Les

plantes tropicales, sources potentielles

de médicaments antipaludiques.

Michel Frédérich
CIRM, Laboratoire de Pharmacognosie,
Université de Liège.

Paris, Décembre 2017

 Contenu de l’exposé

1. Généralités sur le paludisme

2. Recherches menées sur les plantes
antipaludiques à l’ULiège
3. Exemples concrets

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Les plantes tropicales, sources potentielles
10. Toxiques
de médicaments antipaludiques.
M. Frédérich / M. Tits / L. Angenot 2
1/ GÉNÉRALITÉS SUR LE PALUDISME
 Paludisme: Eléments clés 2016 (OMS)
• 216 millions de cas (212*)
• 445 000 morts (446*)
• 90% des morts en Afrique
• En Afrique, un enfant (<5ans) meurt de la malaria
toutes les deux minutes.
• 99% des cas en Afrique: P. falciparum

*2015

© The guardian, 2012 WHO, World Malaria Report, 2017

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 Médicaments utilisés contre le paludisme

Traitement
• Chloroquine (Nivaquine®)
• Mefloquine (Lariam®)
• Quinine
• Atovaquone + proguanil (Malarone®)
• Artesunate
• Artemether + Lumefantrine (Coartem®)
• Artemether + Piperaquine
• Artenimol + Piperaquine (Eurartesim®)
• Doxycycline

En vert: médicaments ayant une origine ou une inspiration naturelle

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 5

 Artémisinine

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 6

 L’armoise annuelle
et la médecine traditionnelle chinoise

L’artémisinine est une

lactone
sesquiterpénique
comprenant un pont
Une page du Wu Shi Er Bing Fang
(1065 av JC), découvert en 1973 endoperoxyde.
dans une tombe, avec mise en
évidence de l'Armoise annuelle L’artémisinine, traitement
(Qinghao), utilisée pour traiter les de référence recommandé
"fièvres". par l’OMS contre la
malaria.

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 Résistance du parasite

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2/ RECHERCHES MENÉES SUR LES
PLANTES ANTIPALUDIQUES À
L’ULIÈGE
 Collaborations autour des plantes
antipaludiques

Rwanda Bénin (UCL)

Burkina-Faso

Madagascar

Cameroun
Congo Réunion island / Mauritius
Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 10
 Activité antipaludique

In vitro In vivo
• Souches plasmodiales: • Modèle murin:
Ø Sensibles à la chloroquine : 3D7 Ø Plasmodium berghei
Ø Résistantes à la chloroquine : W2, K1 Ø P. vinckei.

Méthode colorimétrique, activité LDH Test suppressif de Peters

CI50 ≤ 15 µg/ml (extraits)

CI50 < 1 µg/mL (substances pures) In vivo: activité à une dose ≤ 300 mg/kg

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 11

3/ EXEMPLES
3A STRYCHNOGUCINE B
 Strychnos icaja

Revue internationale de botanique appliquée et d'agriculture tropicale, 27e ann

ée, bulletin n°295-296, Mai-juin 1947. pp. 206-214

« Because of its toxicity, this plant is usually only

administered under the supervision of a traditional
medicine man, mainly in the treatment of skin
diseases and chronic and persistent malaria »

Protabase - Plant Resources of Tropical Africa.

http://www.prota.org

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 Fractionnement bioguidé
Quinine: IC50 : 0,500 µM
Alcaloïdes bisindoliques
originaux.
Frédérich et al., Planta Med. 66, 2000, p262.
Frédérich et al., J. Nat. Prod. 64, 2001, p12.

FCA-(CQS)-CI50: 8 µM 1,31 µM 0,617 µM

SI - fibroblastes: 0,8 7 25

W2-(CQR)-CI50: 10 µM 0,26 µM 0,085 µM

SI - fibroblastes : 0,61 34 182

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 14

 Synthèse
N
H
1.) DBU (10 equiv) H
NMP, reflux H
13
N OTBS
2.) TBSCl, imid. 2.) HF•Py
17
N 1.) LDA Py/THF
H (50% overall) 23
O 0 °C 0 °C to rt
3: Northern fragment THF
H
1.) H2O2
H MeO then BF3•OEt2
N O MeCN/H2O 5'
H 2.) TFAA [Mannich
N
H Reaction]
H then KOH/H2O
O
[Polonovski−Potier] H
2: (−)-strychnine
H
3.) MeOH/CH2Cl2 N O (59% overall)
H
(52% overall) H
O
4: Southern fragment

N N
H H

H H
16 H H
H
N OH N OH
17
23 Cs2CO3
H H
O H O
N t-BuOH N
H H
85 °C, 5 h
H H
H (70%) H
N O N O
H H
H H
O O
5 (−)-strychnogucine B (1)

(1) Zhao, S.; Teijaro, C. N.; Chen, H.; Sirasani, G.; Vaddypally, S.; Zdilla, M. J.; Dobereiner, G.
E.; Andrade, R. B. Chem. - A Eur. J. 2016, 22, 11593–11596.
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 Strychnos icaja: strychnogucine B
Evaluation in vivo
Activité In vivo (% inhibition) contre P. berghei, chez la souris
(strychnogucine B, 30 mg/kg; versus chloroquine 4 mg/kg, ip).

*(strychnogucine B) p =
0.00164 versus control
*(chloroquine) p=
0.00159 versus control

Ledoux et al., 2016, in

finalization for publication

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3/ EXEMPLES
3B ACIDE ELLAGIQUE
 Rwanda

Enquête ethnopharmacologique: 111 préparations traditionnellesà 13 plantes

collectées à 6 avec bonne activité.
Muganga, R., Angenot, L., Tits, M., & Frédérich, M. (2010). Antiplasmodial and cytotoxic activities of Rwandan
medicinal plants used in the treatment of malaria. Journal of Ethnopharmacology, 128(1), 52–57.
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 Terminalia mollis

Ce sont les racines qui sont utilisées.

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 19

 Activité In vivo

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 20

 Identification des composés actifs

IC50: 0.17±0.0 µg/mL

Muganga, R., Angenot, L., Tits, M., & Frédérich, M. (2014). In vitro and in vivo antiplasmodial activity of three Rwandan
medicinal plants and identification of their active compounds. Planta Medica, 80(6), 482–9.

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 21

 Acide ellagique: candidat médicament ?

à Optimisation de la
biodisponibilité ?

Soh, P. N., Witkowski, B., Olagnier, D., Nicolau, M. L., Garcia-Alvarez, M. C., Berry, A., & Benoit-Vical, F. (2009).
In vitro and in vivo properties of ellagic acid in malaria treatment. Antimicrob Agents Chemother, 53(3), 1100–
1106.

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 22

3/ EXEMPLES
3C CAESALPINIA BENTHAMIANA
 Caesalpinia benthamiana
Guinée

Enquête
ethnopharmacologique:
Identification de Caesalpinia
benthamiana.

• Sirop à base d’extrait

hydroéthanolique de feuilles.
• Deux groupes de 23/24 enfants (5-
15 ans, versus chloroquine)
Evaluation clinique préliminaire (Loua
J., et al., 2017. Evidence-Based
Complementary and Alternative
Medicine, 9438607).

Objectif: validation du MTA

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 Caesalpinia benthamiana
O
Jansen et al., 2017. J.
Validation de l’activité in vitro :
O 16
Ethnopharmacol., 203, 20- 15
26. 12
20 11 13
H H
1 9 14
2 10 8 17
H
3 5 7
Fractionnement bioguidé: 4
6
19 18
H
COOH New compounds
O
H
16
Tested material IC50± (µg/mL) 20
11 12
13
15 COOH

1 Mezobenthamic acid A > 10 1 9

H
14 H

2 Mezobenthamic acid B > 10 2

10 8
17
H
3 Neocaesalpin H > 10 3
4
5 7
4 Kaempferol >10 H
6
5 Ethylgallate 6.2±2.6 19 COOH
18
6 Resveratrol > 10
7 Quercetin 9.5±3.2
8 13b-OH-pheophorbide a 5.1±1.0
9 Gallic acid > 10
10 β-sitosterol-Glc > 10
Constituant principal de
Pheophorbide a (standard) 6.7±0.7
Artemisinin 6.0 ±2.2 ng/ml l’extrait (5% m/m).

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 25

Ile de la Réunion

3/ EXEMPLES
3D POUPARTIA BORBONICA
 Criblage de plantes de la Réunion

• 76 plantes et 72 organismes marins.

Projet FEDER BioMolTCN
• Mise en évidence de quelques plantes
présentant des activités antipaludiques

• Monimia rotundifolia (IC50:

11,28µg/ml)
• Zanthoxylum heterophylum (IC50:
12,46µg/ml)
• Poupartia borbonica (IC50: 4,92µg/ml)
• Psiadia retusa (IC50: 12,09µg/ml)
• Vernonia fimbrillifera (IC50: 5,2µg/ml)

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 Poupartia borbonica J. F. Gmel
Extraction à partir des
feuilles de P. borbonica
Acétate d’éthyle

Hexane/MeOH/CH3CN Dégraissage de l’extrait

(6:0,5:3,5) AE par partage
liquide/liquide

Phase Phase
polaire organique
ODS
Gradient MeOH
AF0.1% / Eau AF 0.1%) Anacardiacées
HPLC
préparative
Hexane/AE/AA
[14:6:0.3]

CCM C A B
préparative
Poupartone C, A, B à coté de l’extrait total

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 Identification des poupartones
Poupartone A Identification structurale:
HO

O
RMN, spectrométrie de masse.
O
OH

Poupartone B Configuration absolue

HO
Dichroïsme circulaire et modélisation
O O moléculaire
OH

Poupartone C
HO O

O
OH

Positionnement de la double liaison:

Thiométhylation et spectrométrie de
masse.

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 Activités biologiques
In vitro

Composés P.falciparum IC50 (µg/ml) Cytotoxicity IC50 (µg/ml)

W2 3D7 Hela WI38
Poupartone C 0,45 0.43±0,16 1.31±0,43 1.01±0,82
Poupartone A 0,22 0.34 ±0.04 0.80±0,12 0.60±0,38
Poupartone B 0,33 0.69±0,2 1.44± 0,34 1.04± 0,50
EtOAc extract 2,05 2.43±0,5 3.37± 0,35 3.23± 0,35 Zébrafishs

In vivo

1 µg/mL

2 µg/mL

Ledoux, A. et al. (2017). Journal of Natural Products, 80, 1750–1757. Toxicité cardiaque

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 Perspectives
Ciblage des globules rouges parasités par
P.falciparum en vue de diminuer la toxicité
périphérique

Il a été démontré que l’héparine se lie à

PfEMP1.
à Réalisation de liposomes dans lesquels
vont être incorporés le principe actif et
sur lesquels de l’héparine sera greffée.

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 Premiers résultats prometteurs…

In vitro zébrafish

120
Concentration Plasmodium Cellules Indice de
héparine IC50 (µg/ml) HeLa sélectivité
IC50 (µg/ml) 100

0 µg/ml 0,86 ± 0,26 3,88 ±0,60 4.52

80

100 µg/ml 0,41 ± 0,01 2,52 ±0,02 6.15 60 Poupartone B

Liposome
40
150 µg/ml 0,44 ± 0,05 2,87 ± 0,21 6.52

20
Poupartone B 0,69±0,21 1,2±0,25 1.34
0
T- véhicule 1 µg/mL 5 µg/mL 10 µg/mL 15 µg/mL

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 Conclusions
• Nos travaux ont mis en évidence l’activité
antipaludique de divers métabolites secondaires
végétaux, dont un grand nombre de structure
originale.
• Les plantes restent une source potentielle de
médicaments, notamment dans le champ des
antipaludiques.
• Plusieurs classes phytochimiques (alcaloïdes
indoliques, polyphénols, cyclohexénones…) ont
montré des activités potentielles, et doivent être
étudiées de manière approfondie (p.e. mode
d’action…).

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 Remerciements:
• Les membres du laboratoire de Pharmacognosie et les collègues du
CIRM.
• Nos partenaires de l’UCL (Prof. Leclercq), de l’Université de la Réunion
(Prof. Bialecki) et de Temple University (Prof. Andrade), …
• Nos partenaires du Burkina Faso, Rwanda, RDC, Bénin, Réunion, Ile
Maurice, Cameroun, Guinée-Conakry…
• FNRS, ULiège, FEDER-Réunion and ARES-CCD pour les supports
financiers.
• …
Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 34
35
 Paludisme: le parasite

99% des cas en

Afrique: P. falciparum

©
CDC

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 36

 A partir de l’artémisinine:

artémisinine

Artenimol = dihydroartémisinine

artésunate artéméther
L’artémisinine,
traitement de référence
recommandé par l’OMS
contre la malaria.

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 37

 Vaccine RTS,S/AS01 (Mosquirix®)
• This vaccine targets the pre-
erythrocytic phase (Glaxo).
• Phase III Clinical Trials: 26-36%
protection among infants and
childrens.
• It is a modest protection.
• Length of protection around 12
months.
• Some concerns about meningites
cases
• Approved by EMA, but actually, RTS,S corresponds to surface proteins
WHO did not recommend its of sporozoïtes (circumsporozoïte
inclusion in the Programme of protein - CSP)
The adjuvant AS01 content vegetal
Immunisations (pilote in 2018). saponine…
Efficacy and safety of RTS,S/AS01 malaria vaccine with or without a booster dose in infants and children in Africa : final results of a phase
3, individually randomised, controlled trial. RTS,S Clinical trials Partnership. The Lancet, Volume 386, No. 9988, p31–45, 4 July 2015.
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M. Frédérich / M. Tits / L. Angenot 38
 CIRM – UNIFYING THEMATICS
« BIOPHARMACEUTICS »
Optimization of ellagic acid as a lead in the treatment of malaria
Objectives: improvement of bioavailability
- synthesis of analogs
- improvement of bioavailability by formulation techniques
-…

O O O
X X8 X8
O O NH
X X4 X4
X X9 X9
O
X X3 X3
O
X3, X4, X8, X9 = H, OH or OR X3, X4, X8, X9 = H, OH or OR
X = H, OH, OR where R is an acyl, a where R is a short where R is a short
carbamoyl or a short functionalized (functionalized or not) acyl or (functionalized or not) acyl or
(NH2, OH) alkyl chain. alkyl chain alkyl chain
General formula I General formula II General formula III

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 39

 Objectif de nos recherches

1/ Découverte de nouveaux médicaments

2/ Médicaments Traditionnels
Améliorés – MTA
• Standardisés
• Efficacité validée
• Absence de toxicité
= Voie encouragée par l’OMS.

Les plantes tropicales, sources potentielles de médicaments antipaludiques. 40

 Fractionnement bioguidé

Identification d’un alcaloïde bisindolique original

strychnobaillonine
IC50 = 0.7 µg/mL =
1.1 µM
SI > 14
Tchinda, A. T., Jansen, O., Nyemb, J.-N., Tits, M., Dive, G., Angenot, L., & Frédérich, M. (2014). Strychnobaillonine, an
unsymmetrical bisindole alkaloid with an unprecedented skeleton from Strychnos icaja roots. Journal of Natural
Products, 77(4), 1078–82.

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