UNITE DE VIROLOGIE DU CHUSS-HOPITAL DU JOUR

PROCEDURE DE DETECTION D’IgG ANTI-SARS-CoC-V-2

WANTAI SARS-CoV-2 Ab ELISA

Rédigé par : Panebyame Abdoul Aziz BELEM 06/11/2022

Version 01 Vérifié par : Yacouba SAWADOGO --/11/2022
Approuvé le
Date d’application Approuvé par : Abdoul Salam OUEDRAOGO
--/11/2022

SOMMAIRE
1. Objet..................................................................................................................................1
2. Diffusion...........................................................................................................................1
3. Destinataires....................................................................................................................1
4. Echantillons.....................................................................................................................1
5. Matériel et réactifs...........................................................................................................2
5.1. Réactifs et consommable....................................................................................................2
5.2. Préparation des réactifs......................................................................................................3
6. Procédure opératoire......................................................................................................4
7. Analyse des résultats......................................................................................................5
8. ATTESTATION DE LECTURE ET DE COMPREHENSION.............................................7

1. Objet
Assurer des résultats de sérologie corrects et fiables

2. Diffusion
Classeur des procédures et copie dans les classeurs des procédures du laboratoire.

3. Destinataires
Pharmacien biologistes, Biologistes, Technologistes biomédicaux et stagiaires

4. Echantillons
Sérum ou Plasma
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5. Matériel et réactifs

5.1. Réactifs et consommable

Kit WANTAI SARS-CoV-2 Ab ELISA for Total Antibody to SARS-CoV-2

 Plaque de 96 puits (barrettes détachables) coatés avec la protéine

Spike du SARS-CoV-2
 Contrôle Positif (Couleur rouge dans un flacon à bouchon rouge)
 Contrôle Négatif (jaune dans un flacon à bouchon verte)
 Solution de lavage concentrée (incolore dans un flacon à bouchon
blanc)
 Conjugué HRP (Couleur rouge dans un flacon à bouchon rouge)
 Chromogène A (incolore dans un flacon à bouchon vert)
 Chromogène B (incolore dans un flacon à bouchon blanc)
 Solution d’arrêt (incolore dans un flacon à bouchon jaune)
 Eau distillée
 Sachet zippé

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5.2. Préparation des réactifs

Le port d’une blouse et de gants est obligatoire.
Le tampon de lavage doit être dilué au 1/20 avec de l’eau distillée avant d’être
utilisée.
Une fois diluée, le solution de lavage peut être conservée une semaine à
température ambiante ou deux semaine entre 2 à 8° C.
Une fois ouvert, le flacon peut être conservé quatre (04) semaine entre 2 à
8°C.

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6. Procédure opératoire

1. Ajouter dans les micropuits de la plaque ELISA 50ul de contrôle (positif et

négatif) et 100ul d’échantillons selon le schéma de pipetage du tableau I
2. Couvrir et incubé la plaque à 37°C pendant 30 minutes
3. Après incubation, laver cinq (05) fois la plaque avec 300μL du tampon de
lavage dilué en laissant tremper pendant 30-60 secondes par cycle de
lavage.
4. Ajouter 100μL du conjugué HRP dans chaque puits de la plaque excepté le
puit blanc
5. Couvrir la plaque et la mettre en incubation pour 30 minutes à 37°C
6. A l’issue de cette seconde incubation, répéter le lavage
7. Ajouter dans chaque micropuits 50μL du Chromogène A suivi 50μL du
Chromogène B
8. Couvrir la plaque pour la mettre en incubation pendant 15 minutes à 37°C et
à l’obscurité.
9. A la fin de cette incubation, ajouter 50μL de solution d’arrêt
10. Lire la densité optique 450 nm/ 620-680 ou à 450 nm à l’aide du lecteur de
plaque MULTISKAN FC de Thermo Scientific
11. A la fin de l’analyse, sceller dans le sachet zippé la plaque ELISA et la
plaque de dilution préliminaire et les éliminer conformément aux règles
d’hygiène et de sécurité en vigueur au laboratoire

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7. Analyse des résultats

Le lecteur de plaque MultiSkan FC donne le résultat de la lecture en densité

optique (D.O). Le résultat doit être converti en ratio (S/CO) pour être interprété.

1. Après la lecture de la plaque, cliquer sur « récapitulatif » puis « Exporter

vers Excel ».

2. Le rapport de l’analyse sera exporté sous format Excel. Renommer le fichier

avec l’intitulé de l’analyse, l’ordre d’analyse et la date de l’analyse.

Enregistrer.

Exemple : PROJET_01_060422

Copier les D.O de la lecture au filtre de 450 nm

3. Sur le bureau de l’ordinateur, ouvrir le fichier Excel nommé « ELISA »,

coller dans feuille « Donnéesbrutes » au niveau de la plage des DO à

450nm

4. Dans le fichier récapitulatif de l’analyse, copier les D.O de la lecture au filtre

de 620 nm et coller dans feuille « Donnéesbrutes » au niveau de la plage

des DO à 620nm du fichier « ELISA »

5. Le classeur affichera la différence entre les deux (02) filtres dans la plage

« Différence ».

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6. Copier la différence, ouvrir la feuille « Copiezvosdonnéesici » et collez

dans la plage « OD ».

7. Dans le fichier récapitulatif de l’analyse, copier le plan de plaque et le coller

dans le « ELISA », feuille « Copiezvosdonnéesici » à la plage des « Plan

de plaque ».

8. Le résultat définitif est donné dans la feuille « Calcul ».

9. Enregistrer le résultat en procédant comme suit : cliquer sur « Fichier » puis

sur « Enregistrer sous ». Renommer le fichier avec l’intitulé de

l’analyse_l’ordre d’analyse_Resultat_la date de l’analyse.

Exemple : PROJET_01_RESULTAT_061122

Tableau I: Schéma de pipetage

1 2 3
A Blanc Echantillon 3 -
B NEG Echantillon 4 -
-
C NEG Echantillon 5
-
D NEG Echantillon 6
-
E POS Echantillon 7
F POS Echantillon 8 -
-
G Echantillon 1 -
- -
H Echantillon 2

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8. ATTESTATION DE LECTURE ET DE COMPREHENSION

Nom et prénom(s) Date Signature

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