Rèpublic Algèrienne Dèmocratique Populaire

Universitè Ibn Khaldoun Tiaret

Facultè des Sciences de la Nature et de la Vie
Dèpartement des Sciences de la Nature et de la Vie

Master 1 en Reproduction Animale

Technique de dosage de Testostèrone

 Prèsenter par:
 Khelil Sofiane
 Berouaguia Karim
Plan de travail:

1. Introduction
2. Gènèralitès
3. Intèret de dosage hormnal
4. Mèthodes de dosages hormonal
5. Aventages et incoviniant
1.INTRODUCTION:
Nous allons dans cet èxposer nous intéresser
à une hormone stéroïde puissante et précieuse
pour le corps: La testostérone. Notre corps
produit cette hormone qui est responsable
d'un grand nombre de fonctions : c'est
l'hormone mâle de référence pour notamment
l'hypertrophie et la prise de force.
Adolf Friedrich Johann Butenandt isole la testosterone en 1934
prix Nobel en1939 steroides sexuels
2.Gènèralitès:
La testostérone est une hormone stéroïde
androgène
 Les hormones stéroïdes sont synthétisés à
partir du cholestérol dans différents tissus.
Elle est sécrétée et produite dans les
testicules grâce aux cellules de Leydig à 95%
les 5% restant correspondantes aux glandes
surrénales
La femelle produit également de la
testostérone mais en faible quantité dans les
ovaires et dans les glandes surrénales
Généralement, l'homme fabrique 50 à 60 fois
plus de testostérone qu'une femme.
Axe hypothalamo-hypophysaire chez
l’homme
Biosynthèse de testostèrone
2.1La testostérone énonçons 2 propriétés:
Elle a un effet androgène :
 masculinisation
 voix plus grave
 accroissement du système pileux corporel et facial
 développement des organes sexuels secondaires mâles
 agressivité, énergie et tonus constant
comportement sexuel, libido...
Elle est responsable aussi de la maturation des
spermatozoïdes.
 C'est grâce à cette hormone que la puberté est
enclenchée.
Chez les femmes, la testostérone est
transformée en estradiol .
joue un rôle dans le maintien du désir sexuel.
la fabrication et la croissance des muscles.
 
2.2.La circulation de la testostérone dans le sang est soumise à 3 variantes:
La testostérone libre qui est donc sous forme
libre et qui représente une petite partie, environ
de 2 à 3% .
Sous une forme fortement liée à une protéine la
SHBG ("Sex Hormone Binding Globulin"). Cette
forme de testostérone représente environ 80%.
Sous une forme faiblement liée à une protéine,
l'albumine environ 20%. Cette forme de
testostérone est dite biodisponible.
L’intèret de dosage de
Testostèrone chez l’ètre humain:
.Le dosage de testostérone permet de confirmer les
pathologies ci-dessous:
. Hommes:
L’hypogonadisme (anomalies testiculaires, atteinte
cutanée, féminisation…). peut être à l’origine de taux
faibles de testostérone.
fortes valeurs en testostérone sont associées aux
maladies de l’unité hypothalamique pituitaire, aux
tumeurs testiculaire et au cancer de la prostate.
•.
Femmes:
Une augmentation de production de testostérone
par les ovaires peut induire un syndrome des ovaires
polykystiques dont les signes et symptômes sontles
suivants:
• Stérilité
• Règles irrégulières
• Hirsutisme (excès de poils sur le visage et le corps)
. Enfants:
.Un taux anormal de testostérone chez les enfants peut
être à l’origine de puberté précoce ou retardée.
4.Mèthode de dosage de
testostèrone:
1.mèthode radio immuno dosage
2.mèthode immuno enzymatique
Nature du prélèvement :
Sérum , plasma ,
Urines (diurèse des 24h)
Conservation :
1 à 2 j à T° ambiante
1 semaine à 4 °C
Plusieurs mois à -20°C
Renseignements cliniques
sur le patient (âge, sexe, stade pubertaire)
 Date des dernières règles
 Traitement en cours
Connaître la physiologie :
À quel moment prélever :
Au cours du cycle,
Au cours de la journée,

½ vie de l’hormone :
Ne pas répéter des dosages inutilement

Variations physiologiques :
Puberté,

Ménopause,

Grossesse
Tèchnique immuno
enzymatique
ELISA
 ELISA

Enzyme
 ELISA

Enzyme Linked
 ELISA

Enzyme Linked ImmunoSorbent

 ELISA

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

PRINCIPE DU TEST:
Le test immuno-enzymatique sur phase solide (ELISA) est basé sur
le principe de compétition.
La quantité inconnue d’antigènes présents dans l’échantillon et
une quantité fixe d’antigènes conjugués à une enzyme entrent en
compétition pour les sites de fixation des anticorps coatés dans
les puits.
 Après incubation, les puits sont lavés pour arrêter la réaction de
compétition.
L’intensité de la couleur développée suivant la réaction substrat
est inversement proportionnelle à la quantité d’antigène présente
dans l’échantillon.
 Les résultats des échantillons peuvent être déterminés
directement à partir de la courbe étalon.
 ELISA

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

E
E
Anticorps Antigène
 Principe du test ELISA (1)
Coating de l ’Ag ou de l’Ac

Support
Tampon de coating

Lavages

Saturation

Saturation

Lavages
 Principe du test ELISA (2)
Addition du ligand marqué avec l’enzyme

E
E
Enzymes

E E

Lavages: PBS-Tween

Addition du substrat de l ’enzyme

E

Substrat incolore Substrats

E
Produit coloré
 Les différents types d’ELISA

- Phase homogène

- Phase hétérogène

- ELISA direct

- ELISA indirect

- ELISA Sandwich

- ELISA par compétition

 Les ELISA en phase homogène

Antigène absent de l’échantillon

E
S P
Antigène présent dans l’échantillon

S
E

P
 Les ELISA en phase hétérogène (2)

ELISA sandwich (1)

Sandwich direct
S
-Symétrique
E -Asymétrique

Sandwich indirect

S
E

P
 Les ELISA en phase hétérogène (3)

ELISA sandwich (2)

Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques

P
 Les ELISA en phase hétérogène (4)

ELISA non compétitif

DO Phase plateau

Zone linéaire

[antigène ou anticorps]
Limite de détection
 Les ELISA en phase hétérogène (5)

ELISA par compétition (1)

Compétition au niveau de l’anticorps

S
E

Anticorps à doser
P

Compétition au niveau de l’antigène

S
E E

P
Élimination par lavage
Antigène à doser
 Les ELISA en phase hétérogène (6)

ELISA par compétition (2)

DO

[antigène ou anticorps]
1. Pipettes (Multipette Eppendorf ou matériel similaire, CV
< 3 %) Volumes: 25; 100; 200 μL
2. Vortex
3. Micropipette à 8-canaux avec réservoirs pour réactifs
4. Bouteille pour lavage, système automatique ou semi-
automatique pour le lavage de microplaque
5. Lecteur de microplaque capable de lire l’absorbance à
450 nm (longueur d’onde de référence 600-650 nm)
6. Eau bidistillée ou désionisée
7. Papier absorbant, embouts de pipette et chronomètre
ELISA
Avantages de la technique:
L'utilisation d'anticorps monoclonaux rend la
détection spécifique.
Possibilité de quantifier grâce à la réalisation d'une
gamme en parallèle.
L'utilisation d'anticorps secondaires rend la
technique sensible.
technique accessible à tous les biologistes.
La détection du signal ne nécessite pas la présence
d'appareillage spécialisé.
Inconvénients de la technique:
La limite de détection est moins bonne que la
technique RIA(radio immuno essays).
La réaction enzymatique rend cette technique
dépendante de la température, du pH et de
l'éclairement
Mèrci pour votre attention