TECHNIQUE ELISA ET SON Présenté par BELEM Panebyame

APPLICATION AU LaPathER Abdoul Aziz

PLAN
❑ Définition ELISA
❑ Aperçu sur les Ac
❑ Principe général de l’ELISA
❑ Types d’ELISA
❑ Description de notre kit
❑ Mode opératoire
❑ Traitement de données

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DÉFINITION
❑ ELISA : Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
❑ Procédure immunologique dans lesquelle la réaction Ag-Ac est mesurée
par des dosage enzymatiques.
❑ Le terme ELISA a été utilisé pour la première fois par ENGVALL et
PERLMA en 1971
❑ Largement répandu, Relativement performant et automatisable

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APERÇU SUR LES AC
❑ 5 classes d’immunoglobulines : IgM, IgG, IgA, IgD, et les IgE.
❑ Les IgG : majoritaires du sérum normal, 75% des Ig totales (de 8 à 18
g/l dans le sérum; compartiments intra- et extravasculaires
❑ Les IgM : 10% des Ig totales (1 à 2g/l dans le sérum); confinées au
compartiment intravasculaire
❑ Les IgA : 15 à 20% des Ig sériques (3,5 à 4,5 g/l); majoritaires dans les
sécrétions muqueuses

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CINÉTIQUE DES AC ANTI-SARS-COV-2

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PRINCIPE GÉNÉRAL
❑ Utilise un enzyme pour détecter le complexe immun Ag-Ac
❑ L’enzyme converti un substrat incolore en produit coloré , indiquant la
présence d’Ac/Ag
❑ L’intensité de la coloration proportionnelle à la concentration en analyte
❑ Détecte aussi bien des Ac que des Ag selon le design du test

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ELISA DIRECT
❑ Utilise un anticorps primaire marqué qui
ELISA direct
réagit directement avec l'antigène.
❑ Ag directement immobilisé sur la plaque de
dosage
❑ Peu utilisé mais courant immuno-histochimique
des cellules et des tissus.

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ELISA INDIRECT
❑Utilise un anticorps primaire non marqué en ELISA indirect

conjonction avec un anticorps secondaire marqué

❑L'anticorps secondaire a une spécificité pour
l'anticorps primaire.
❑Très sensible , spécifique , assez répandu

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ELISA SANDWICH
❑ Les antigènes de l'échantillon se lient à
l'anticorps de capture et s'immobilisent.
❑ L'anticorps du conjugué enzymatique se
lie à l'antigène immobilisé pour former
un sandwich Ac-Ag-Ac-Ac/enzyme lié
au micropuits.

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ELISA DE COMPÉTITION
❑ Micropuits revêtu d'anticorps
❑ Antigène sérique et antigène marqué additionnés... Compétition
❑ Le complexe enzymatique Ac-Ag lié est inversement lié à la concentration
de l'antigène présent dans l'échantillon.
❑ L'augmentation de l'antigène sérique entraîne une liaison réduite du
conjugué enzymatique Ag avec l'anticorps produisant moins d'activité
enzymatique et une formation de couleur

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ELISA DE COMPÉTITION
ELISA de compétition : Forte coloration faible concentration en analytes
d’intérêt

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NOTRE KIT: DESCRIPTION
DS-EIA-ANTI-SARS-CoV-2-G (S)
❑Cible: IgG anti-(S) du SARS-CoV-2;
❑détection/dosage
❑Echantillon: sérum et plasma
❑Type: ELISA indirect
❑Spécificité: 100% (IC 95% =95.91 – 100.00)
❑Sensibilité: dilution positif au 1:1600
❑ Plaque de 96 puits, barrettes détachables
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EQUIVALENCE SÉRUM ET PLASMA
Des études d'échantillons appariés SARS-CoV-2 positifs (n=25) et négatifs
(n=25) de sérum et plasma humains contenant différents anticoagulants
(EDTA, héparine, citrate de sodium) ont démontré leur équivalence.

Ce qui nous permet d'appliquer les paramètres de sensibilité et spécificité

de diagnostique aux deux types d'échantillons.

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 NOTRE KIT: MODE OPÉRATOIRE
90ul diluent d’échantillon 100ul du
100ul du substrat 150 ul de solution
+
conjugué d’arrêt
10ul d’échantillon pré-
dilué au 1/100

1 2 3 4
Incubation à Incubation 20
Incubation à
37°C à 30 min min à 20-
37°C à 30
puis lavage 25°C à
min puis
l’obscurité
lavage

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DISPOSITIF DE LECTURE
❑ Lecteur de plaque Multiskan FC couplé à un ordinateur
❑ Lecture -13 seconde
❑ Possibilité d’exportation de données en Excel pour analyse externe
❑ Possibilité d’installer un laveur automatique de plaque
❑ Process de 96 échantillons en 2h15

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 LE PHOTOMÈTRE POUR MICROPLAQUES MULTISKAN FC

❑ Système fiable et robuste adapté à une grande variété

d’applications de recherche et de routine.
❑ Lit les plaques de 96 en 13 sec et 384 puits en 34 sec et est
doté de capacités d’agitation et d’incubation pour les dosages
à température critique.
❑ Il peut être utilisé comme instrument autonome ou piloté via PC
à l’aide du logiciel intuitif Thermo Scientific SkanIt™

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 LE LAVEUR DE MICROPLAQUES URIT 670

❑ Système totalement autonome, configurable pour les

microplaques à 96 et 384 puits
❑ Création de protocole préconfiguré de lavage, de
trempage et d’aspiration simple à utiliser
❑ Pour les dosages biochimiques et sérologique ou
cellulaire, le laveur élimine le matériel non lié et les
réactifs qui n’ont pas réagi.

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ANALYSE DES DONNÉES
Le lecteur de plaque MultiSkan FC donne le
résultat de la lecture en densité optique
(D.O). Le résultat doit être converti en ratio
(S/CO) pour être interprété*

Cut-Off= seuil du DO moyen du controle

Negatif

Rapport signal/Cut-of= OD de
l’échantillon/ OD du Cut-Off

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ANALYSE DES DONNÉES
Différence Rapport
Plage de résultats
DO S/CO

Condition de
validité du test

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PERSPECTIVES
❑ La technologie Luminex

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