VIRUS DE L’HÉPATITE B

(VHB)
Professeur Abdoul-Salam OUEDRAOGO, PharmD, Msc, PhD

Cours International sur les hépatites Virales

Bobo-Dioulasso 30 Novembre au 05 Décembre

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Objectifs
1- Décrire la structure du Virus de l’hépatite B

2- Décrire le cycle de multiplication du virus de l’hépatite B

3- Citer les modes de transmission du virus de l’hépatite B

4- Citer deux moyens de diagnostic direct d’une infection par

le virus de l’hépatite B

5-Interpréter le diagnostic sérologique d’une hépatite virale B

6-Décrire les profils sérologiques au cours d’une infection

aigüe et d’une infection chronique par le virus de l’hépatite
2 B
Plan
Introduction

1-Caractères du virus

2-Epidémiologie

3-Pouvoir Pathogène

4-Diagnostic au laboratoire

5-Eléments de thérapeutique et de prévention

Conclusion

3
Introduction 1/3

Définition
 Virus de l’hépatite B = VHB = HBV
 Virus à ADN - Capside icosaédrique- Enveloppé
 Transcriptase inverse
 Responsable d’une hépatite « sérique » pouvant
évoluer vers la chronicité avec risque de cirrhose et de
carcinome hépato-cellulaire

4
Introduction 2/3
■ Intérêt
– Clinique :
■ évolution vers la chronicité et le CHC (carcinome
hépatocellulaire)
■ 2ème cause mondiale de cancer après le tabac.
– Epidémiologique :
■ Importance du problème de santé publique posé par
ce virus
■ Vaccination efficace existe,
– baisse importante de l’incidence du cancer du
foie. C’est dire l’enjeu de la vaccination

5
Introduction 3/3

■ Intérêt

– Diagnostic :
■ Nombreux marqueurs sérologiques ( Problème
d’interprétations )

– Thérapeutique :
■ Nombreuses molécules thérapeutiques pour
améliorer l’évolution en cas d’hépatite
chronique active

6
Historique 1/3

■ 1964 : Découverte de l’Ag HBs en

Australie (Ag Australia) par Baruch
Blumberg dans le sérum d’un
aborigène souffrant d’une hépatite
post-transfusionnelle
■ Prix Nobel
■ 28 Juillet : Date de Naissance de
Blumberg = Journée Mondiale contre
7
Historique 2/3

■ 1970 : Identification du VHB dans le sérum au ME par Dane

■ 1975 : L’équipe de Maupas, de Tours, publie les premiers
résultats d’une vaccination contre l’HBV utilisant comme
source vaccinale l’Ag HBs purifié à partir de plasmas de
porteurs chroniques
■ 1986 : Premier vaccin mondial obtenu par génie génétique
et commercialisé est un vaccin contre l’hépatite B

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Historique 3/3

Classification
Il appartient au groupe VII : virus enveloppé à ADN avec
reverse transcription (RT).
■ Famille: Hepadnaviridae
■ Genre:Orthohepadnavirus
■ Espèce: Virus de l’hépatite B (VHB)
■ Génotypes: 10 (A-J)
■ Sous-genotype: Plusieurs

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Classification
Génotypes : 10 (A-J)
■ Génotype A : Europe du Nord-ouest, en Amérique du Nord et
en Afrique Centrale.
■ Génotypes B et C : Asie et dans les îles du pacifique
■ Génotype D : Bassin méditerranéen et au Moyen-Orient.
■ Génotype E : Afrique de l’ouest
■ Génotype F : Amérique Latine et Centrale
■ Génotype G : Etats-Unis et en France
■ Génotype H : Amérindiens en Amérique Centrale et aux USA
■ Génotype I : Asie et au Vietnam
■ Génotype J : Japon 10
Génotypes – sous génotypes

11
VHB : Structure
Deux types de particules virales :
 Particules de Dane :Particules infectieuses sphériques
de 42 nm = virion complet infectieux

 Des enveloppes vides de 22 nm non infectieux (billes

et bâtonnets)

Concentration en particules de Dane peut atteindre

dans le sang :
- 109 particules virales/ml,
- Titre très inférieur à celui des enveloppes vides (1013
ou plus/ml)
12
VHB : Morphologie-Structure

Virus de l’Hépatite B observé au microscope électronique

(Coloration négative)
- Petites particules sphériques et pléomorphiques 20 à 22 nm de diamètre ;
Formes tubulaires ;
- Virus entier enveloppé de 42 nm de diamètre. (X400.00)
13
Structure d’un Hepadnavirus (VHB)

14
Morphologie-Structure

15
Organisation du génome de HBV
4 gènes chevauchant : C, P, S, X
Gène C (Capside)
C Protéine de capside C : Ag-HBc
preC/C Protéine soluble E : Ag-Hbe

Gène P (Polymérase)
Transcriptase inverse (RT)
RNase H (liée à la RT)
Terminal protein (TP)
Gène S (Surface)
Glycoprotéines d’enveloppe : Ag-HBs

preS1/preS2/S L (large)
preS2/S M (medium)
S S (small)
Gène X (Transactivateur)
Protéine transactivatrice X : Ag-HBx

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Les protéines

 Protéine C, Ag HBc et Ag HBe

• Ag HBc : Structure tertiaire de la molécule =
d'antigénicité conformationnelle.

• L'antigénicité e est portée par la forme dégradée de

la capside
 Polymérase
• Reverse transcriptase (ADN polymérase ARN
dépendante).
 Protéine X
• Protéine régulatrice.
17
Les protéines

• Protéine S et Ag HBs : 3 types de molécules HBs

• Grande protéine (préSI/préS2/S)
• Moyenne protéine (préS2/S)
• Petite protéine ou protéine majeur (S)

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Les protéines

Les sous types du VHB

• antigènes spécifiques : déterminant "a" commun
• deux paires de déterminant mutuellement exclusif :
– "d" ou "y" et
– "w" ou "r".

 Les virus "adw" sont ubiquitaires,

 les virus "ayw" : Afrique et Europe,
 les virus "adr" : Océanie et Extrême Orient et
 les virus "ayr« : Inde et Vietnam
19
Structures antigéniques
■ 3 principaux antigènes:
– AgHBs,
– AgHBe
– AgHBc (core).
■ Ces Ag induisent la production d’Ac spécifiques des
classes IgM et IgG qui sont détectables dans le sérum.
■ Les spécificités sérologiques de l’AgHBs permettent de
distinguer des sous-types qui ont des intérêts
épidémiologiques, mais pas cliniques. Ces sous-types ont
le déterminant « a » en commun.
Réplication 1/3

■ Multiplication
• Cellules cibles : hépatocytes (récepteur (NTCP=
Sodium taurocholate cotransporting polypeptide
pour polyprotéine co-transpoteuse sodium
dépendante de l’acide taurocholique) liaison de
préS1
Pas de système cellulaire permissif
Primates = modèle de choix

21
Réplication 2/3

L’ADN viral persiste dans le noyau des hépatocytes sous forme épisomale: ADNccc
22
Réplication 3/3
■ Attachement virus aux cellules hépatiques (Rc NTCP)
■ Décapsidation dans le cytoplasme
■ Pénétration du génome dans le noyau
– Formation d’ADN double brin, circulaire, superenroulé
– Transcription
■ ARN prégénomique et ARNm subgénomique
■ Traduction des ARNm subgénomiques
■ Encapsidation de l’ARN prégénomique
– Synthèse d’ADN par le TI
– Dégradation de l’ARN prégénomique
■ Acquisition de l’enveloppe dans le (Réticulum endoplasmique)
■ Sortie par bourgeonnement
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Viabilité et résistance physico-chimique 1/2
■ A l'extérieur de l'hôte, le VHB survit
– dans le sang pendant plusieurs semaines,
– sur les surfaces au moins 7 jours à 25°C.
– il est stable à 37°C pendant 60 mn et à – 70°C
pendant des années.
– exposition de produits sanguins aux U.V. ne détruit pas
l'Ag HBs.
Viabilité et résistance physico-chimique 2/2

■ Inactivation par des moyens chimiques :

– hypochlorite de Na à 5%,
– éthanol à 70 %,
– glutaraldéhyde à 2 %, et au formaldéhyde

■ Inactivation par des moyens physiques

– VHB détruit à une température (supérieure ou égale à)
≥60°C.
– Infectivité est détruite après quelques minutes à 100°C.
Epidémiologie 1/4
Distribution géographique de la prévalence du portage de l’Ag
HBs

Source : OMS 1996, département de l’immunisation, des vaccins et de la biologie 26

Epidémiologie 2/4

■ Les pays de forte endémie

– (Afrique sub-saharienne et Asie du Sud-Est)

Ag-HBs > 8 % de la population générale : Sénégal

■ Les pays de Moyenne endémicité :

– 2-7% (Méditerranée)

■ Les pays à faible taux d'endémie

– moins de 0,5 % de la population est porteuse du virus

27
Epidémiologie 3/4

Burkina Faso : classée comme pays à forte endémicité,

■ Prévalence de VHB variant entre 8% et 14,5% dans la population générale

(Simpore et al., 2006 ; Tao et al., 2014).

• Prévalences chez les donneurs de sang du 1er don en zones rurale et urbaine

étaient respectivement de 13,0% et 16,2% à Ouagadougou, 10,9% et 11,5% à

Bobo Dioulasso, 17,9% et 19,8% à Fada N’gourma et de 13% et 19% à

koudougou (Nagalo et al., 2011).

28
Epidémiologie 4/4

Burkina Faso :

■ Prévalences de 14,3%, 17% et 12,9%; chez les donneurs de sang

de Nouna, de Ouagadougou et du CNTS (Collenberg et al., 2006 ;
Tao et al., 2013).
• Prévalence de l’infection occulte par VHB est de l’ordre de 32,8%
chez les donneurs de sang (K. S. Somda et al., 2016)

29
Réservoirs du virus 1/2

■ Semble être strictement humain (Il peut infecter chez

certains singes)

■ Seul virus enveloppé à pouvoir résister dans le milieu

extérieur pendant plus de 7 jours.

30
Réservoirs du virus 2/2

On retrouve l'antigène de surface (Ag HBs) dans toutes les

sécrétions des sujets infectés :
- sang et ses dérivés, le sérum et les plaies (108 à 109
virions/ml)
- sperme, les sécrétions vaginales et la salive (10 7 virions/ml)
- urines, les selles, la sueur, les larmes et le lait maternel
(présence d'ADN viral).

31
Modes de transmission 1/4

Période de contagiosité
■ Maximale entre 1 et 3 mois après le contage
■ Persiste tant que l'ADN du VHB est détectable
■ Contagiosité faible si charge virale <104 Ul/mL).

32
Modes de transmission 2/4

■ Parentérale et nosocomiale
─ Toxicomanes
─ Tatouages
─ Personnels soignants : accident d'exposition au
sang (AES),
─ Par transfusion de sang et de produits dérivés très
réduite
─ Transmission par les chirurgiens infectés aux
patients opérés (chirurgie dentaire, stomato,
profonde, cardiaque)

33
Modes de transmission 3/4

■ Parentérale et nosocomiale
– Mésothérapie
– Acupuncture
– Surfaces ou objets inertes en milieu hospitalier
(contamination des surfaces par des microgoutelettes
de sang

34
Modes de transmission 4/4

■ Transmission par autres liquides biologiques

– Salive/orale , utilisation de brousse à dents
contaminée
– Sécrétions menstruelles,…

35
Tropisme cellulaire

■ Hépatotropisme :
– Les cellules hépatiques.
■ Autres organes :
– Cellules mono-nucléées, (sang, moelle osseuse).
– Les lymphocytes : réservoir viral extrahépatique.

36
PHYSIOPATHOLOGIE

■ Le VHB n’est pas cytopathogène.

■ La lésion cellulaire correspond au rejet des hépatocytes
infectés par des mécanismes immunologiques de types
cellulaire et humoral.
■ En fonction de la réaction immunitaire, l’hépatite peut être :
– asymptomatique (80% des cas) et évoluer favorablement
vers la guérison.
– aiguë ou subaiguë, fulminante
– chronique et à la faveur de certains facteurs comme
l’alcool, des aliments, de facteurs génétiques HLAB27,…
des hépatocytes peuvent se transformer et conduire au
cancer primitif du foie (CPF). 37
PHYSIOPATHOLOGIE

■ Réponse immunitaire absente dans les cas

d’immunodéficience et dans les cas où l’hépatocyte
intègre le génome viral (absence d’expression de
l’AgHBc à la surface de l’hépatocyte)

■ Possibilité de «porteurs asymptomatiques» qui tolèrent

des réplications importantes du VHB.

38
Histoire naturelle

39
Formes cliniques
Incubation : 50 à 100 jours
■ Formes aigües :
– Pré-ictériques
– Ictériques (rares)
■ Formes asymptomatiques +++
■ Formes fulminantes (-1%)
■ Formes chroniques (10%)

40
VHB : Indications du diagnostic

■ Diagnostic de l’infection par HBV

■ Suivi de l’infection par HBV, traitée ou non
■ Recherche du statut immunitaire d’un sujet vis-à-vis de
HBV
■ Dépistage
– chez la femme enceinte au cours du 6e mois de
grossesse,
– lors des dons de sang, d’organes, de tissus et de
cellules.

41
 Diagnostic virologique HBV
1/4

Marqueurs directs Marqueurs indirects

ADN Polymérase AgHBs Anti-HBs

ADN

(Capside Anti-HBc
AgHBc)

AgHBe Anti-HBe
Diagnostic virologique HBV
2/4
Direct (1/2)
Recherche virus et constituants :
• ME, Immuno-ME sur sérum
• Recherche qualitative et quantitative du génome (ADN) :
▪ Hybridation sur foie, sérum
▪ PCR sur foie, sérum, lymphocytes
▪ PCR temps réel sur sérum ou plasma
(quantification, seuil à 100 copies)

43
Diagnostic virologique HBV
3/4
Direct (2/2) :
• Antigènes :
Ag HBs :- Hépatocytes (cytoplasme)
- Sérum (ELISA, MEIA, RIA, Aggl)
Ag HBc :- Hépatocytes (noyau)
- Sérum non décelable
Ag HBe : - Sérum (spécificités e1, e2…)

• Culture :
- Cellulaire très difficile
- Chimpanzés sensibles

44
Diagnostic virologique HBV
4/4

Indirect (1/4) :

ELISA, MEIA (Microparticles Enzym Immuno-Assay), RIA

(Radio Immuno-Assay)
▪ Anti-HBc : totaux IgG+M et IgM
▪ Anti-HBs : IgG
▪ Anti-HBe : IgG

45
Les marqueurs pour la sérologie 1/3

■ Ag-HBs
■ Produit en grande quantité
■ Marqueur d ’infection débutante, chronique
■ Marqueur de contagiosité
■ anti-HBs
■ Anticorps protecteurs
■ apparaissent en général après la disparition
complète du sérum de l’Ag HBs et témoignent
de la guérison
■ Efficacité de la vaccination (titre > 10UI)
Les marqueurs pour la sérologie 2/3

■ Ag-HBc
■ Non détecté dans le sérum (Autrefois??)
■ Détecté dans le foie
■ Anti-HBc
– très précocement après une hépatite aiguë
– persiste très longtemps si bien qu’il peut être le seul
marqueur d’une infection B ancienne.
■ IgM anti HBc détécté dans le sérum par ELISA
– infection récente et parfois au cours des réactivations virales
Diagnostic virologique
Marqueurs pour la sérologie: possibilité de détection de l’AgHBc

48
 Les marqueurs pour la sérologie 3/3

■ Ag HBe : détecté dans le sérum par ELISA

– apparaît peu après l’Ag HBs lors d’une hépatite aiguë B
– signe en général une infection virale active avec
réplication
■ Ac anti HBe détecté dans le sérum par ELISA
– séroconversion anti-HBe est un élément pronostic
favorable au cours d’une hépatite chronique sauvage
– Cependant il existe des sujets Ac anti HBe + qui sont
porteurs d’une infection virale active avec présence
d’ADN du VHB dans le sérum (variants précores).
 Anti HBc
Ag HBs

Ag HBe

Ac HBe
IgM anti HBc
contage

//
séro importante 6 MOIS - 1 an Années
Ag HBs - Ag HBe - Ig M anti HBc Ag HBs - Ag HBe - Ig anti HBc
Hépatite B d’évolution récente Hépatite B d’évolution ancienne
Evolution cinétique des différents marqueurs sérologiques d’une hépatite B
évoluant vers la chronicité
Algorithme du diagnostic sérologique de l’hépatite B

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Ag Anti- Anti-HBc Ag Anti- ADN
HBs HBs IgM total HBe HBe du VHB Interprétation

+ - + + + - + Réplication virale
(virus sauvage)

Réplication virale
+ - + + - + +
(virus mutant préC)

Hépatite aiguë
+ - + + - + - résolutive
+ - - + - + - Porteur sain
- - + + - - - Sujet en voie
de guérison
Immunisation post-
- + - + - + - infectieuse (Guérison)
Immunisation
- + - - - - - post-vaccinale

53
Limites des tests sérologiques
Pas d'information sur le niveau de réplication virale

Apparition tardive de l’Ag-HBs après exposition :

56 jours après contact infectant

Faux négatifs :
■ Ag-HBs: mutation du gène S
■ Ag-HBe: mutation du gène pré-C/C

Interprétation parfois difficile :

■ Ac anti-HBc isolés
■ immuno-dépression 54
Charge virale HBV : techniques

Détermination de la quantité de virus dans le sang :

- Amplification génique
PCR quantitative
PCR en temps réel (Taqman)

- Amplification du signal
DNA branché (hybridation)

55
Charge virale HBV : indications 1/2

■ Détection précoce de l’infection (1 semaine)

■ Distinction porteurs sains/ chroniques
■ Suivi des patients infectés
■ Sérologie non informative : Ac anti-HBc
isolé

56
Charge virale HBV : indications 2/2

■ Détection des «mutants pré-C» : Ag-HBe négatif

■ Réactivation d’HBV (immunodéprimés)
■ Efficacité d’un traitement antiviral
■ Protocoles thérapeutiques
■ Transfusion ?

57
Résumé : virus de l’hépatite B (VHB)

- Ag HBs  Infection en cours

 Contact avec le VHB
- IgG anti-HBc  Hépatite aiguë
(+ si réactivation virale)
- IgM anti-HBc  Guérison de l’infection
(vaccination)
 Réplication virale
- Anti-HBs
(en cas de virus sauvage!!!)
 Arrêt de la réplication virale
- Ag HBe
 Réplication virale
58
Facteurs influençant résultats sérologiques/AgHBs

■ FAUX POSITIFS
– Sang recueilli sur tube hépariné
– Interférence avec hémoglobine
– Interférence avec bilirubine
– Grossesse
– Infections aiguës ou chroniques
– Maladies auto-immunes
– Maladies chroniques du foie
Facteurs influençant résultats sérologiques/AgHBs

FAUX NEGATIFS ou RESULTATS ATYPIQUES

– Fenêtre sérologique
– Fin de la phase aiguë ou Phase de convalescence,
lorsque AgHBs  et anti-HBs avec formation immun
complexes
– Porteur de faible niveau
– Infection en cours de guérison
– Mutants de gène S et variants
– Co-infection VHC/VHD qui peut interférer avec réplication
de VHB et/ou expression d’AgHBs
 Le traitement
Interféron alpha 2b/2a pégylé (Introna, Schering; Roferon, Roche)
Analogues nucléosi(ti)diques:
Lamivudine 3TC (Zeffix, GlaxoWellcome, 1998)
Emtricitabine FTC (Emtriva, Gilead, 2003)
Adéfovir Adv (Hepsera, Gilead, 2002)
Entécavir ETV (Baraclude, BMS, 2005)
Ténofovir TDF (Viread, Gilead, 2006)
FTC+TDF (Truvada, Gilead)

• Tous les analogues sauf Adv et Etv sont actifs sur le VHB et le VIH
(attention au situation de monothérapie!)

61
Perspectives thérapeutique anti-HBV

62
Prévention 1/3

 Mesures d'hygiène
 Séroprophylaxie (des gamma-globulines peuvent être
données lors d'un contact averé pour éviter la forme
fulminante ).

 Vaccination :
Ag HBs, préparé par génie génétique
- Genhevac B
- Engenerix B

63
Prévention 2/3

■ Vaccination : 3 doses espacées de 1 mois

■ Qui ?:
– les agents de santé ;
– les personnes se livrant à des comportements à
haut risque (notamment les rapports sexuels sans
préservatif, les rapports sexuels avec de multiples
partenaires, le partage d'aiguilles) ;

64
Prévention 3/3

■ Vaccination : 3 doses espacées de 1 mois

■ Qui ?:
– tous les bébés ;
– les adolescents ;
– les gens vivant avec des personnes infectées par le
VHB ;
– les personnes vivant dans des régions ayant des
taux élevés d'infection à VHB

65
Le virus de l’hépatite B

• Virus assez résistants, transmission contact

(mère-enfant, familial, sanguin, sexuelle)

• Faible chronicité (10% sauf chez les nouveau-

nés 80%), à l’origine de cancer à 20-30 ans.

• Diagnostic essentiellement sérologique

• Traitement spécifique (antiviraux)

• Prévention: dépistage et vaccin

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