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INTRODUCTION
MATÉRIEL ET MÉTHODES
L’isolement est réalisé sur milieu MRS (Difco, Detroit, USA) [6]
solide, milieu adapté à la recherche spécifique des lactobacilles. Les cultures
sont incubées 24 heures à 30°C dans des boîtes de Petri à l’obscurité. La
purification est effectuée par quatre repiquages successifs d’étalement en
milieu MRS solide. La conservation se fait sur milieu MRS incliné à +4°C
en tubes à essais à l’obscurité.
L’identification est établie en se basant sur des caractères
morphologiques et divers caractères biochimiques : catalase, température de
croissance, production de gaz carbonique, fermentation de divers sucres
[12].
Les trois souches lactiques les plus performantes pour leur pouvoir
acidifiant, BLh5 , BLh10 et BLh 1 7, qui étaient stockées à + 4°C, ont été
activées avant leur utilisation dans les tests d’inhibition par transfert sur
bouillon MRS, enrichi avec 2 % d’extrait de levure pour optimiser le milieu
de culture, puis incubées 24 heures à 30°C afin d’obtenir des cellules jeunes
avec un rendement maximal en substances inhibitrices. Un volume de 20 ml
est centrifugé dix minutes à 10 000 tours /min. Le filtrat est conservé à +4°C
à l’obscurité après neutralisation et ajout de quelques gouttes de catalase
pour éliminer l’effet de peroxyde d’oxygène.
Comme précédemment, on utilise la méthode de diffusion en milieu
gélosé TSA pour mettre en évidence le pouvoir bactéricide.
RÉSULTATS
Tableau I :
Effet antibactérien vis-à-vis de Staphylococcus aureus ATCC 25923 de
vingt souches de bactéries lactiques par la méthode de diffusion sur
milieu solide Tryptic Soja Agar.
Biotope Souche Genre Test bactéricide
Lait de vache BLh1 Lactococcus +
BLh2 Lactobacillus ++
BLh3 Lactobacillus -
BLh4 indéterminé -
+ : positif
- : négatif
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Tableau II :
pH et acidité de vingt souches de bactéries lactiques cultivées en milieu
MRS liquide trois jours à 30°C à l’obscurité.
Tableau III :
Diamètre de la zone d’inhibition de trois bactéries lactiques vis-à-vis de
sept souches pathogènes par la méthode de diffusion sur milieu TSA
après 24 heures à 30°C à l’obscurité.
Souche pathogène diamètre d’inhibition (mm)
BL5 BL10 BL17
Escherichia coli ATCC 25921 31,5 ± 1,1 27,6 ± 1,0 22,5 ± 0,3
Klebsiella pneumoniae 25,7 ± 0,2 20,4 ± 0,5 24,4 ± 0,5
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 19,4 ± 1,0 23,2 ± 0,4 22,6 ± 0,1
Staphylococcus aureus ATCC 25923 32,5 ± 1,0 28,2 ± 1,0 23,3 ± 0,3
Tableau IV :
Activité antibactérienne des fractions cellulaire et extracellulaire
neutralisées et additionnées de catalase de la souche BL5 par la méthode
de diffusion sur milieu TSA après 24 heures à 30°C à l’obscurité.
Souche pathogène diamètre d’inhibition (mm)
Surnageant Culot
(fraction (fraction cellulaire)
extracellulaire)
Gram négatif
Escherichia coli ATCC 25921 29,2 ± 1,0 0
Klebsiella pneumoniae 27,2± 0,5 0
Proteus mirabilis 23,4 ± 0,4 0
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 19,5 ± 0,2 0
Salmonella enteritidis 28,2 ± 0,6 0
Gram positif
Staphylococcus aureus ATCC 25923 33,3 ± 1,0 0
Streptococcus agalactiae 30,1 ± 1,0 0
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L’effet inhibiteur est élevé pour les deux bactéries Gram positif
Staphylococcus aureus (33 mm) et Streptococcus agalactiae (30 mm).
Parmi les bactéries Gram négatif, il est élevé pour Escherichia coli
(29 mm), et Salmonella enteritidis (28 mm).
La neutralisation du surnageant et l’ajout de catalase tendent à
augmenter le degré d’inhibition (Photo 2).
DISCUSSION ET CONCLUSION
RÉFÉRENCES
1- Aymerich (M.T.), Garriga (M.), Monfort (J.M.), Nes (I.), Hugas (M.) -
Bacteriocin-producing lactobacilli in Spanish-style fermented
sausages: characterization of bacteriocins. - Food Microbiol., 2000,
17(1), 33-45.
2- Barefoot (S.F.), Klaenhammer (T.R.) - Detection and activity of
lacticin B, a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus. -
Appl. Environ. Microbiol., 1983, 45(6), 1808-1815.
3- Benkerroum (N.), Ghouati (Y.), Sandine (W.E.), Tantaoui-Elaraki
(A.) - Methods to demonstrate the bactericidal activity of bacteriocins.
- Lett. Appl. Microbiol., 1993, 17(2), 78-81.
249
ABSTRACT
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