Conduite à tenir pour le

diagnostic
d'hémoglobinopathie.
Différentes
techniques. Démonstration des
profils. Cas cliniques.
Dr. Hamoul
 I. LES HEMOGLOBINOPATHIES
1) Types d’hémoglobinopathies :
Se subdivisent en deux groupes :
• Le premier correspond à la présence d’une Hb de structure anormale, entraînant ou non des signes
fonctionnels ;
• Le second à un défaut de synthèse, partiel ou total, qui s’exprime dans le groupe très hétérogène
des thalassémies.
Liste des tableaux:
Tableau I : caractéristiques biologiques et cliniques des principaux syndromes drépanocytaires.
Tableau II : caractéristiques biologiques et cliniques des hémoglobinoses C
Tableau III : classement des thalassémies en formes majeures, mineures ou intermédiaires
Tableau IV : caractéristiques cliniques et biologiques des α-thalassémies
Tableau V : caractéristiques cliniques et biologiques des β-thalassémies
Tableau VI: principales caractéristiques biologiques et cliniques des δβ-thalassémies et PHHF
5-15 %

15-35 %
II. ETUDE DE L’HEMOGLOBINE:
1) Circonstances de prescription:
- Dépistage systématique dans les ethnies à risque (conseil génétique en
vue d’une grossesse, bilan préopératoire …) ;
- Recherche d’une hémoglobinopathie devant une anomalie de
l’hémogramme (microcytose, anémie, pseudopolyglobulie) ;
- Antécédents familiaux ;
- Suivi d’une hémoglobinopathie connue ;
- Découverte fortuite d’un variant de l’Hb lors du dosage d’HbA1c.
II. ETUDE DE L’HEMOGLOBINE
2) Conditions nécessaires à l’interprétation
des résultats :
L’interprétation des résultats doit tenir compte de différentes données :
- âge du patient ;
- origine ethnique ;
- contexte familial ;
- contexte clinique ;
- contexte transfusionnel (il est indispensable de faire l’analyse à
distance d’une transfusion, 3 mois minimum) ; constantes
érythrocytaires
- bilan martial (incontournable en cas de microcytose) ;
- bilan d’hémolyse en cas d’anémie (réticulocytes, haptoglobine,
bilirubine).
II. ETUDE DE L’HEMOGLOBINE
3) Prélèvement :
Généralement, 5 ml de sang sur anticoagulant
(EDTA le plus souvent) suffisent pour une étude classique. L’échantillon réfrigéré peut se conserver au maximum 8 jours.

4) Valeurs normales :
- HbA > 95,6 %
- HbA2 = 2 à 3,5 % (valeur indicative, à déterminer en fonction de chaque technique)
- HbF < 1%
II. ETUDE DE L’HEMOGLOBINE
5) Techniques :

L’étude de l’Hb nécessite d’avoir recours à des méthodes de

séparation et de quantification des différentes fractions de
l’hémoglobine :
-> Le dépistage des thalassémies mineures requiert une
quantification précise des taux d’HbA2 et F ;
-> La détection et l’identification des variants de l’Hb
nécessitent le recours à des méthodes suffisamment
résolutives
III. ETUDE DE L’HEMOGLOBINE

.
Electrophorèse sur PH alcalin
Electrophorèse sur PH acide
Isoélectrofocalisation
Electrophorèse capillaire
Electrophorèse capillaire
Chromatographie liquide haute
performance
Test de Solubilité
Test de Falciformation d’Emmel
Test de Stabilité
III. INTERPRETATION DES
RESULTATS
Arbres décisionnels appliqués à l’interprétation des résultats de l’étude phénotypique
de l’Hb, valable pour les patients > 2 ans lorsque le taux d’HbF est stabilisé :
- Profil normal (fig.6)
- Anomalies quantitatives :
. diminution du taux d’HbA2 (fig.7)
. augmentation du taux d’HbA2 (fig.8)
. augmentation isolée du taux d’HbF (fig.9)
- Anomalies qualitatives :
. cas simples : HbA + présence d’un variant fréquent S, E ou C (fig.10)
. cas complexes : absence d’HbA + présence d’un variant fréquent S, E, C ou présence
d’un variant rare (fig.11)
 IV. EXEMPLES :
1) Profil normal
2) α-thalassémie mineure
3) β-thalassémie mineure
4) β-thalassémie intermédiaire
5) β-thalassémie majeure
6) Drépanocytose hétérozygote
7) Drépanocytose homozygote
8) Hémoglobinose C hétérozygote
Method Hb A area Hb S area Hb A2/C
area
Alk Major Major Minor
Agarose band (Hb band band (Hb
A) (Hb S) A2)
Acid Major Major
Agar/Agar band (Hb band
ose A+ Hb (Hb S)
A2)
CZE Major Major Minor
peak peak peak
(Hb A) (Hb S) (Hb A2)
Zone 9 Zone 5 Zone 3
IEF Major Major Minor
band (Hb band band (Hb
A) (Hb S) A2)
HPLC Major Major Minor
peak peak peak
(Hb A) (Hb S) (Hb A2)
RT=2.34 RT=4.26 RT=3.65
Method Hb F Hb A area Hb S area Hb A2/C area
area

Alk Agarose Major band Major band Faint band (Hb

(Hb F) (Hb S) A2)

Acid Agar / Major band Major band

Agarose
(Hb F) (Hb S)

CZE Major peak Major peak Minor peak

(Hb F) (Hb S ) Zone 5 (Hb A2) Zone 3
Zone 7

IEF Major band Major band Faint band

(Hb F) (Hb S) (Hb A2)

HPLC Major peak Major peak Minor

(Hb F) (Hb S) peak
RT=1.16 RT=4.38 (Hb A2)
RT=3.6
Method Hb A area Hb S area Hb A2/C area

Alk Agarose Major band Major band

(Hb A)
Acid Agar Major band Major band
/Agarose (Hb A+ Hb
A2)

CZE Major peak Minor peak Major peak

(Hb A) (HbA2) (Hb C) Zone
Zone 9 Zone 3 2

IEF Major band Minor band Major band

(Hb A) (Hb A2) cathodal to
A2
(Hb C)
HPLC* Major peak Minor peak Major
(Hb A) (Hb A2) Peak
RT=2.45 RT=3.6 (Hb C)
RT=5.l0
Merci de votre attention !