Université Mustapha Stambouli de Mascara
Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Spécialité ANP
Module Technologie et techniques d'analyses physico-chimiques et biochimiques
Enseignants de TP : M. SACI Ahmed & M. BENCHOHRA Mokhtar
Chromatographie planaire
La chromatographie
La chromatographie est une technique séparative
analytique et/ou préparative. Elle consiste à faire
migrer les constituants à séparer sur une phase
stationnaire immobile, à l’aide d’une phase
mobile, liquide ou gazeuse, de nature différente.
Chaque molécule sera plus ou moins rapidement
entraînée selon son affinité pour, respectivement,
la phase stationnaire et la phase mobile,
permettant la séparation des différents
constituants présents.
Types et classification
En fonction de la nature de la phase stationnaire,
la nature de la phase mobile, le type de support
et de la nature des interactions entre ces phases
et les molécules à purifier, il existe de nombreux
types de chromatographie.
Nature des phases :
 Chromatographie en phase liquide.
 Chromatographie en phase gazeuse.
 Chromatographie en phase supercritique.
Nature des interactions :
 Chromatographie d’adsorption.
 Chromatographie de partage.
 Chromatographie d’échange d’ions.
 Chromatographie d’exclusion.
Niveau : L3
Chargé de module : Mlle. KIARI Fatima
Type de support :
 Chromatographie sur colonne.
 Chromatographie planaire.
La chromatographie planaire
La chromatographie planaire, chromatographie
sur couche plane, chromatographie sur papier, ou
chromatographie sur couche mince (CCM), est
une technique rapide, sensible et peu coûteuse
utilisée pour déterminer le nombre de
composants dans un mélange, vérifier l'identité
et la pureté d'un composé, surveiller la
progression d'une réaction, déterminer la
composition du solvant pour les séparations
préparatives, et analyser les fractions obtenues
par chromatographie sur colonne.
Principe de la chromatographie planaire
Au cours du développement, les molécules
effectuent un va-et-vient continu entre les états
libre et adsorbé (Figure 1.A). Un équilibre des
forces intermoléculaires détermine la position
d'équilibre et donc la capacité du solvant à
déplacer le soluté vers le haut de la plaque. Cet
équilibre dépend de
1. La polarité du matériau de revêtement
(phase stationnaire).
2. La polarité du solvant de développement.
3. La polarité de la ou des molécules de
l'échantillon.
M. SACI Ahmed Page 1
Par exemple : avec un échantillon constitué de
deux composés A et B comme illustré dans la
Figure 1.B, si les molécules A passent plus de
temps dans la phase mobile, elles seront
transportées plus rapidement dans la phase
stationnaire et se déplaceront plus loin dans un
certain temps. Alors que les molécules B sont
plus adsorbées sur la phase stationnaire que A,
les molécules B passent moins de temps dans la
phase mobile et se déplacent donc plus lentement
dans la phase stationnaire et ne se déplacent pas
aussi loin dans le même laps de temps. La
conséquence est que A se sépare
progressivement de B au fur et à mesure que la
phase mobile monte.
Figure 1 : A : Mélange de A et B adsorbés sur la phase
stationnaire et libres en phase mobile ; B : représentations
du principe de séparation.
Le choix des systèmes phases mobile et
stationnaire
1. Phase stationnaire :
Pour la sélection d'un adsorbant, on considère les
propriétés des composés à séparer :
premièrement, la solubilité des composés
échantillonnés (hydrophiles ou hydrophobes) ;
ensuite, si les composés peuvent réagir
chimiquement avec l'adsorbant ou l'éluant. Sur la
base de ces considérations, il est recommandé
que :
 Pour les substances lipophiles : il
convient d'utiliser de la silice, de l'oxyde
d'aluminium, de la cellulose acétylée, du
polyamide.
 Pour les substances hydrophiles : il
convient d'utiliser de la cellulose, des
échangeurs d'ions cellulosiques, du
polyamide et de la silice.
2. Phase mobile (système du solvant) :
Trouver un système de solvant approprié est
généralement la partie la plus difficile des
expériences CCM, le système de solvant est le
facteur ayant la plus grande influence sur la
CCM. Ce n'est que dans quelques cas que le
solvant est constitué d'un seul composant, des
mélanges comprenant jusqu'à cinq composants
sont couramment utilisés. Quel que soit le
nombre de composants présents, le système de
solvant préparé doit être un système homogène
sans signe de trouble. Trois critères sont
généralement pris en compte pour choisir un
système de solvants : la solubilité, l'affinité et la
résolution.
La première étape de la sélection d’un solvant
consiste à déterminer la solubilité de
l’échantillon. La phase mobile souhaitée sera
capable de fournir la plus grande solubilité tout
en équilibrant l’affinité de l’échantillon pour le
solvant et la phase stationnaire pour réaliser la
séparation. La résolution est améliorée en
optimisant l'affinité entre l'échantillon, le solvant
et la phase stationnaire. La plupart des systèmes
de solvants CCM contiennent un solvant polaire
et un solvant moins polaire. La figure 2 illustre
certains solvants courants en phase mobile en
fonction de leurs polarités avec la silice 60
comme phase stationnaire.
M. SACI Ahmed Page 1
 NB : utiliser la Figure 2 pour plus de formules.

Préparation de la phase stationnaire :

 Découper une plaque CCM prêt à l’emploi

selon les dimensions des cuves
chromatographiques.

 Tracer au crayon, à environ 1,5 cm du bord

inférieur de la plaque, un trait qui constitue
la ligne de dépôt.

 Placer sur cette ligne des marques,

régulièrement espacées, dont le nombre est
égal à celui des échantillons à déposer.

Préparation des cuves CCM :

 Verser d'environ 0.5 à 01 cm d'hauteur

(10ml), du système éluant et fermer la cuve
jusqu’à ce qu’elle soit saturée.
Figure 2 : Quelques solvants courants en phase mobile
selon leur polarité. Dépôt des échantillons :

À l'aide d'un tube capillaire, déposer les

Matériel et réactifs
 Cuves chromatographiques (cuves CCM).
 Plaque CCM gel de silice 60.
 Papier buvard.
 Pipettes pasteur en verre (03 pcs).
 Ciseaux.
 Pipettes graduées (10 et 01) ml.
 Hexane ou éther de pétrole (10 ml).
 Acétone ou éthanol ou méthanol (10 ml).
 Eau distillée.
 Extrait de pigments chlorophylliens.
Mode opératoire
Préparation des systèmes solvants :
En raison de la polarité élevée de la phase
stationnaire (gel de silice 60). La phase mobile
doit avoir des propriétés apolaires ou faiblement
polaires donc :
échantillons sur leurs marques respectives. La
tache de dépôt ne doit pas dépasser 3 mm, et il
faut changer de capillaire pour chaque
échantillon.
Élution :
 Introduire la plaque verticalement dans la
cuve (la ligne de dépôt doit être au-dessus
du niveau du solvant). Fermer la cuve.
 Le solvant contenu dans la cuve monte le
long de la plaque (c'est l'étape d'élution).
Attendre que l'éluant arrive à environ 1 cm
du haut de la plaque, puis retirer la plaque et
repérer par un trait la hauteur maximale
atteinte par l’éluant (c'est la ligne de front).
Sécher la plaque.

 Mélanger un volume 9/1 de :

hexane/acétone ; éther de pétrole/acétone ;
hexane/éthanol ou bien éther de
pétrole/éthanol.
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Révélation du chromatogramme : Travail personnel

Dans le cas des composés colorés, le

chromatogramme est directement exploitable.
Mais pour les composés incolores, il est  Quels sont les objectifs de ce TP ?
nécessaire de faire apparaître les taches (c'est
 Quel est le principe de la chromatographie
l'étape de révélation). On peut pour cela utiliser
planaire ?
une lampe à ultraviolet, des vapeurs de diiode ou
une solution de permanganate de potassium.  Quel est le principe de la migration de
l'éluant ?
Exploitation du chromatogramme :
 Quelles sont les limites d'utilisation de la
La distance parcourue entre la ligne de dépôt et
technique de chromatographie planaire ?
le centre de la tache dans des conditions données
(phase fixe et éluant connus) est caractéristique  Réaliser un rapport (compte-rendu) de TP
de l'espèce chimique : elle est identique que
selon la méthode IMRAD.
l'espèce soit pure ou dans un mélange.

Pour identifier une espèce d'un mélange, on peut

donc comparer la distance parcourue pour une
tache d'un mélange avec celle obtenue pour
l'espèce chimique pure. Les espèces qui ont
migré à des hauteurs identiques sont les mêmes.
On peut aussi calculer le rapport frontal (Rf)
pour chaque tache observée :

Rf¿ h ÷ H

h : la distance entre la ligne de dépôt et le centre

de la tache ; c’est la distance parcourue par
l’espèce chimique

H : la distance parcourue par l'éluant dans le

même temps ; c’est la distance entre la ligne de
dépôt et le front du solvant.

Remarque : h et H doivent être exprimées dans

la même unité. Donc Rf est sans unité.

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