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1ereannée master parasitologie

Module: Méthodes de diagnostic en parasitologie

TP N° 4 : La coproscopie parasitaire
après concentration

2020/2021.
Objectif :
Recherche des parasites : trophozoïtes, kystes, œufs ou
larves dans les matières fécale d’origine humaine et
animale par des techniques de concentration
monophasique.
méthodes physiques

Technique de flottation :
Technique de Sédimentation:
solution hypertonique (à base de
solution hypotonique
sels alcalins ou de métaux lourds)

-Méthode de Faust et
Ingalls: solution aqueuse à -Méthode de Faust
0,5% de glycérine simplifiée : solution
(précipitation). de sulfate de Zinc à
33%.
-Méthode de Baroody et
Most: eau ordinaire
(centrifugations)
Récolte (Technique de prélèvement
pour la coproscopie) :

- Réaliser un prélèvement par animal ;


- Prélever des quantités suffisantes
(30-40g) des matières fécales
fraîches : juste après émission dans la
mesure du possible ;
- Récolter à l’aide d’un gant qu’on
retourne ensuite sur l’échantillon ou
d’un pot à prélèvement ;
- Chasser l’air présent dans le gant ;
- Refermer à l’aide d’un nœud et identifier le prélèvement ;
- Conserver au réfrigérateur avant envoi (à 4°C, maximum
une semaine)
1. Examen microscopique après concentration
(Sédimentation) :

1.Méthode de Faust et Ingalls (1946):


Concentration par simple sédimentation en eau glycérinée

•Liquides de dilution : solution aqueuse à 0,5% de


glycérine.
-Eau distillée…………………………………..448,5 ml
-Glycérine…….……………………………………1,5 ml
4. éprouvette

1. spatule
5. Flacons contenant 6. Passoire
solution aqueuse à à thé Matériel et réactifs
0,5% de glycérine

6. Tamis
7. Bécher métalique

8. Verre à
pied 2. Lames porte-objets;
3. Lamelles couvre-objets ;
• Mode opératoire :
- Diluer 2,5g de selles dans 150 ml d’eau glycérolée à 0,5%,

-Filtrer à travers un tamis afin


d’éliminer un maximum de débris
végétaux, étape qui peut être renouvelée
plusieurs fois, au moins 2 fois
Répétition 2 fois
sédimentation
1heure 45min

-Réaliser 3 sédimentations
successives : 1heure, 45min,
30min en verre à pied, en
jetant le surnageant, 30min
- Eliminer le surnageant.

- Examiner le culot
de sédimentation.
Cette technique concentre bien les œufs de
schistosomes et on peut procéder alors à l’épreuve
d’éclosion des miracidiums, il suffira de rajouter
quelques gouttes d’eau au sédiment et le mettre à la
lumière et à la chaleur pendant 30min. il y aura une
libération de miracidiums mobiles.

éclosion
• https://youtu.be/EN3oiPxcxQU: How to perform fecal
exam? - Sedimentation technique

• https://youtu.be/hh6agS_YsBM: Sedimentation
practical

• https://youtu.be/WTelVO4ywUc:Detection of
parasites' eggs in Feces made easy

• https://youtu.be/GIaGZ1rkLmg:VETT 222 Task 17:


Perform Fecal Sedimentation
2. Méthode de Baroody et Most

Concentration accéléré par centrifugation qui permet


de raccourcir la durée des sédimentations.

•Liquides de dilution : eau ordinaire à 40°C.


Matériel et réactifs
4. éprouvette

1. spatule
6. Passoire
5. Flacons contenant à thé
eau ordinaire

9. centrifugeuse

6. Tamis
7. Bécher métalique

8. Verre à
pied 2. Lames porte-objets;
3. Lamelles couvre-objets ;
- Homogénéiser le prélèvement ;

- Diluer 1 à 2 g dans 10 ml d’eau


dans à 40°C ;
-Tamiser le mélange dans une passoire à
thé et laisser le filtrat reposer 30 sec ;
- Centrifuger le surnageant pendant
1 à 2 minutes à 1500 trs/min ;
- Rejeter le surnageant et ajouter de l’eau puis centrifuger
de nouveau ;

- Recommencer jusqu’à ce que le liquide du surnageant


soit clair ;
- Observer au microscope quelques gouttes du
culot.
Ces techniques conviennent à la recherche de
certains œufs d’helminthes, essentiellement les œufs
de schistosomes, les œufs d’ascaris non fécondés et
les larves d’anguillules. Mais elles restent
inefficaces pour la recherche des protozoaires.
3. Méthode de Faust simplifiée (1938):

Liquides de dilution : Solution de sulfate de Zinc


à 33%.

Cette technique est trop longue et nécessite


plusieurs centrifugations, elle a été simplifiée. Pour
cela, il suffit de :
Matériel et réactifs
8. microscope

7. centrifugeuse

6.Passoire
5.Flacons à thé
contenant le
sulfate de zink

4. Pipettes et
bécher
1. spatule
2.Lames porte-objets;
3.Lamelles couvre-objets ;
-diluer les selles directement dans la solution de
sulfate de zinc à 33% puis filtrer;
-centrifuger - prélever immédiatement
pendant 2 minutes en surface et examiner.
à 1500 tours/min ;
La technique de Faust mise en évidence des
œufs d’helminthes (ex: Teania sp., trichocéphale,
Hynenolepis sp.,….). Néanmoins, il faut signaler
que cette technique peut déformer les kystes des
protozoaires.
Site web :
• https://youtu.be/LG2n2MLay3Y: Centrifugal Fecal
Flotation
• https://youtu.be/AVrWaqqNP8M:Fecal floatation
technique
Questions:

- Comparer les différentes techniques réalisées


PUIS
- identifier les œufs trouvés pendant
l’observation microscopique de la matières
fécales.
technique Faust et Ingalls Baroody et Most Faust simplifiée

Matériel et coût
Manipulations
Déformation
des éléments
parasitaires
Qualité de
concentration
(efficacité)
Pollution
(toxicité)
A B

D
C
E F
Fin de la
présentation