Les PPARs

(peroxisome proliferator activated receptors)

 PLAN
• Les récepteurs des proliférateurs de péroxysomes
– La superfamille des récepteurs nucléaires
– Les péroxysomes
– Structure des PPARs
– Mécanismes de régulation transcriptionnelle
– Les différents isoformes de PPARs
• Les PPARs en thérapeutique
– Les maladies métaboliques
– Les effets des agonistes et leurs intérêts dans ces pathologies
– Les problèmes posés par ces molécules (toxicité, influence de l’espèce)
• Etudes transcriptomiques sur les PPAR alpha
• Etudes transcriptomiques sur les PPAR bêta/delta
• Etudes transcriptomiques des PPAR gamma et des PPAR
alpha/gamma
La superfamille des récepteurs nucléaires
Découverte du premier récepteur nucléaire dans les années 1970
Aujourd’hui on en dénombre plus de 70
Le plus souvent actifs en tant que mono- homo- ou hétérodimères avec RXR
Nombreux récepteurs caractérisés avant leur ligand d’où le nom de récepteur orphelin
Facteurs de transcription impliqués dans de nombreuses fonctions biologiques:
prolifération, différenciation, développement et homéostasie

Mukherjee et al. Pharm. Res. 2010

Les récepteurs des proliférateurs
de péroxysomes
 Les péroxysomes
•L’un des 4 principaux organites incluant le noyau , la
mitochondrie et le système sécrétoire
•Petit organite ovoïde délimité par une membrane
simple, ne possédant pas de matériel génétique
•Présent essentiellement dans les cellules du système
nerveux et du tissu hépatique
•Ils se multiplient par bourgeonnement

•Fonctions:
•β oxydation des acides gras (principalement à
longue chaine)
•Synthèse des acides biliaires
•Dégradation des protéines et des acides aminés
•Synthèse du plasmalogène
•Détoxification (catalase)

•Pathologies associées:
•Syndrome de Zellweger
•Adrénoleucodystrophie liée au chromosome X
 Les proliférateurs de péroxysomes (PP)
Découverts chez les rats traités par le clofibrate (de Duve 1969)
Ils sont de nature très diverse:
• contaminants de l’environnement
les herbicides, les agents plastifiants (ex: les phtalates )
• composés endogènes:
acides gras à longue chaine et leurs dérivés
(acide arachidonique, eïcosanoïdes)
Hormones (DHEA, oestradiol, progestérone)
• médicaments:
Fibrates
AINS (acide acétylsalicylique)
Acide valproïque

Kudo N et al. Toxicol. Sci. 2005;86:231-238

 Caractéristiques communes des PP
• La plupart sont amphiphiles
• 1 domaine hydrophobe et 1 groupement acide carboxylique
• Ils franchissent les membranes grâce au groupement
hydrophobe
• Stimulent la transcription de gènes
– Gènes impliqués dans la β-oxydation péroxysomale des
acides grasprolifération péroxysomale
• Induisent la formation de tumeurs hépatiques
chez les rongeurs après un traitement
chronique
 Les PPARs
• Les propriétés des proliférateurs rappellent celles des hormones
hydrophobes donc recherche d’un récepteur de même nature
• Découverte de PPAR alpha en 1990 par Issemann et Green chez le rongeur
• Les autres isoformes : PPAR bêta et gamma ont ensuite été identifiées
• Les PPARs (peroxisome proliferator-activated receptors) appartiennent à la
superfamille des récepteurs nucléaires hormonaux.
• Structure du récepteur

NH2 COOH
A/B C D E F

Activation de la Fixation du ligand

Fixation à Domaine
transcription Dimérisation
l’ADN non
Fixation des
Domaine en spécifique
cofacteurs
doigts de Zinc
 Les isoformes de PPARs
Homologie entre les espèces Homologie chez l’homme

Récepteur bien conservé au sein des espèces

Trois isoformes principales: alpha, bête/delta et gamma
Homologie relativement élevée entre les différentes isoformes chez l’Homme
 Activation des PPARs
• Hétérodimérisation avec RXR dans le noyau

• Liaison du ligand
• Association avec des co-activateurs
• Liaison au PPRE situé au niveau du promoteur
des gènes cibles
 Mécanisme de transactivation
Dans le noyau, le complexe PPAR/RXR est lié à un ensemble de corépresseurs
empêchant son activité
Après la liaison du ligand le corépresseur est déplacé et des co-activateurs sont
recrutés
L’hétérodimère peut ensuite interagir avec le PPRE au niveau de la séquence
promotrice des gènes cibles

Viswakarma et al.,2010
 Mécanisme de transrépression

• Le « tethering » interaction physique entre l’hétérodimère PPAR/RXR et un

facteur de transcription empêchant ainsi sa fixation sur l’ADN et donc son activité.
• Le « squelching » séquestration par le facteur de transcription d’un ou de plusieurs
coactivateurs nécessaire à l’activité transcriptionnelle du facteur cible.
• Le « squelching » inverse relargage de corépresseur inhibant l’activité
transcriptionnelle par fixation du ligand sur PPAR/RXR
 Distribution tissulaire et fonctions

PPARα PPARβ PPARγ

Tissu adipeux
Foie Ubiquitaire Coeur
Muscle squelettique Muscle squelettique Muscle squelettique
Tissu adipeux brun Tissu adipeux blanc Macrophages, Côlon,
Cœur, rein, vaisseaux Foie

Transport du cholestérol Stockage lipidique

Catabolisme lipidique
Catabolisme lipidique Différenciation
Prolifération des
Prolifération cellulaire ou adipocytaire
péroxysomes
apoptose Contrôle de
Contrôle de l’inflammation
Cicatrisation l’inflammation
 Exemples d’agonistes
PPARα PPARβ PPARγ

Ligands Acide arachidonique Acide linoleique Acide linoleique

Acide linoleique Acide linolenique 15dPGJ2
naturels

H
COOH

Ligands Fenofibrate L-165041 Rosiglitazone

Clofibrate GW501516 Pioglitazone
synthétiques
O
O
O
S
N H
HO
O

N H
O S
N N
CH3 O
 Cibles pharmacologiques
MURIN HOMME

ALPHA GAMMA ALPHA GAMMA

FENO 0.63 30.0

WY14643 18 5.0

TRO 0.78 2.235

ROSI 0.076 0.018

MURA 23.8 0.09 0.32 0.11

TESA 32 0.25 9.44 1.82

EC50 (μM) = concentration of compound required to induce 50% of the Maximum

alkaline phosphatase activity in vitro
 Cibles génomiques
Transport des
acides gras et
formation de
l’acétylcoA

Metabolisme des
lipoprotéines Metabolisme du
cholestérol ß-oxidation
mitochondriale

Metabolisme des
acides aminés
ω-oxidation
Lipolyse/lipogénèse
Glycolyse microsomale
/neoglucogénèse cétogénèse

Goutelettes
lipidiques

inflammation
Metabolisme des ß-oxidation
Stress oxydant xenobiotiques peroxisomale
Les PPARs en thérapeutique
 Maladies métaboliques
• Le diabète s’inscrit dans les maladies métaboliques
comprenant également d’autres pathologies telles que
les dyslipidémies, l’obésité et le syndrome métabolique

• Maladies dont la prévalence augmente à travers le

monde
• Traitement: principalement des règles
hygiénodiététiques, quelques médicaments
intéressants une classe particulièrement attractive
les agonistes des PPARs
 Epidémiologie
 Quelques chiffres…
Diabète
 FRANCE : 2.5 millions de diabétiques non insulinodépendants ou diabète
de type II (= 85% des diabétiques)
 EUROPE : 30 millions
 MONDE : 180 millions … 324 millions de cas en 2025
Obésité
 MONDE : 400 millions d’adultes
Syndrome métabolique
 FRANCE : Prévalence entre 11 et 22.5%
Dyslipidémies
 FRANCE Selon le type d’hyperlipidémie, la prévalence entre 4 à 30%
 Pourquoi cette situation?

 Facteurs qui entretiennent cette situation :

 Vieillissement de la population

 De plus en plus de jeunes atteints (facteurs comportementaux…)

 Maladies souvent ignorées des patients

Cause majeure de morbidité et de mortalité des pays industrialisés.

Problème de santé publique

Importance de diagnostiquer rapidement et de prendre en charge efficacement !

 PPAR et pathologies
Implication des agonistes des PPARs dans de nombreuses voies du métabolisme
énergétique
Intérêt des agonistes

Traitement du syndrome métabolique

Fursin et al. diabetologia 2009
 Agonistes

• Utilisation des agonistes en thérapeutique

– Alpha dans les dyslipidémies: les fibrates
– Gamma dans le diabète de type 2: les glitazones

• Recherche de dual agonistes

– Alpha/gamma: traitement du syndrome métabolique

• Recherche dans d’autres pathologies

– Cancer, inflammation, maladies neurodégénératives,…
 Pb liés aux agonistes PPARs
• Toxicité des glitazones:
– troglitazone: nombreux cas d’hépatotoxicité lors de la mise
sur le marché du médicaments: décès ou greffe du foie
• Toxicité dite idiosynchrasique
• Nb hypothèses mais pas de réel mécanisme d’explication
– rosiglitazone: arrêt suite à de troubles cardiaques
– Une seule molécule encore sur le marché la pioglitazone

• Effets indésirables des glitazones:

– Œdème, prise de poids,…

• Toxicité des glitazars (agonistes alpha et gamma )

– Toxicité cardiaque et rénale
– Développement de cancers lors des études chez le rongeur
(demande spécifique de la FDA)
Etudes des gènes cibles des
ligands de PPARs
 Principe de la transcriptomique
Etude de la modulation de l’expression des gènes
 PPAR alpha
• Effets sur le métabolisme lipidique
– Augmentation du taux de HDL-cholestérol
• Effets sur athérosclérose: diminution des cellules
spumeuses
– induction de CD36, ABCA1
• Effets anti-inflammatoires:
– diminution de IL6, CRP, COX2
• Effets sur l’hémostase
– diminution du fibrinogène
 PPARα et hépatocarcinogénèse
• Administration de proliférateurs de péroxysomes en
chronique chez les rongeurs apparition de tumeurs
hépatiques avec ↑ prolifération cellulaire, ↑ cytokines
pro-inflammatoires, ↓ apoptose
• Etude épidémiologique, pas de tumeurs hépatiques
chez l’homme

recherche du mécanisme d’action

 PPARα et hépatocarcinogénèse
Modulation des gènes de β-oxidation (cyp4A, acox) de
détoxification (catalase, sod), cycle cellulaire (mgmt,
gadd45a)

Modulation de l’activité des protéines de détoxification:

induction catalase, sod

Induction de la prolifération péroxysomale et cellulaire

Hépatocarcinogénèse
 Analyse d’une étude
• Etude de Rakhashenderoo et al. en 2010
• But: mettre en évidence les gènes cibles de PPAR
alpha chez l’homme et la souris
• matériels et méthodes:
– hépatocytes humains (6 donneurs) et hépatocytes de souris
(6 souches)
– Traitement pendant 6 et 24h avec un agoniste PPAR alpha:
WY14643
 Résultats

Bonne corrélation des différentes modulations de gènes entre la souris et l’homme

Identification de quelques gènes spécifiques chez l’homme et la souris
 Résultats

Principaux gènes retrouvés modulés dans

les deux modèles d’études

Rakhanshshandehroo et al. Plos one 2009

 PPARα et hépatocarcinogénèse
• Comparaison de souris WT et humanisées avec
PPARα après traitement par le WY 14643
• Pas de tumeurs avec les souris humanisées
• Induction de c-myc dans les souris WT traitées
– Pb absence de PPRE dans le promoteur de c-myc
• Etude des miRNA
– Inhibition de let7c chez souris WT traitées
– Let 7c est responsable d’une déstabilisation de l’ARNm de
c-myc
 PPAR β/δ
• Fonctions moins connues que celles des autres PPAR

• Rôle dans l’implantation embryonnaire, dans la

prolifération et la différenciation de la peau,
également dans la prolifération préadipocytaire et
dans la régulation de PPAR alpha et gamma

• Souris KO pour PPAR delta: poids fœtal plus bas,

placentation anormalplus de 90% de mortalité
embryonnaire
 Etude sur PPAR β/δ
• Etude réalisée par Dressel et al. 2003

• Analyse de la modulation de gènes impliqués dans le

métabolisme lipidique et glucidique
• Organe étudié: le muscle ( expression majoritaire de
l’isoforme bêta)
• Utilisation des cellules musculaires de rongeurs
C2C12
• Traitement avec un agoniste GW501516 pendant 24h
 Résultats

Hydrolyse des TG : LPL, ACS4, CPT1

Efflux des lipides : ABCA1
Transport du glucose: GLUT4
Stockage du glucose et des lipides: ADRP, GYG1
Absorption du cholestérol : FABP3, CD36
Utilisation préférentielle des lipides : PDK4 Dressel, . et al. Mol Endocrinol 2003;17:2477-2493