UNIVERSITE ABOUBEKR BELKAID TLEMCEN ANNEE 2008

Faculté des sciences

Département de Biologie Moléculaire et Cellulaire

Examen final de LMD Option « Biochimie »

Techniques préparatives d’analyses en biochimie.

Nom : Prénom :

Exercice n°1 :
Réponses :
1:
2:

3:

Exercice n°2 :

Réponses :
b) Asp : Leu : Gln : Lys :

Exercice3 :
Chromatographie par gel-filtration : On veut déterminer la masse molaire d'une protéine X par
chromatographie sur tamis moléculaire (gel filtration). On choisit 3 gels ayant des domaines de
fractionnement très différents : le gel A sépare les substances de masse molaire comprise entre 9.104
et 1,2.106 g; le gel B sépare les substances de masse molaire comprises entre 4.104 g et 4.105 g ; le gel
C sépare les substances de masse molaires comprise entre 2.104 et 2,5.105 g. On étalonne chaque gel
avec les substances suivantes :
Substance Masse molaire Volume d'élution (ml)
Bleu Dextran 2.10° 45
Fibrinogène 3,4.10' 60
Catalase 2,3.10' 73
Lactoglobulin 1,9.10" 132
e X
Protéine 113

Titre :
Réponses :
a) :

b) :
Exercice n° 4 : Le chromatogramme suivant représente le profil d'élution de trois acides aminé (1, 2
et 3) :

Questions :

1 - Quel est le type de chromatographie utilisé ? Exposer son principe.

2 - En vous aidant du tableau ci-dessous, déterminer quels peuvent être les acides aminés élués.

Amino-acide : pHi : Amino-acide : pHi :

Glycine 5,97 Asparagine 5,41
Alanine 6,02 Acide
3,22
glutamique
Valine 5,97
Glutamine 5,65
Leucine 5,98
Lysine 9,74
Isoleucine 6,02
Arginine 10,76
Sérine 5,68
Histidine 7,58
Thréonine 6,53
Phénylalanine 5,98
Cystéine 5,02
Tyrosine 5,65
Méthionine 5,75
Tryptophane 5,88
Acide
2,87
aspartique Proline 6,10

3 - Quelle technique chromatographique peut-on utiliser pour séparer deux acides aminés de même
pHi ?
Réponses :
1:

2:

3:

Exercice n° 5 : Séparation des esters méthyliques d'acides gras.

L'estérification des acides gras d'un corps gras naturel (un mélange de triglycérides) peut être réalisée
en incubant le corps gras avec du trifluorure de bore (catalyseur de la réaction) dans le méthanol
(CH3-OH, donneur des groupements méthyls), à 100°C durant 15 min.
Le chromatogramme ci-dessous représente le profil d'élution d'esters méthyliques d'acides gras
saturés et insaturés repris dans l'hexane après injection en chromatographie en phase gazeuse. Le
temps de rétention (tr) est indiqué en minutes, au-dessus de chaque pic :
 tr : aire (%) :
8.98 30.783
17.16 15.976
19.00 29.293
22.90 14.636
29.32 8.761
Questions :
1 - Quel est le principe de la chromatographie utilisée ?
2 - Le standard interne est ici l'acide stéarique (C18:0) qui présente un temps de rétention de 17,16
minutes. A l'aide du tableau ci-dessous, déterminer la nature des autres acides gras élués. Que
représente le premier pic (tr : 1,7 min) ? Selon quel(s) critère(s) les acides gras sont-ils élués ?

rapport tr / tr
acide gras :
C18:0 :
ac. laurique (C12:0) 0,12
ac. myristique (C14:0) 0,25
ac. palmitique (C16:0) 0,53
ac. stéarique (C18:0) 1
ac. oléique (C18:1 ; 9) 1,11
ac. linoléique (C18:2 ; 9, 12) 1,33
ac. linolénique (C18:3 ; 9,12,15) 1,71
ac. arachidique (C20:0) 1,88
ac. arachidonique (C20:4 ; 5, 8,
3,24
11, 14)
3 - Calculer la masse des différents produits dans l'échantillon, sachant que l'on a injecté 132
microgrammes d'esters méthyliques d'acides gras saturés et insaturés.

Réponses :
1:

Pic1 : Pic2 : Pic3 : Pic4 : Pic5 :

Pic6 :
Critères :

Masses : Pic1 Pic2 : Pic3 : Pic4 : Pic5 :

Pic6 :