TP D’ENZYMOLOGIE BCG

Prs Nadia Meskini & Nezha Abouakil

Extraction et caractérisation de
l’amylase du germe de blé

INTRODUCTION

Les amylases catalysent l'hydrolyse de l'amidon, polymère du glucose. L’amidon

représente la principale forme de réserve des glucides produits par les plantes au
cours de la photosynthèse. Il permet après hydrolyse, l’approvisionnement des cellules
en glucose. L’amidon est présent chez de nombreux végétaux, notamment dans les
organes de réserve comme les tubercules de pommes de terre et dans les semences
(blé, maïs, riz, orge, etc.)

L’utilisation de cette réserve lors de la reprise d'activité est assurée par les amylases
(a et b amylase).
L’ a-amylase est une endopeptidase qui brise les liaison a (1 4) glycosidique
à l’intérieur des chaînes de l’amylose et de l’amylopectine pour libérer des
oligosaccharides (dextrines), des molécules de maltose (disaccharides de a-glucose)
et un peu de glucose.
La b -amylase est une exopepetidase qui coupe aux extrémités libérant des molécules
de maltose.
Ces enzymes sont également présentes dans les sucs digestifs des animaux ; par
exemple, chez l'homme, dans la salive, le suc pancréatique et le suc intestinal.

amylase
(C6 H10 O5)n + n/2 H2O n/2 (C12 H22 O11)
Amidon Eau Maltose

Préparation de l’extrait enzymatique : Amylase de blé à partir de blé germé

Peser 50 g de poudre de blé germé dans 100 ml NaCl 0,9% et agiter (agitateur
magnétique) pendant 15 min. Laisser reposer 10 min et filtrer la solution sur papier. Le
filtrat constitue la préparation enzymatique de l’amylase.

Préparation du substrat : Empois d'amidon au 0,1 % (1 /1000 (m/v)).

Délayer 1 g d' amidon soluble dans 100 ml d'eau distillée ; verser dans 900 ml d'eau
bouillante, en remuant, retirer aussitôt du feu et laisser refroidir. Cet empois d’amidon
constitue une solution stocke d’amidon à 0,1% (1mg/mL).
Manipulations
On cherche à mettre en évidence deux propriétés des enzymes : l’enzyme est un
biocatalyseur qui accélère une réaction et l’enzyme n’exerce son activité que si sa
structure tridimensionnelle est préservée

Le suivi de la réaction
Tests de la présence de glucides : Test à l’eau iodée :
La coloration au lugol (Réactif lodo-ioduré), est caractéristique des polymères de
glucose. Le lugol donne une coloration bleu nuit en présence d'amidon (substrat) et
une coloration jaune en son absence.

I/ Mise en évidence des propriétés d’un biocatalyseur : activité

amylasique dans l’extrait du germe de blé

Préparer 2 tubes à essai contenant 1 mL de la solution d’empois d’amidon.

- Dans le tube T1(tube témoin) (T1), ajouter à ce tube 1 mL d’eau distillée.
- Dans l’autre tube (T2), ajouter 1 mL de la solution enzymatique (filtrat)
- Incuber les 2 tubes à température ambiante. Pendant 10 minutes,
-Ajouter quelques gouttes de lugol dans chacun des tubes i. Interprétez les résultats
obtenus

II/ Mise en évidence de l’importance de la structure tridimensionnelle du

catalyseur

a. Effet de la température sur l’activité de l’amylase

Dénaturer la solution enzymatique en l’incubant dans un bain marie à 90°C pendant
10 min
Disposer de deux tubes (T1, T2) contenant chacun 1 mL de la solution d’amidon. Le
premier tube sera un témoin (T1) positif, ajouter à ce tube 1 mL de la solution
enzymatique native
Dans le second tube (T2), ajouter 1mL de la solution enzymatique dénaturée. Incuber
ces 2 tubes à températures ambiante pendant 10 min
Ajouter quelques gouttes de lugol dans chacun des tubes. Interprétez les résultats
obrtenus.

b. Effet de changement de pH sur l’activité de l’amylase

Disposer de 2 tubes à essai (T1, T2) contenant chacun 1 ml de la solution d’Amidon.

Le premier tube sera un témoin (T1) positif, ajouter à ce tube 1 mL de la solution
enzymatique native.
Dans le second tube (T2), ajouter 1 mL de la solution enzymatique incubée à pH acide
Incuber les tubes à température ambiante pendant 10 min.
Ajouter quelques gouttes de lugol dans chacun des tubes. Interprétez les résultats
obtenus

Conclure en résumant les caractéristiques de l’amylase de grains de blé germé.