UNIVERSITE DE MONASTIR

FACULTE DE PHARMACIE DE MONASTIR

EPU DE BIOCHIMIE

Exploration des protéinuries

Dr Asma Ben Abdelaziz (1)
Dr Nada Yousfi (2)

(1) Laboratoire de Biochimie –Hôpital sahloul

(2) Laboratoire de biologie médicale- Hôpital régional de Ben Arous
 Objectifs

Connaitre les différents types de protéinurie

Connaitre les méthodes de dosage de la protéinurie

et la microalbuminurie

Connaitre les techniques qualitatives d ’exploration

d’une protéinurie
 Plan

Protéinurie Physiologique

Classification des protéinuries

Détection et quantification de la protéinurie

Typage de la protéinurie
 Plan

Protéinurie Physiologique

Classification des protéinuries

Détection et quantification de la protéinurie

Typage de la protéinurie
5

La protéinurie physiologique

 Au niveau rénal, les protéines plasmatiques subissent 2 phénomènes successifs : une

filtration glomérulaire et un métabolisme de réabsorption/catabolisme tubulaire

Image source: Madhero88 https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Physiology_of_Nephro

 Protéines faibles Protéines taille Protéines de grande taille >70kD
taille <5kD moyenne <70kD
Le coefficient de
tamisage
glomérulaire des
protéines

5kD 70kD

Passage libre Filtration dépendante de la Absence de passage

taille et de la charge
DELANGHE SEPTEMBER 2021 (positive>neutre>négative)
EFLM Syllabus Course
7
La protéinurie physiologique
• Protéinurie <150 mg/24H ( <130mg/24H)
• Albuminurie < 30 mg/24H
• Enfant <4mg/m2/h ou <100/m2/24H

La mucoprotéine de Tamm-Horsfall,
protéine synthétisée et sécrétée
spécifiquement dans la branche ascendante
large de l’anse de Henlé

D’après T. Le Bricon. ABC

 Plan

Protéinurie Physiologique

Classification des protéinuries

Détection et quantification de la protéinurie

Typage de la protéinurie
 Classification de la protéinurie

Les protéinuries

Intermittente Pré rénale Rénale Post rénale

HTA ,
Hyperthermie Lésion
Orthostatique Lésion du
Concentration glomérulaire ou
, d’effort, post tubulaire ( ou les
tractus
prandial protéique urogénital
élevée = deux )
protéinurie de
surcharge
 Classification de la protéinurie

Les protéinuries

Intermittente Pré rénale Rénale Post rénale

HTA ,
Hyperthermie Lésion
Orthostatique Lésion du
Concentration glomérulaire ou
, d’effort, post tubulaire ( ou les
tractus
prandial protéique urogénital
élevée = deux )
protéinurie de
surcharge
D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries

Mécanisme de la protéinurie de surcharge

et de la protéinurie rénale
Lésion mixte
Protéinuries Caractéristiques
Fonctionnelles Transitoires, modérées, disparaissent
avec la cause, absence d’atteinte
rénale.
Glomérulaires Massives, prépondérance de
rénales macroprotéines, dues à une altération
de la FG.
Tubulaires Permanentes, modérées, rares,
rénales souvent transitoires, dues à une
réabsorption incomplète des
protéines de faible PM suite à une
lésion tubulaire ou à un dépassement
de la réabsorption.
Mixtes Massives, composition complexe,
atteinte glomérulaire et tubulaire,
peuvent s’associer à une insuffisance
rénale
Pré-rénales ou Hyperproduction de protéines de
de surcharge faible PM, dépassement des
capacités de RT, protéinurie très
variable (0,3 – 30 g/24h).
Post-rénales Quantitativement et qualitativement
variables, dues à des lésions du
tractus urinaire.
Situations cliniques
HTA, insuffisance cardiaque, hyperthermie,
effort prolongé, stress, grossesse,
orthostatisme, post-prandiale.
Maladies systémiques (carcinomes,
hémopathies malignes, lupus érythémateux
systémique, toxémie gravidique, diabète),
infectieuses, rénales (syndrome néphrotique,
néphropathies immunologiques), médicaments,
toxiques.
Maladies congénitales (Wilson, galactosémie,
acidose tubulaires), intoxications, myélome,
lupus érythémateux systémique.
Pyélonéphrite, glomérulonéphrites chroniques,
atteinte rénale myélomateuse, accident
vasculaire rénal.
Chaînes légères libres ou protéinurie de Bence-
Jones (myélome, Waldenström), hémopathies
malignes, carcinome bronchique, myolyse et
myosite, syndromes hémolytiques, fibrinolyses.
Lithiase urinaire, infection uro-génitale, cancer
des voies urinaires.
68
 Plan

Protéinurie Physiologique

Classification des protéinuries

Détection et quantification de la protéinurie

Typage de la protéinurie
 Détection et quantification
de la protéinurie
 Pré analytique :
 Urines de 24 h (+ 4 °C, antiseptique) => Protéinurie de 24H
 Miction ponctuelle :
 protéines (mg/L),
 protéines/créatinine (mg/mmol) => une bonne corrélation avec la proteinurie de 24h
 Protéinurie fractionnée :
 le matin, à jeun vide sa vessie => allongé 1 h Pvt 1 => debout 1 h Pvt2 =>effort Pvt3=>
repas vide sa vessie Pvt3

1 2 3 4
+ + + + PU permanente
- + + + PU orthostatique
- - + - PU d’effort PU intermittentes
- - - + PU postprandiale
 Dépistage de la protéinurie
à la bandelette
 Urine non centrifugée
 seuil de détection 150 mg/l
 Inconvénients :
 Lecture subjective : opérateur-dépendant (solution : lecteur de bandelettes automatique )
 Faux négatifs/sous estimation :
 la réactivité est fortement affectée par la composition protéique : très sensible à l’albumine, peu ou pas aux
chaînes légères libres
 Faux positifs :
 urine fortement alcaline.
 présence de sang (hématurie, règles)
 présence de pus (infection urinaire) ou de sécrétions prostatiques ou menstruation
 Avantages :
 Pratiqué au lit de patient
 Dépistage
 Une fois décelée, il est important de la caractériser la protéinurie de façon quantitative et qualitative
afin d'en déterminer l'étiologie
 Dosage de la protéinurie totale

 Méthodes par précipitation en milieu alcalin (chlorure de benzéthonium) avec

détection par néphélémétrie ou turbidimétrie
 Avantage :
 Moins sensible à la composition protéique de l'urine

 Inconvénients :
 Interférences avec certains médicaments

 Méthodes colorimétriques : le rouge de pyrogallol (méthode de Fujita, 1983), le

violet de pyrocatéchol (chimie sèche)
 Avantages (rouge de pyrogallol) :
 Meilleur compromis actuel (sensibilité, spécificité, praticabilité, coût)
 Domaine de mesure : 0,05 - 4 g/L

 Inconvénients:
 Réactivité non homogène les différents protéines (en particulier les chaînes légères
 Problème du choix du calibrant: albumine (forte réactivité),globulines (faible réactivité) ou
mélange albumine/globulines (réactivité intermédiaire) => solution: addition de SDS dans le réactif
= détergent anionique diminue la réactivité des colorants vis à vis de l'albumine et augmente celle
des globulines de manière dose dépendante => meilleure identité de réaction entre albumine et
globlines
 Plan

Protéinurie Physiologique

Classification des protéinuries

Détection et quantification de la protéinurie

Typage de la protéinurie
 Typage des protéinuries

Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des

protéines spécifiques )

Méthodes globales électrophorétiques

 Typage des protéinuries

Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des

protéines spécifiques )

Méthodes globales électrophorétiques

 Méthodes spécifiques immunologiques

La présence et/ ou l’augmentation de certaines

protéines au niveau des urines peut donner une idée sur:
Le niveau de la lésion ( rénale, post rénale , pré rénale )
La nature de la lésion : glomérulaire , tubulaire…
Méthodes spécifiques immunologiques
 Albuminurie : définition

24 h Recueil sur 4h Échantillon d’urine

(mg/j) (g/min) (g/mg
de créatinine) *
Alb. normale < 30 < 20 < 30
Microalbuminurie 30 - 300 20 – 200 30 - 300
Protéinurie > 300 > 200 > 300

L’utilisation du rapport microalbuminurie / créatinine urinaire a été

validée par la HAS en 2011 comme une alternative à la
microalbuminurie . Il permet de s’affranchir au recueil des urines de
24H et remédier aux variations physiologiques (activité physique)
 Albuminurie : intérêt

Indicateur de la
qualité de la de
la barrière
glomérulaire
 Albuminurie : intérêt

Marqueur de
diagnostic et
du suivi de
la néphropathie
du sujet
diabétique
Albuminurie :Méthodes de dosage

Méthode turbidimétrique
Méthode néphélémétrie
Bandelettes urinaires ??

Rapport EEQ Biorad novembre 2021

3
 Typage des protéinuries

Méthodes spécifiques immunologiques (dosage des

protéines spécifiques )

Méthodes globales électrophorétiques

 Méthodes globales électrophorétiques

 Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :

Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation

de la protéinurie

Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig

complète et ou chaine légère
 Méthodes globales électrophorétiques

 Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :

Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation

de la protéinurie

Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig

complète et ou chaine légère
 Electrophorèse des
protéines urinaires

Hydragel Hydragel Urine Electrophorèse

Hydragel HR®
Protéinurie® Profil(e)® capillaire
 Electrophorèse sur Hydragel
Protéinurie® (Sebia)
1. Les différentes protéines : sont traités par
un détergent anionique « le dodécyl
sulfate de sodium (SDS) » les différentes
protéines prennent la même charge
2. Séparation des protéines en fonction de
leurs poids moléculaires sur le gel
d’agarose à 50 g/L hautement réticulé
3. La coloration au violet acide permettent la
détection des protéines
4. les protéines individuelles d'origine
tubulaire (<65-70 kDa) et d'origine
glomérulaire (> 65 à 70 kDa) sont
clairement séparés.
5. La protéinurie peut être non seulement
détectée mais également classée en
fonction des protéines détectées
 Electrophorèse sur Hydragel HR® (Sebia)

1. Les différentes protéines : sont traités

par un tampon alcalin (barbital, pH
8,6)
2. Séparation des protéines en fonction
de leurs mobilités éléctrophorétiques (
rapport charge/taille )
3. La coloration au violet acide
permettent la détection des protéines

D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries

 Electrophorèse sur Hydragel HR® (Sebia)

1. Les différentes protéines : sont traités

par un tampon alcalin (barbital, pH
8,6)
2. Séparation des protéines en fonction
de leurs mobilités éléctrophorétiques (
rapport charge/taille )
3. La coloration au violet acide
permettent la détection des protéines

Morrison, T., R. A. Booth, K. Hauff, P. Berardi and A. Visram (2019). "Laboratory assessment of
multiple myeloma." Adv Clin Chem 89: 1-58 D’apres sebia 2014 Electrophorèse et exploration des protéinuries
 Electrophorèse sur Hydragel Urine
Profil(e)® (Sebia)
1. Même principe que Hydragel HR
2. La coloration au violet acide
permettent la détection des
protéines
3. Premier puit (précipitation non
spécifique de toutes les protéines)
4. Sur les autres puits , on réalise une
immunofixation des protéines
permettant une aide au typage
(glomérulaire vs. tubulaire) et
une identification des
composants monoclonaux Anti alpha 1 Microglobuline Anti alpha 2 Maroglobuline
éventuels Anti RBP
Anti beta 2 microglobuline
Anti albumine

Raidelet, L. and T. L. Bricon (2013). "Exploration de la protéinurie au laboratoire." Revue Francophone des Laboratoires 2013(451): 75-82.
 Séparation par électrophorèse capillaire
 Les protéines urinaires sont séparées dans des capillaires de silice en
fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon alcalin
de pH donné et d’un flux électro-osmotique plus ou moins important.
 Les fractions protéiques urinaires sont directement détectées à
l’absorbance spécifique de 200 nm et quantifiées par un pic.
(données Sebia™).
 Méthodes globales électrophorétiques

 Cette exploration est réalisée généralement en deux temps :

Electrophorèse des protéines urinaires: dépistage / caractérisation
de la protéinurie
Immunofixation : pour caractériser le composant monoclonal, Ig
complète et ou chaine légère
Immunofixation : Quand ?

IF sebia , 2014
 Immunofixation : Comment?

 Principe : séparation électrophorétique et une précipitation par des

immunsérums dont obligatoirement des anti-kappa et anti-lambda libres

 2 programmes disponibles :
 Hydragel Urine profile
 Hydragel BJ
 Hydragel BJ Hydragel Urine profile

Même sensibilité GAM , Kappa et lambda libre et totale

IF sebia , 2014
 En résumé

Camare, C. and E. Causse (2013). "[Urinary protein electrophoresis, which analysis to select? A simplified interpretation]." Ann Biol Clin (Paris) 71(6): 667-678.
Merci pour votre attention