IMMUNOLOGIE BM3 19-22

LES MÉCANISMES IMMUNO ENZYMATIQUE : ELIZA

1. DÉFINITION
L’ELIZA est la méthode qui est principalement utilisée en immunologie pour détecter/doser
un anticorps ou un antigène dans un échantillon. C’est un test qui entre dans le cadre des
EIA (Enzyme Immunoassays ou essais immunoenzymatiques).
2. PRINCIPE
La technique ELISA permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une
réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à
l'anticorps.
Les échantillons qui peuvent être utilisés pour L’ELIZA sont :

• Le sérum,
• Le plasma,
• Le LCR,
• Les urines,
• Le surnageant de culture cellulaire
L'ELISA peut être réalisé de manière :
➢ Qualitative en déterminant la présence ou l'absence d'un antigène dans l'échantillon
➢ Quantitative: grâce à la densité optique de l'échantillon qui est interpolée sur une
courbe d'étalonnage, en général par une dilution sérielle de la cible

3. MÉTHODES DE L’ELISA
Les 3 méthodes qui peuvent être utilisées pour faire L’ELISA sont :
➢ L’ELISA direct
➢ L’ELISA indirect
➢ L’ELISA sandwich

A. ELIZA DIRECT
Elle s’effectue par la technique suivante :
➢ Faire absorber l’antigène passivement sur une phase solide (puits des plaques).
➢ Lavage et blocage
➢ Ajouter l’anticorps conjugué avec une enzyme puis faire une incubation
➢ Lavage
➢ Additionner le substrat puis observer le développement de la couleur
Avantages
➢ Elle mesure la quantité d’antigène/anticorps
➢ Elle évite les problèmes de réaction croisée ( pas de second anticorps.
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Inconvénients

➢ Elle est relativement lent (6 heures à 24 heures)

➢ Le coût des anticorps est élevé.
B. ELIZA INDIRECT
Elle s’effectue par la technique suivante :
➢ Faire une fixation de l’antigène par incubation
➢ Faire une fixation de l’anticorps (humain) à l’antigène par incubation,
➢ Faire un lavage pour enlever l’excès d’anticorps non fixé
➢ Additionner un anticorps conjugué à une enzyme (second anticorps) qui est spécifique
au premier anticorps (humain)
➢ Faire un lavage
➢ Additionner un substrat et observer le développement de la couleur
Avantages
➢ Elle mesure la quantité d’antigène/ anticorps
➢ Le second anticorps augmente la sensibilité
➢ Le second anticorps peux être utilisé à tous les anticorps de l’espèce (flexibilité)
Inconvénients
➢ La valeurs des densités optiques du blanck est élevés

C. ELIZA SANDWICH

Un ELISA sandwich mesure l'antigène entre deux couches d'anticorps (anticorps de capture
et de détection). L'antigène cible doit contenir au moins deux sites antigéniques capables de
se lier aux anticorps. Elle peut-être direct ou indirect avec une présence ou une absence
d’anticorps tertiaires.
Sa technique de réalisation est la suivante :
➢ Faire une fixation passive de l’anticorps , puis faire un lavage
➢ Additionner l’antigène
➢ Faire une capture d’antigène puis faire lavage pour éliminer les antigènes libres
➢ Additionner le conjugué ( anticorps – enzyme) spécifique à l’antigènes
➢ Faire un lavage
➢ Additionner le substrat et observer le développement de la couleur
Avantages

• Souhaitable quand l’échantillon :

- est suffisamment dilué pour se fixer

- ne peut pas se fixer

• Nécessaire pour déterminer la concentration d’un antigène dans un mélange

d’antigène par capture spécifique

• Indirect sandwich est plus versatile que direct sandwich.

• Utilise un second anticorps couplé à la biotine, et avidin/strepavidin-enzyme
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4. PARAMÈTRES DE PERFORMANCES DE L’ELISA

❖ La sensibilité d'un test diagnostic est sa capacité à détecter tous les malades (c'est-à-
dire à avoir le moins de faux négatifs),
❖ La spécificité de ce test est sa capacité à ne détecter que les malades (avoir le moins
de faux positifs).