Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
I.INTRODUCTION.....................................................................................................................2
II.DESCRIPTIONDULABORATOIRE......................................................................................2
II.1.PRESENTATION.................................................................................................................3
II.1.1.Situation.............................................................................................................................3
II.1.2. Aménagement...................................................................................................................3
II.2. PERSONNEL DU LABORATOIRE...................................................................................2
II.3. HORAIRES DU LABORATOIRE......................................................................................3
II.4. EQUIPEMENTS ET MATERIEL DU
LABORATOIRE....................................................4
A-FONCTIONEMENT DU LABORATOIRE……………………………..
………………….4 A1-ORGANISATION DES
COMMANDES………………………………………..………...4 IV. ETAPES PRE-
ANALYTIQUES..........................................................................................4 1. DEMANDES
D’ANALYSES.................................................................................................4
2. PRELEVEMENTS.....................................................................................................……….5
3.ENREGISTREMENT..............................................................................................................6
V.ETAPESANALYTIQUES....................................................................... ...…...……………6
2. Maintenance ..............................................................................…........................................11
6. ENTRETIEN DU LABORATOIRE.....................................................................................12
1
I-INTRODUCTION
Sortie de l’ESTBA Ecole des techniques biologiques et alimentaires et en vue de renforcer
nos connaissances technique dans le domaine biomédicale, nous avons effectué un stage de
perfectionnement, avec une équipe et dynamique et jeune, au laboratoire du prestigieux
hôpital Sainte Joséphine BAKHITA dirigé par la Révérende Sœur Marthe BABAMOU.Ce
stage s’est déroulé du 13 Février au 13 Mai 2023
II. DESCRIPTION DU LABORATOIRE
II.1. PRESENTATION
II.1.1. SITUATION
• Équipements lourds
- Trois microscopes
- Deux automates d’hématologie 5 diff Mindray BC 5150 et BC 5000 -
Automate mindray BS-280 pour la biochimie
- Un automate hématologie 5 diff Mindray BC 5000
- Un spectrophotomètre
- Une centrifugeuse
- Quatre réfrigérateurs dont deux pour les réactifs et un pour la conservation des
échantillons et un dernier pour la conservation des milieux de culture. - Un automate
Minilite PLUS pour la réalisation de l’électrophorèse - Un coagulomètre pour les
différents examens d’hémostase
- Appareil Finecare pour la réalisation de l’hémoglobine glyquée, PSA total, β HCG
sanguin…
- Une hotte à flux laminaire
- Deux autoclaves
- Un incubateur
- Un dispositif de réalisation de l’électrophorèse
• Équipements légers
- Un hémocue (Lecteur de TH)
- Un rhésuscope
- Une plaque opaline
- Des minuteurs, râtelier, bac à coloration
- Une cloche
- Des Camping-gaz
• Matériels
- Des tubes (sec, EDTA, Citrate, à hémolyse), des lames et lamelles, portoirs - Des
gants, du papier hygiénique, des micropipettes et embouts - Du coton, des aiguilles et
corps vacutenaires et aiguilles jaunes, des
Lancettes, garrots, alcool 95° et 70°, eau physiologique, eau distillée, eau
oxygénée, huile à immersion javel, colorants, des tubes VS (Vitesse de
sédimentation)
- Anses de Koch et anses calibrées stériles, écouvillons stériles - Les boîtes de pétri -
Etc….
A. FONCTIONNEMENT DU LABORATOIRE
A.1.ORGANISATION DES COMMANDES DES RÉACTIFS ET CONSOMMABLES
Selon les besoins du laboratoire les réactifs et les consommables sont commandés par le chef
de laboratoire sur le rapport du responsable de stock. Lorsque le réactif veut être entamé, on
inscrit la date d'ouverture dessus. Après utilisations, le réactif est
1. DEMANDES D’ANALYSES
Les demandes d’analyses peuvent être internes ou externes. Les demandes externes
proviennent des autres centres hospitaliers et les demandes internes proviennent des services
internes dudit centre et sont faites par les médecins ou les cliniciens traitant. Sur les bulletins
nous pouvons trouver des informations telles que : le nom, le prénom, l’âge, le sexe, les
informations sur le prescripteur, la date de la demande la nature de l’analyse ainsi que le
diagnostic posé.
2. PRELEVEMENTS
Les différents types de prélèvements :
Les prélèvements sont effectués en fonction des examens biologiques demandés par les
prescripteurs. Ainsi au niveau de chaque département on note ceci :
❖ Département d’immuno-sérologies
Il s’agit essentiellement des prélèvements sanguins veineux réalisés dans un tube sec, on peut
utiliser également le plasma pour réaliser les tests sérologiques. Les échantillons d’urines sont
destinés au test de grossesse.
❖ Département d’hématologie
Les prélèvements effectués sont des prélèvements sanguins veineux dans des tubes EDTA. Le
patient n’est pas obligé d’être à jeun. Pour l’hémostase, les prélèvements sont faits dans des
tubes citrates.
❖ Département de biochimie
Il s’agit essentiellement des prélèvements sanguins veineux réalisés dans des tubes à gel (ou
tube sec) y compris pour la réalisation de l’ionogramme. Le prélèvement pour la réalisation
de l’hémoglobine glyquée qui se fait dans un tube EDTA.
❖ Département de bactériologie 5
Il s’agit essentiellement des prélèvements vaginaux (PV), les urines pour l’ECBU, les selles
pour la coproculture, et quelques fois les pus divers pour l’ECB du pus.
RAPPORT REDIGE PAR TSL YAOVI & TSL FADOLO
5
LISTE DES ANALYSES REALISEES AU LABORATOIRE
3. ENREGISTREMENT
Tout échantillon, quel que soit sa provenance, est soumis d’abord à une vérification de la
conformité entre les informations de l’étiquette et le bulletin d’analyse. On vérifie si le
prélèvement rempli tous les critères nécessaires pour être traités : (contenant, transport, durée,
…). On attribue un numéro d’ordre au prélèvement et son bulletin. Les résultats des
différentes étapes sont enregistrés dans les cahiers de paillasse. A la fin des manipulations, les
résultats sont transcrits dans les registres du laboratoire avec les informations sur le bulletin
(numéro d’ordre du laboratoire, nom et prénoms du patient, âge, sexe, service de provenance,
le nom du prescripteur)
V. ETAPES ANALYTIQUES
Techniques
❖ Département d’immuno-sérologie
Nous utilisons pour la plupart des bandelettes et des cassettes en tests rapides pour réaliser
les analyses et des cassettes.
La CRP latex est réalisés sur la carte à fond noire et le groupage- rhésus sur la plaque
L’hémoglobine glyquée et les hormones sont dosées sur l’automate FINECARE FIA
METER FS114 à l’aide de sérum, plasma ou sang total.
➢ SEROLOGIE DU VIH
• Principe
C'est un test immun chromatographique pour la détection qualitative des anticorps anti- VIH1
et anti-VIH2. Après dépôt du sérum, du plasma ou du sang total au niveau de la zone de dépôt
de l'échantillon, il migre jusqu'à la zone de dépôt du conjugué où il se reconstitue et se
mélange avec le conjugué colloïde de sélénium-antigène. L'ensemble de ce mélange continue
de migrer sur la phase solide jusqu'aux antigènes recombinants immobilisés et aux peptides
synthétiques au niveau de la « fenêtre-patient » :
- Si les anticorps anti-VIH-l et/ou anti-VIH-2 sont présents dans l'échantillon, ils se lient à
l’antigène du conjugué antigène-colloïde de sélénium et à l'antigène de la fenêtre-patient en
RAPPORT REDIGE PAR TSL YAOVI & TSL FADOLO
7
formant une ligne rouge.
- Par contre, si les anticorps anti-VIH-l et/ou anti-VIH-2 sont absents, le conjugué antigène
colloïde de sélénium traverse la fenêtre-patient sans former de ligne rouge. Dans les deux (2)
7
Cas (présence ou absence d'Ac anti VIH), la validité du test est confirmée par l’apparition
d’une ligne rouge au niveau de la « fenêtre contrôle »
• Procédure
Déposer 50µl ou une goutte de sérum sur la partie échantillon Laisser migrer le sérum et lire le
résultat au bout de 15 minutes.
• Lecture et interprétation des résultats
- Présence de deux traits (trait contrôle et trait test) : Test positif
- Présence d’un seul trait (trait contrôle) : Test négatif
- S’il y a apparition du trait test seul ou absence des deux traits Test non valide
Pour le HIV, on utilise comme premier test le Détermine HIV1/2/0. Si le test est négatif, on
sort le résultat négatif. Mais si le test est positif, on fait un second test (Tri-Dot). Si le second
test est positif on sort le résultat positif. Dans l’algorithme national du dépistage du VIH, il est
recommandé de faire un troisième test. Et s’il est positif on sort le résultat positif. Si ce
troisième test est négatif on sort le résultat négatif. Mais si le résultat est indéterminé, il faudra
faire un contrôle dans un mois chez le patient en question. Les tests sont classés selon la
spécificité. Le troisième test est plus spécifique que le deuxième test ainsi que le premier. Au
CHR-Tsévié le troisième test n’est pas réalisé. Donc si le second test est négatif, on dit qu’il y
a discordance et on donne au patient un rendez-vous un mois plus tard pour faire le contrôle.
Les indications sur la cassette de TRI DOT permettent de distinguer le VIH1 et le VIH2.
Département d’hématologie
Elle se fait sur les automates à 5 différentiels MINDRAY BC 5150 et BC 5000 selon les
princes suivants :
Les méthodes de mesure utilisées dans cet analyseur sont : la méthode d'impédance
électrique pour déterminer les nombres de globules rouges et de plaquettes ; la méthode
colorimétrique pour déterminer le taux d'hémoglobine, la cyrtométrie en flux par laser pour
déterminer les nombres de globules blancs. Cet appareil peut traiter deux types d'échantillons
de sang, des échantillons de sang total et des échantillons pré-dilués. Les échantillons sont
homogénéisés par un mouvement de rotation doux avant d’être passés à l’automate.
❖ UINITE DE BACTERIOLOGIE
8
-2 ème
jour
- Lecture des milieux ensemencés (aspect et types de colonies sur gélose et pour les
bouillons, noter la turbidité, présence ou non de voile et de dépôt au fond du
tube, virage du milieu)
- Gram de contrôle sur les colonies suspectées
- Tests d’identification et d’orientation
- Repiquage sur milieu gélosé à partir d’un bouillon si pas de culture sur gélose
ensemencée la veille.
- Réaliser l’antibiogramme sur les souches identifiées
- Incuber les milieux selon l’exigence des germes o
- 3ème jour
- Lecture de l’antibiogramme (sensibilité et résistance du germe face aux disques
d’antibiotique par mesure du diamètre des zones d’inhibition autour des disques et
comparaison aux valeurs de la fiche de références) - Lecture des boîtes repiquées la
veille
- Enregistrement et sortie des résultats prêts
➢ Exemple de Procédure de réalisation de l'ECBU
Examen macroscopique
On note l'aspect des urines : limpides, troubles, purulentes, hémorragiques, porto etc....
Examen microscopique
Cytologie quantitative
On dénombre les leucocytes et les hématies par mm3 sur des urines préalablement
homogénéisées. Avec la cellule de Nageotte on Exprime le nombre d’éléments énumérés par
mm3 ou par ml d'urines. On compte les éléments dans 8 bandes (10 mm³) et diviser le nombre
obtenu par 10 pour avoir le résultat en mm3(Ramener alors le résultat en ml d'urines en
multipliant par 103 étant donné que la bactériurie est exprimée en ml.
Cytologie qualitative
Sur un culot urinaire obtenu après centrifugation de 10 ml d'urines à 2000 tours/min pendant
10 min, noter la présence de : cristaux, cylindres, parasites (Trichomonas vaginalis, oeufs de
Schistosoma haematobium), cellules épithéliales, vésicales, rénales, leucocytes, hématies,
levures, spermatozoïdes.
Conditions de mise en culture des urines
Bactériurie
Pour tous les sujets faire la bactériurie : la présence d'une ou plusieurs cellules bactériennes
par champ implique en général la présence d'au moins 105bacteries/ml de prélèvement.si la
bactériurie est supérieure à 105bacteries/ml passer à l’identification
Identification
L'identification doit être effectuée aussi rapidement que possible. Comme la plupart des
infections des voies urinaires sont provoquées par E. coli, on procèdera à l’identification des
entérobactéries en ensemençant la galerie
L’antibiogramme
On réalise l'antibiogramme pour identifier la sensibilité et la résistance des germes identifies et
isoles.
On décrit l’aspect macroscopique. La recherche des kystes œufs et parasites se fait au
microscope aux objectifs 10X et 40X. Il est à préciser que les numéros d’identification
unique des patients sont reportés sur les lames.
❖ LABORATOIRE DE PARASITOLOGIE10
• Lames GE-FM (Goutte Epaisse-Frottis Mince)
La Lecture de la goutte épaisse après coloration se fait au microscope à l’objectif X100(ou
objectif à immersion) en cas de positivité de la GE on identifie l’espèce plasmodiale sur le
frottis. Puis nous faisons le calcule de la densité parasitaire (DP) selon la formule :
DP = (Nombre de parasites/ Nombre de leucocytes) x 8000 ou Nb Nb :
RAPPORT REDIGE PAR TSL YAOVI & TSL FADOLO
10
Numération blanche du patient
Contrôle de qualité
Le contrôle de qualité peut être interne et externe.
Pour le contrôle interne il est fait par le responsable du laboratoire et les autres techniciens
supérieurs de laboratoire en utilisant des sérums contrôle normale et pathologique et le sang
contrôle.
Le contrôle de qualité externe est assuré par la division des laboratoires à travers leur projet
d’audit qualité organisé. Un exemple de contrôle qualité externe est celui réalisé par le
PNLP, Il est organisé chaque trois mois, des contrôles de qualité par rapport aux lames de
GE-FM ; les contrôleurs lisent les lames de GE et comparent leurs résultats avec ceux des
TSL. Le laboratoire peut aussi décider de comparer ces résultats à un autre laboratoire et
s’échanger des échantillons pour un contrôle de qualité externe.
Validation
La validation des résultats est une étape très importante. Il existe la validation technique
effectuée par le ou les techniciens ayant manipulé en comparant les résultats trouvés aux
normes tout en tenant compte des conditions dans lesquels se sont réalisées les analyses et la
validation biologique effectué par le responsable du laboratoire.
Comptes rendus
Lors de la manipulation, les résultats sont reportés dans le cahier de paillasse. C’est à ce
moment que s’effectue la validation technique. Après manipulation et validation technique,
on enregistre dans les différents registres et les résultats sont reportés sur leurs fiche de
résultats puis s’en suit la signature et la compilation dans les enveloppes. En annexe
quelques fiche de résultats
11
VI.ETAPES POST-ANALYTIQUES
La maintenance préventive est assurée par les techniciens et consiste à l’entretien des
RAPPORT REDIGE PAR TSL YAOVI & TSL FADOLO
11
équipements de laboratoire qui s’effectue chaque matin avant et après l’utilisation de
l’appareil ; il s’agit en effet du nettoyage, du calibrage, de l’étalonnage, des
rinçages…
La maintenance curative est assurée par les maintenanciers biomédicaux. 3.
ELIMINATION DES DECHETS
12
VII. OBSERVATIONS PERSONNELLES ET SUGGESTIONS
Au cours de notre stage, nous avons apprécié l’accent mis sur l’accueil du patient le
dynamisme du personnel qui travaillent dure et qui dépasse les heures de travail proprement
dites du laboratoire. Leur détermination et leur amour pour le travail est une source de
motivation pour nous et tout ceci dans le but de pouvoir satisfaire la
Clientèle. Nous avons remarqué aussi l’attention prêté au laboratoire par la direction en
matière d’équipements et matériels. Nous avons été encadrés par l’ensemble du technicien
avec qui nous avons partagé les connaissances et des moments agréables.
Nous félicitons surtout la direction a sa tête la révérende sœur Marthe qui ne ménage aucun
effort en mettant a la disposition du laboratoire et du centre tout le matériel indispensable pour
un résultat fiable pour une meilleur prise en charge des patients.
RAPPORT REDIGE PAR TSL YAOVI & TSL FADOLO
12
A côté de ceci nous avons aussi noté quelques lacunes :
-Insuffisance du personnel ; Ce qui est déjà réglé par la Révérende Sœur en nous proposant un
contrat.
-non-respect des heures de prélèvements et de retrait des résultats par les patients ; Le
personnel de garde est obligé d’aider le service du jour avant son départ en raison de
l’affluence.
Quelques suggestions :
- Afficher les procédures de manipulation pour chaque appareil si possible
VIII. CONCLUSION
Nous faisons un travail qui repose sur trois Étapes : les étapes pré analytique, analytique et
post-analytique. La réalisation de ces actes exige une attention très particulière, une
concentration et le respect strict des règles entourant ce travail en vue d’obtenir des résultats de
qualité pour une meilleure prise en charge des patients. Notre stage à l’hôpital Sainte
Joséphine BAKHITA à été très bénéfique pour nous tant sur le plan professionnel que social et
nous avons surtout apprécié l’effort que consentie la directrice qui met tout a la disposition du
personnel du laboratoire en vue d’obtenir un résultat de qualité
IX-REMERCIEMENTS
13