications agro-alimentaires……………………………………………..24
5.2. Applications médicale et pharmaceutique…………………………………28
5.3. Applications industrielles……………………………………………..……32
6. Production des enzymes……………………………………………………........34
7. Enzymes arificielles……………………………………………………….…......37
Conclusion…………………………………………………………………… ..….39
Références……………………………………………………………………........40
1
1. Introduction
En effet, les enzymes sont susceptibles de catalyser une grande variété de réactions
conduisant à des fonctions aussi diverses que les alcools, les hydroxyacides, les acides
aminés, les aldéhydes ou les cétones. Là où les synthèses chimiques classiques nécessitent
souvent plusieurs étapes de catalyses, d’extractions et de purifications, les synthèses
enzymatiques permettent l’obtention de composés complexes, en une seule étape, le plus
souvent en milieu aqueux. De plus, elles fonctionnent à température et pression ambiante, ce
qui diminue le coût énergétique d’un procédé de synthèse. A l’heure actuelle, ce type de
catalyse est appliqué à la préparation de synthons pharmaceutiques, de compléments et
d’additifs alimentaires, de produits cosmétiques ou encore d’herbicides ou d’insecticides.
2
le but d’améliorer leurs propriétés et les conditions optimales de la catalyse enzymatique et
enfin la production a grande échelle a des fins appliquées.
3
2. Rappel de la cinétique enzymatique
2.1. Définition et généralités
Les enzymes, catalyseurs biologiques des organismes vivants, sont des
macromolécules majoritairement de nature protéique et chirale. Elles sont constituées de
plusieurs acides α-aminés de la série L unis entre eux par une liaison formée par condensation
entre le groupement carboxyle d’un acide aminé et le groupement amine d’un autre acide
aminé afin de former une liaison amide. Les enzymes sont donc des polypeptides de masses
moléculaires élevées entre 10 à 1 000 kDa. L’ordre, dans lequel sont arrangés les acides
aminés, constitue ce que l’on appelle la structure primaire des enzymes (figure 1).
Ces protéines vont avoir tendance à se replier sur elles-mêmes afin de former des
arrangements secondaires principalement en hélices α et en feuillets β (figure 2); cette
structure est stabilisée grâce à la génération de liaisons hydrogènes.
4
Figure 2. Représentation schématique de la structure secondaire d'une protéine.
L’arrangement de ces structures secondaires les unes par rapport aux autres forme une
structure tertiaire qui, elle, sera stabilisée par des ponts disulfures (figure 3).
Une structure quaternaire peut même être décrite pour les très grosses enzymes (figure
4). Cette structure tridimensionnelle de l’enzyme lui donnera sa spécificité permettant à celle-
ci de reconnaitre un substrat en particulier via une région distincte de l’enzyme, appelée le site
actif.
5
Figure 4. Représentation schématique de la structure quaternaire d'une protéine (la glucose
deshydrogénase.
EC 1 : Oxydoréductase
6
Tableau 1. Classification des enzymes.
Les réactions chimiques dans les cellules sont faites par des enzymes. Les mesures
cinétiques sont parmi les outils les plus puissants pour élucider les mécanismes enzymatiques.
C'est donc un des aspects les plus importants de l'enzymologie; ces mesures nous informent
7
Il a donc proposé que la réaction globale est composée de deux réactions élémentaires
le substrat forme d'abord un complexe avec l'enzyme, puis ce complexe se décompose en
produit et enzyme, où E, S, ES, et P symbolisent l'enzyme, substrat, le complexe enzyme-
substrat et le produit, respectivement
8
- La vitesse de production de ES est la différence entre les vitesses des deux réactions
élémentaires décrivant la formation de ES et sa disparition:
- Cette équation différentielle ne peut pas être intégrée de façon explicite pour tous les
cas sans des approximations qui la simplifient:
1. Équilibre rapide
En 1913, Léonure Michaelis et Maud Menten ont fait l’approximation que k-1
>> k2 pour que la première étape de la réaction soit toujours en équilibre rapide.
Donc, KS = k-1 / k1 = [E][S] / [ES] qui est la constante de dissociation du
substrat de l'enzyme. Le complexe non-covalent ES entre enzyme et substrat est connu
par le nom de complexe Michaelis.
2. État stationnaire
La concentration d’ES est relativement constante pendant la majorité de la réaction, si [S] >>
[E] (figure 5). Ceci implique que la vitesse de formation de ES doit être égale à sa disparition.
Par conséquent, d[ES]/dt = 0.
Désignation connue sous forme d'approximation de l'état stationnaire proposé d'abord
par Briggs et Haldane en 1925. L'approximation de l'état stationnaire en assumant que la
réaction est à l'état stable, c'est-à-dire que [ES] est stable est moins restrictive que celle de
Michaelis-Menten et sera utilisée dans le développement de la relation entre [S] et v.
9
Figure 5. Courbe d’évolution. L’évolution des composés lors d’une réaction de Michaelis-Menten
simple. A l’exception de la phase transitoire de la réaction, qui précède le rectangle ombré, les pentes
des courbes d’évolution de [E] et [ES] sont pratiquement égales à 0 tant que [S] >> [E]T (à l’intérieur
du rectangle ombré).
10
2.4. Facteurs affectant l’activité enzymatique
1. Effet de la température
2. Effet du pH
Les enzymes sont très sensibles aux variations du pH et fonctionnent bien sur une
gamme limitée du pH. Les mesures de nombreuses activités enzymatiques en fonction du pH
donnent des courbes qui passent par un maximum, montrant ainsi l'existence d'un pH
optimum. Le pH peut agir sur plusieurs facteurs : - l'ionisation des résidus de l’enzyme et du
substrat et/ou du produit - la structure tertiaire des protéines et donc la stabilité de l'enzyme -
la liaison du substrat à l'enzyme - l'activité catalytique de l'enzyme ;
11
(A) Activité catalytique vs. pH (B) Activité mesurée à pH 7.4 après incubation de l’enzyme
pendant 1 h à différents pH
12
4. Enzymes immobilisées
Pour de nombreuses applications, il n’est pas souhaitable pour des raisons
économiques par exemple, d’utiliser les enzymes en solution. L’immobilisation des enzymes
peut alors induire une modification de leur activité et généralement une augmentation de leur
stabilité. La stabilité de l’enzyme immobilisée dépend de la nature intrinsèque de l’enzyme,
des conditions d’immobilisation, de la nature du matériau support utilisé et des conditions de
réactions. Cependant le modèle de Michaelis-Menten reste valide à condition de lui appliquer
quelques corrections afin de l’adapter aux milieux hétérogènes. Les constantes diffusionnelles
du substrat et des produits doivent être prises en compte ce qui permettra de définir une
nouvelle constante KM, appelée KMapp pour constante apparente. La variation de l’activité va
dépendre de plusieurs paramètres et notamment de la nouvelle conformation du système qui
pourra être favorable ou pas à la catalyse enzymatique. Une enzyme peut donc présenter aussi
bien une augmentation qu’une diminution de son activité après immobilisation.
• Propriétés physico-chimiques:
Une des propriétés importantes et caractéristiques de l’immobilisation est
l’amélioration de la stabilité dans le temps et de la résistance vis-à-vis de la dénaturation. La
stabilité de l’enzyme immobilisée dépond beaucoup du microenvironnement imposé par le
support. Ainsi, les enzymes fixées par la liaison sulfonamide sont moins stables que celles
fixées par liaison azo.
• Propriétés cinétiques:
L’immobilisation des enzymes affecte leurs propriétés cinétiques. En effet, à la
vitesse de la réaction enzymatique proprement dite, il faut ajouter l’effet du
microenvironnement qui conditionne toute l’activité catalytique. Ainsi, les phénomènes de
diffusion l’accès du substrat au niveau du site actif. Ceci a pour conséquence une variation de
la vitesse maximale VM et de la constante de Michaelis KM de l’enzyme ; cette dernière
constante pouvant avoir une valeur 10 fois supérieure. De même, le pH de l’enzyme peut être
13
modifié, en particulier lorsque la réaction enzymatique met en jeu une libération ou une
consommation de protons.
14
Figure 7. Adsorption des enzymes sur un support.
Avantages
1. C’est une méthode très simple à mettre en œuvre nécessitant seulement de mettre en
contact l’enzyme et le support dans des conditions de pH, température et de force ionique
données.
2. Possibilité de régénérer les complexes enzyme-support (si l’enzyme perd son activité en
cours de son fonctionnement, il est possible de la remplacer par une préparation active).
3. Méthode économique et ne requiert aucun réactif chimique pouvant dénaturer l’enzyme.
Inconvénients
15
Figure 8. Possibilités d’orientation de l’enzyme.
Les molécules d’enzyme sont retenues dans le réseau tridimensionnel d’un polymère
insoluble dans l’eau « réseau tridimensionnel d’une matrice », ou emprisonnées dans des
microcapsules délimité par une membrane semi perméable dont les pores sont suffisamment
larges pour permettre le passage des molécules du substrat ou des produits de la réaction
(figure 9).
16
A. Inclusion dans un gel
L’enzyme est incorporée dans un gel insoluble. Ce gel peut être constitué d’une
matrice organique (polymère) ou inorganique. L’enzyme est retenu à l'intérieur du réseau
tridimensionnel d'une matrice, schématisé comme suit:
17
Figure 10. Inclusion dans le gel de polyacrilamide
B. Encapsulation
Avantages
18
Figure 11. Encapsulation des enzymes.
Inconvénients
Elle est réalisée par l’intermédiaire de liaisons irréversibles et covalentes entre les
groupements fonctionnels de l’enzyme et les groupes réactifs du support. Ces groupes, en
19
général insuffisamment réactif, nécessiteront une activation préalable. Apriori, il faut activer
soit l’enzyme, soit le support. L’activation des groupes fonctionnels de l’enzyme peut
conduire à la dénaturation de l’enzyme (figure 12).
Figure 12. Immobilisation par liaison covalente sur support. 1ère étape: Activation du support, 2ème
étape: fixation de l’enzyme.
Figure 13. Immobilisation au bromure de cyanogène BrCN étape1: activation du support, étape 2:
fixation de l’enzyme.
20
B. Immobilisation par réticulation
La réticulation repose sur l’utilisation d’agents dit réticulants qui vont permettre de
lier les enzymes entre elles par des liaisons chimiques. Il existe deux méthodes de réticulation,
soit les enzymes sont reliées entre elles par des agents réticulant de façon directe, soit en plus
de l’agent réticulant une protéine inerte peut être utilisée afin de faciliter ou améliorer la
réticulation, on parle alors de co-réticulation (figure 14). Les enzymes, après avoir été
adsorbées sur un support, sont mises en contact avec un agent réticulant afin de donner un
réseau enzymatique tridimensionnel et qui contrairement à l’enzyme seule est insoluble.
Avantages
Inconvénients
21
6. Les quantités d'enzymes immobilisées sont inferieures par rapport aux deux
précédentes méthodes. Rendements de fixation inferieurs à 100%
4. Modifications chimiques
Différentes stratégies peuvent être utilisées pour effectuer des catalyses enzymatiques
en milieu organique ou hydrophobe. L’une des méthodes emploie le polyéthylène glycol
(PEG) pour éviter la précipitation et l’inactivation de l’enzyme dans un tel milieu. Ce
polymère et linéaire possède des propriétés amphiphiles capables d’isoler l’enzyme du milieu
organique à l’instar des détergents (figure 15).
22
Figure 16. Exemple de couplage avec le méthoxyPEG (mPEG).
23
substrat. La résolution des hydroperoxydes racémiques en formes chirales par la séléno-
subtilisine constitue une voie spéciale pour l’obtention d’alcool époxy à partir d’alcool
allylique (figure 18) .
Figure 18. Résolution des hydroperoxydes par la sélino-subtilisine. R1 et R2 sont des groupes alkyle
ou aryles.
Cette « mutation chimique » n’est pas un cas isolé puisque l’activité de la trypsine a
été transformée par le même procédé en activité péroxydase.
Les enzymes sont utilisées depuis des siècles dans la production alimentaire mais ne
sont connues et maitrisées que depuis le XXème siècle. Elles sont naturellement présentes
dans des ingrédients utilisés pour produire des aliments.
24
5.1.1. Raffinage enzymatique d’huiles alimentaires
Le dégommage enzymatique est la méthode la plus récente pour dégommer les huiles
végétales, y compris l’huile de soja. Elle constitue une technique adéquate pour le raffinage
physique qui requiert de faibles teneurs en phosphore et qui ne peuvent être atteintes grâce
aux méthodes conventionnelles de démucilagination (traitement à l’acide, dégommage à
l’eau, super-dégommage, etc.). Cette technique a initialement été développée par la
compagnie allemande LurgiGmbh, elle est également connue sous le nom de procédé
Enzymax®.
Le but de ce procédé est de convertir grâce à une phospholipase, les phospholipides non
hydratables en une forme hydratable avec pour avantages un accroissement du rendement en
huile, des coûts de fabrication réduits ainsi que la diminution des effluents. Les huiles
obtenues à la suite de ce procédé de dégommage poursuivent un raffinage physique. Elles sont
ainsi envoyées directement à la section de décoloration sans passer par l’étage de
neutralisation. En effet, l’élimination des AGL dans ce cas se fera par distillation sous vide au
cours de la désodorisation.
Des produits agricoles, en particulier, ceux d’origine animale comme l’œuf et le lait
contiennent des protéines qui ont un pouvoir bactéricide ou bactériostatique. Ces
biomolécules sont soit lytiques (lysozyme E.C.3.2.1.17), soit inhibitrices de micro-organismes
(peroxydase E.C.1.11.1.7). Ces propriétés sont exploitées pour maîtriser la qualité hygiénique
des aliments. Par ailleurs, certaines enzymes comme la catalase (E.C.1.11.1.6) ou la b-
lactamase (E.C.3.5.2.6) peuvent détruire des molécules qui ont été introduites dans le milieu
(peroxyde d’hydrogène, antibiotique); d’autres biocatalyseurs (par exemple, la glucose
oxydase E.C.1.1.3.4) génèrent dans le milieu des produits inhibiteurs.
Le lysozyme est utilisé pour améliorer la conservation des produits marins congelés
comme les huîtres ou les crevettes. Des travaux récents ont, par ailleurs, montré que
l’utilisation du lysozyme permettait d’inhiber la croissance de Listeria monocystogenes à une
température de 5 °C.
25
5.1.3. La synthèse d’ester de sucres (Sucroester)
Les esters de sucres sont des esters d'acides gras et de sucres simples. Se sont des
tensioactifs non-ioniques présentant de nombreux avantages dont notamment la diversité des
structures disponibles et le caractère inoffensif, tant pour la santé que pour l’environnement.
26
Utilisation d’enzyme hydrolytique (le plus souvent une lipase, nom abrégé d’une
triacylglycérol acylhydrolase) dans un milieu non aqueux. Dans ces conditions, l’activité de la
lipase est inversée, passant de l’hydrolyse à l’estérification. Trois aspects sont à prendre en
compte, à savoir le rendement réactionnel, la rentabilité et le respect de la législation
concernant l’utilisation des solvants dans le domaine alimentaire.
La transformation des fruits en jus clairs, en jus troubles ou en jus concentrés nécessite
dans la plupart des cas un traitement enzymatique. Utilisées en extraction (avant pressage) les
enzymes permettent d’augmenter les rendements en jus et d’optimiser le pressage (gain
économique important). Sur jus, elles favorisent une clarification rapide par diminution de la
viscosité et améliorent la filtrabilité. Erbslöh Geisenheim a mis au point une large gamme de
formulations enzymatiques permettant de répondre à chaque problématique et ce qu’elles que
soient les caractéristiques de la matière première à traiter.
Les industriels spécialisés dans les jus (de pommes notamment) utilisent largement les
systèmes enzymatiques afin de garantir aux consommateurs une qualité organoleptique
optimale des jus. C'est particulièrement le cas avec les pectinases qui sont très utilisées en
industries végétales car elles permettent d'avoir de meilleurs rendements au niveau des
filtrations et stabilités des jus, spécifiquement sur les fruits tropicaux.
27
5.1.6. Additifs
Les additifs alimentaires sont des substances ajoutées en faibles quantités aux aliments
industriels pour en améliorer la saveur, la texture, l'apparence... Composés d'une molécule
simple (contrairement aux ingrédients souvent plus complexes) ils possèdent tous un code,
Exxx, attribué par la Commission du Codex Alimentarius.
Le développement des applications médicales pour les enzymes a été au moins aussi
important que celui des applications industrielles, reflétant l'ampleur des récompenses
potentielles: par exemple, les enzymes pancréatiques sont utilisées depuis le XIXe siècle pour
le traitement des troubles digestifs. La variété des enzymes et leurs applications
thérapeutiques potentielles sont considérables. A l'heure actuelle, les applications les plus
28
réussies sont extracellulaires: utilisations purement topiques, l'élimination des substances
toxiques et le traitement des troubles de la vie en danger dans la circulation sanguine.
L’utilisation des enzymes dans les méthodes de biologies moléculaire est bien ancrée
dans les principes méthodes analytique de la biologie moléculaire. Les propriétés
extraordinaires que possèdent certaines enzymes, en l’occurrence leur action sur les acides
nucléique (synthèse, restrction, ligation, transcription…) font d’elles des outils
incontournables dans le génie génétique. Ici, nous développerons quelques exemples
d’utilisation d’enzymes dans les techniques de clonage et d’amplification de l’ADN.
29
a
Hyaluronoglucosaminidase ; bthiosulphate sulfurtransferase ; streptococcal cysteine roteinase ;durate
oxidase ;e plasminogen activator.
Un biocapteur est un système analytique alliant des technologies différentes issues par
exemple de la biologie moléculaire, la microélectronique, l'optique et l'informatique. Il se
compose d’un élément biologique, que l’on appelle « ligand » ou biorécepteur, lui-même lié à
un transducteur (pouvant être optique ou plus généralement électromagnétique,
électrochimique, piézoélectrique, calorimétrique ou acoustique) permettant de transformer un
signal biochimique en un signal physique quantifiable (figure 19). Selon l'Union
Internationale de Chimie Pure et Appliquée (IUPAC), un biocapteur est un appareil qui utilise
des réactions biochimiques spécifiques médiées par des enzymes isolées, des immuno-
systèmes, des tissus, organites ou des cellules entières pour détecter des composés chimiques
en général par des signaux électriques, thermiques ou optiques.
30
Ils existent différents types de biocapteur. Les biocapteurs enzymatiques sont les plus
utilisées et les plus commercialisées. En effet, elles présentent un grand nombre d’avantages
notamment la reproductibilité des lots mais par contre il peut y avoir une instabilité de leur
fonctionnement et la nécessite d’utiliser un cofacteur ou plusieurs enzymes associées pour un
même biocapteur. Les enzymes utilisées sont les enzymes REDOX (réductases, oxydases,
oxydo-réductases) et les enzymes hydrolytiques (protéases, lipases, estérases) (tableau 3).
31
5.3. Applications industrielle
Les enzymes sont une bonne alternative aux agents blanchissants chlorés. L’utilisation
de xylanases dans l’étape de blanchiment de la pâte kraft permet d’éviter le chlore et de
réduire les déchets toxiques, d’éliminer l’étape du goulot de bouteille (en raison de la capacité
limitée des cuves de dioxyde de chlore), d’augmenter le degré de blanc de la pâte et de
diminuer les coûts de l’opération, notamment dans les usines qui utilisent de grandes quantités
de dioxyde de chlore. Enfin, le prétraitement aux enzymes permet également d’augmenter le
degré de blanc final de la pâte et de réduire la présence des agents chimiques dans l’étape du
blanchiment.
Le désencrage est une étape nécessaire si l’on souhaite utiliser comme matières premières des
fibres récupérées dans la fabrication de papier et de carton ; la réutilisation de ces fibres
dépend de l’élimination des encres et des autres polluants. Le désencrage présente néanmoins
des inconvénients, notamment dans le cas du papier recyclé et produit de nouveaux déchets
solides et liquides. Voici les enzymes utilisées dans les étapes du désencrage : les lipases, les
estérases, les pectinases, les hemicellulases, les cellulases et les enzymes lignitiques. Les deux
premières, les lipases et les estérases, dégradent les encres à base d’huiles végétales. Les
autres (les pectinases, les hemicellulases, les cellulases et les enzymes lignitiques), modifient
la surface de la fibre de cellulose ou les unions proches des particules d’encre, ce qui libère la
teinture de la fibre et permet de la séparer par flottation ou lavage.
32
5.3.2. Industrie Des détergents
Les cellulases sont quant à elles utilisées à la place des tensioactifs ioniques pour
améliorer la douceur des tissus en coton. Elles sont également actives dans l’élimination des
particules de poussière et de terre car elles éliminent les microfibrilles des fibres de coton, ce
qui produit de plus un effet de brillantage de la couleur.
Les lipases catalysent l’hydrolyse des triglycérides présentes dans les taches de
graisse, ce qui les rend hydrophiles et permet une élimination facile au lavage. Il faut signaler
que les enzymes utilisées dans les détergents ont un impact sur l’environnement positif. Elles
entraînent en effet des économies énergétiques dues à la réduction des températures du
lavage, permettent la réduction de la teneur en produits chimiques des détergents, sont
biodégradables, n’ont pas d’impact négatif dans les processus d’épuration des eaux et ne
présentent pas de risques pour la vie aquatique.
L’amidon est la substance naturelle dont on recouvre le fil à coudre pour augmenter sa
résistance avant le tissage. Cet amidon doit être éliminé avant de procéder aux traitements
finaux du tissu: blanchiment, teinture, traitements spéciaux, etc. L’élimination traditionnelle
s’effectuait auparavant en milieu acide. Aujourd’hui, le désencollage enzymatique utilise des
amylases en remplacement de l’acide. L’industrie textile utilise ce procédé biotechnologique
depuis le début du XXe siècle. Les amylases sont très efficaces dans le désencollage et ne
génèrent pas de problèmes
de déchets dangereux pour l’environnement comme c’est le cas des acides minéraux, des
bases ou des oxydants.
33
5.3.4. Industrie de cuir
Le tannage des peaux est l’un des processus industriels aux enzymes les plus anciens.
En voici les étapes traditionnelles : séchage, trempage, élimination des poils et de la laine,
raclage et tannage. Le tannage utilise de nombreux produits chimiques pour éliminer les poils,
les graisses et les protéines non-désirées (élastine, kératine, albumine et globuline), laissant
intact le collagène dans l’étape précédant le tannage de la peau. Les produits chimiques
utilisés nuisant considérablement à l’environnement, on utilise aujourd’hui des protéases
telles que la trypsine et les lipases. Ces substances, qui réduisent l’utilisation des sulfites, des
solvants organiques et des tensioactifs synthétiques, permettent d’obtenir un produit doté de
meilleures propriétés finales.
34
Méthodes mécaniques:
- Extraction d’enzymes par haute pression suivie de dépression (French-press),
- Broyage ou écrasement (éventuellement en présence de billes),
- Ultrasons à des fréquences déterminées.
Méthodes non-mécaniques:
- Séchage ou traitement par congélation-décongélation pour la la destruction
des barrières,
- Lyse physique des barrières cellulaires par choc osmotique,
- Lyse chimique par l’emploi de détergent,
- Lyse enzymatique (exemple: lysozyme).
L’étape suivante consiste à éloigner les débris cellulaires pour obtenir une préparation
enzymatique brute. Cette opération est difficile lorsque la densité des cellules bactériennes de
petite taille est proche de la densité du milieu de fermentation. Les méthodes suivantes sont
utilisées:
- Décantation adaptée aux cellules de grande taille comme les levures,
- Filtration continue, largement utilisée en industrie,
- Des centrifugeuses continues sont de plus en plus utilisées.
35
protéines qui agglomèrent et précipitent. Les solvants présentent cependant une source de
toxicité.
- Précipitation aux polymères comme les polyéthylenimines et les polyéthylène glycols entre
15 et 20%.
Dans certains domaines comme celui médical ou analytique, les enzymes doivent être
hautement purifiées. Dans d’autres domaines industriels les enzymes peuvent être
partiellement purifiées. Les méthodes utilisées dans la purification sont:
- Electrophorèse: utilisée pour isoler des enzymes pures à l’échelle de laboratoire. Les
méthodes utilisées sont de type électrophorèse zonale, isotachophorèse ou gradient de
porosité. Le Scale-up de l’électrophorèse est limité par le chauffage généré par le procédé et
l’interférence causée par la convection.
36
Tableau 4. Les méthodes chromatographiques et leurs principes.
7. Enzymes artificielles
Une enzyme artificielle est une molécule synthétique relativement petite créée pour
imiter le site actif d´une enzyme naturelle. Elle est bâtie à partir d´une molécule hôte,
responsable de la liaison sélective avec le substrat, et à laquelle on ajoute des groupes
fonctionnels pour obtenir une activité catalytique.
Les anticorps catalytiques (aussi appelés abzymes) sont des anticorps capables de
catalyser une réaction chimique. Ils sont normalement produits artificiellement. Par rapport à
une enzyme normale, ils possèdent une meilleure spécificité par rapport au substrat. Un autre
avantage est qu´ils peuvent être produits pour catalyser toute sorte de réactions, comme la
réaction de Diels-Alder. Leur nom a été construit à partir des mots antibody (anticorps en
anglais) et enzyme.
37
réactions très diverses d'hydrolyse (de liaisons esters, carbonates, amides ou glycosidiques),
de formation de liaisons (amides ou imines), d'isomérisation ou encore des réactions pour
lesquelles aucun catalyseur biologique n'était connu, comme la réaction chimique de Diels-
Alder. Actuellement, des recherches sont menées dans l´espoir de pouvoir utiliser des
abzymes à des fins thérapeutiques (figure 21).
7.2. Cyclodextrines
38
Figure 22. Structure des α-, β- et γ-cyclodextrines.
Conclusion
L’utilisation des enzymes dans divers domaines industriels présente donc un fort
intérêt et explique les efforts faits ces dernières années par la communauté scientifique dans
ce sens. Cependant, elles restent des entités faisant partie du domaine du vivant et leur emploi
nécessite de prendre certaines précautions notamment afin de conserver leur propriétés
catalytiques. De plus chaque enzyme présente des particularités, il n’existe pas de solution
universelle applicable à l’ensemble de cette classe de protéines.
39
REFERENCES
1. H. Bisswanger (2008). Enzyme Kinetics. Wiley-VCH Verlag, Weinheim.
2. J. Bjerre, C. Rousseau, L. Marinescu and M. Bols (2008). Artificial enzymes,
“Chemzymes”: current state and perspectives. Applied Microbiologie and
Biotechnologie 81:1-11.
3. R. Breslow (2005). Artificial enzymes. Wiley-VCH Verlag, Weinheim.
4. M. Delvaux and S. Demoustier-Champagne (2003). Immobilisation of glucose oxidase
within metallic nanotubes arrays for application to enzyme biosensors. Biosensors and
Bioelectronics 18: 943-951.
5. V. Leskovac (2003). Comprehensive Enzyme Kinetics. Kluwer Academic/Plenum
Publishers, New York.
6. T.T. Ngo (1980). Bioanalytical applications of immobilized enzymes. International
Journal of Biochemistry 11: 459-465.
7. J.J. Pancrazio, J.P. Whelan, D.A. Borkholder, W. Ma and D.A. Stenger (1999).
Development and Application of Cell-Based Biosensors. Annals of Biomedical
Engineering 27: 697-711.
8. A.K. Poulsen, A.M. Scharff-Poulsen and L.F. Olsen (2007). Horseradish peroxidase
embedded in polyacrylamide nanoparticles enables optical detection of reactive
oxygen species. Analytical Biochemistry 366: 29-36.
9. J.P. Sine (2010). Enzymologie et application. Ellipses, Paris.
10. D. Voet and J. G. Voet (1998). Biochimie, De Boeck Université, Bruxelles.
40