Université Gaston Berger de Saint-Louis

UFR des Sciences Agronomiques, de l’Aquaculture et des

Technologies Alimentaires (SAATA)
Section : Technologies Agroalimentaires (T2A)
Niveau : Master 2
Année Académique : 2020-2021

Présenté par : Sous la direction de :

Le
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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE

 Réaction 1 : Hydrolyse Acide de PP

 Résultat 1 : Obtention des acides aminés suivants : Gly, Cys, Pro, Thr, Leu,
Ala, Lys,Asp, Ser, Phe, Met sachant que l’un des acides aminés est en double

 Conclusion 1 : PP : N-(Gly, Cys, Pro, Thr, Leu, Ala, Lys, Asp, Ser, Phe, Met, X)-
OH

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE

 Conclusion 1 : PP : N-(Gly, Cys, Pro, Thr, Leu, Ala, Lys, Asp, Ser, Phe, Met, X)-
OH

 Réaction 2 : Application de la méthode d’Edman sur PP

 Résultat 2 : Libération successive de Leu puis Ser

 Conclusion 2 : Comme la méthode d’Edman permet de libérer tout amino-

acide situé au côté N-terminal (gauche) de la chaine, alors on a :

 PP : N- Leu- Ser-(Gly, Cys, Pro,Thr,Ala, Lys,Asp, Phe,X)-OH

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE

 Conclusion 2 : PP : N- Leu- Ser-(Gly, Cys, Pro,Thr,Ala, Lys,Asp, Phe, Met, X)-OH

 Réaction 3 : Application de la chymotrypsine sur PP

 Résultat 3 : Il n’y a pas d’effet sur PP

 Conclusions 3 : Comme la chymotrypsine ne coupe que le côté C-terminal de Phe,

Trp et de Tyr sauf si (Pro est C-lié), alors Pro est situé au côté droit de Phe et donc :

• Soit Phe est en C-terminal de PP,

• soit Pro est situé au côté droit de Phe

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Pro est situé au côté droit de Phe

 Réaction 4 : Application de la pepsine sur PP

 Résultat 4 : Obtention de 3 fragments :
 F1 : Met,Thr,Ala, Lys, Phe, Pro,Asn ;
 F2 : Cys, Ser, Gly, Leu
 F3 : Leu
 Conclusion 4 : Comme la pepsine coupe le côté gauche de Phe, Trp, Tyr, Leu, Asp, Glu sauf
si Pro est à leur gauche alors on a :
 F1 : N- Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-),;
 F2 : N- Leu- Ser-(Cys, Gly)-OH
 F3 : N-Leu-OH
 PP : N-Leu-Ser(Cys, Gly)-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-)-Leu-OH 23/02/2021 7
 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Pro est situé au côté droit de Phe
 Conclusion 4 :
 F1 : N- Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-),;
 F2 : N- Leu- Ser-(Cys, Gly)-OH
 F3 : N-Leu-OH
 PP : N-Leu-Ser(Cys, Gly)-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-)-Leu-OH
 Réaction 5 : Application de la carboxypeptidase sur le fragment F2
 Résultat 5 : Libération de Gly puis Cys.
 Conclusion 5 : Comme la carboxypeptidase permet de libérer tout aminoacide situé au côté C-
terminal de la chaine, alors on a : F2 : N- Leu- Ser-Cys-Gly-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-)-Leu-OH

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Pro est situé au côté droit de Phe

 Conclusion 4 :
 F1 : N- Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-),;
 Conclusion 5 :
 F2 : N- Leu- Ser-Cys-Gly-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, (Phe-Pro)-)-Leu-OH
 Réaction 6 : Application de la trypsine sur PP
 Résultat 6 : Libération de Phe et d’un Oligopeptide O1
 Conclusion 6 : Comme la trypsine ne coupe que le côté C-terminal de Lys et Arg sauf
s’ils sont liés à leur côté droit à Pro, alors : Pro n’est pas situé au côté droit de Phe


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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Phe est en C-terminal de PP,
 Conclusion 2 : PP : N- Leu- Ser-(Gly, Cys, Pro,Thr,Ala, Lys,Asp, Phe, Met, X)-OH

 Réaction 3 : Application de la chymotrypsine sur PP

 Résultat 3 : Il n’y a pas d’effet sur PP

 Conclusions 3 : Comme la chymotrypsine ne coupe que le côté C-terminal de Phe,

Trp et de Tyr sauf si (Pro est C-lié), alors Pro est situé au côté droit de Phe et donc :

• Soit Phe est en C-terminal de PP,

• soit Pro est situé au côté droit de Phe

 PP : N- Leu- Ser-(Gly, Cys, Pro,Thr,Ala, Lys,Asp,, Met, X)-Phe -OH

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Phe est en C-terminal de PP,

 Réaction 4 : Application de la pepsine sur PP

 Résultat 4 : Obtention de 3 fragments :
 F1 : Met,Thr,Ala, Lys, Phe, Pro,Asn ;
 F2 : Cys, Ser, Gly, Leu
 F3 : Leu
 Conclusion 4 : Comme la pepsine coupe le côté gauche de Phe, Trp, Tyr, Leu, Asp, Glu sauf si
Pro est à leur gauche alors on a :
 F1 : N- (Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH
 F2 : N- Leu- Ser-(Cys, Gly)-OH
 F3 : N-Leu-OH
 PP : N-Leu-Ser(Cys, Gly)-Leu-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH
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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Phe est en C-terminal de PP
 Conclusion 4 :
 F1 : N- (Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH
 F2 : N- Leu- Ser-(Cys, Gly)-OH
 F3 : N-Leu-OH
 PP : N-Leu-Ser(Cys, Gly)-Leu-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH
 Réaction 5 : Application de la carboxypeptidase sur le fragment F2
 Résultat 5 : Libération de Gly puis Cys.
 Conclusion 5 : Comme la carboxypeptidase permet de libérer tout aminoacide situé au côté C-
terminal de la chaine, alors on a : F2 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH

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 SÉQUENÇAGE DE POLYPEPTIDE
 Cas où Phe est en C-terminal de PP

 Conclusion 5 :
 F2 : N- Leu-Ser-Cys-Gly-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met, Thr, Ala, Lys, Pro)-Phe-OH
 Réaction 6 :Application de la trypsine sur PP
 Résultat 6 : Libération de Phe et d’un oligopeptide O1
 Conclusion 6 : Comme la trypsine ne coupe que le côté C-terminal de Lys et Arg sauf s’ils sont liés à
leur côté droit à Pro, alors on a :
 O1 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Lys-OH

 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Lys-Phe-OH

O1
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 Cas où Phe est en C-terminal de PP

 Conclusion 6 :
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Lys-Phe-OH

O1
 Réaction 7 :Application du Bromure de cyanogène sur O1
 Résultat 7 : Libération de Lys et d’un oligopeptide O2
 Conclusion 7 : Comme le bromure de cyanogène ne coupe que le côté C-terminal de
Met, alors on a : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Asn-(,Thr,Ala, Pro)-Met-Lys-OH

O2
 O2 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Asn-(,Thr,Ala, Pro)-Met-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Met-Lys-Phe-OH
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 Cas où Phe est en C-terminal de PP
 O1 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Lys-OH
 O2 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(,Thr,Ala, Pro)-Met-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-(Met,Thr,Ala, Pro)-Met-Lys-Phe-OH
 Réaction 8 : Application de la carboxypeptidase sur O2
 Résultat 8 : Libération successive de Met, Ala, Thr, puis Pro.
 Conclusion 8 : Comme la carboxypeptidase permet de libérer tout aminoacide situé au
côté C-terminal de la chaine, alors on a : O2 : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-Pro-Thr-
Ala -Met-OH
 PP : N-Leu-Ser-Cys-Gly-Leu-Asn-Pro-Thr-Ala-Met-Lys-Phe-OH

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 Cas où Phe est en C-terminal de PP

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By NDIAYE Ibrahima