TP : isolement des micro-organismes à partir des biofilms

 Introduction

Le biofilm est composé d’agrégats De microorganismes, séparés par des espaces libres,
dépourvus de bactéries et parcourus par des courants aqueux ; véritables « canaux », ceux-ci y
assurent la circulation de fluides et permettent à la fois l’apport de nutriments aux bactéries
Et l’élimination de leurs produits de dégradation N’est-il pas un milieu homogène, mais un
environnement structuré qui Présente souvent une architecture complexe, très variable d’un
Bio film à l’autre selon les microorganismes qui le composent Et les conditions
environnementales

 But

Isolement des microorganismes à partir des biofilm prélavé de cils de blé

 Matériel utilise

Echantillon de blé cils 4 (produit fine farine et les produit grain et bio film
écouvillon)
Eau physiologie
Tube aussi
Bac banse
Les boites de pétri
pipettes pasteur

 Mode opératoire :

Préparer solution mère (produit fine les produit grain)

Prélever 10 g échantillon de blé grain et 10 g de produite fine Dun flacon stérile et

ajouté 9 ml eau physiologie Homogénéisé
 Solution mère 1 : produit fine

 10-1 A partir de la dilution solution mère

 10-2 A partir de la dilution 10-1 prélevé Aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre
graduée et stérile 1ml de la dilution mère Et déposer dans un tube contenant au
préalable 9ml d’eau physiologie

 10-3 A partir de la dilution 10-2, prélever 1ml et déposer dans

Un tube contenant au préalable 9ml d’Eau physiologie
 10-4 A partir de la dilution 10-3 prélever 1ml et déposer dans Un tube contenant au
préalable 9ml d’Eau physiologie

 Solution mère 2 : produite grain

La même étape 4 tube aussi Suspension (10-1/10-2/10-3/10-4)

 Solution 3 : biofilm écouvillon

  10-1 Ajouter l’écouvillon à un tube contenant 9 ml d’eau physiologique
 10-2 A partir de la dilution 10-1 prélevé Aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre
graduée et stérile 1ml de la dilution mère Et déposer dans un tube contenant au
préalable 9ml d’eau physiologie

Produite grain

 Manipulation

1. milieu GN

 coule le milieu GN dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
 Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 37°C pendant 24 h

2. milieu TSA

 coule le milieu TSA dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
 Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 37°C pendant 24 h

3. milieu PDA

 coule le milieu TSA dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
 Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 25°C pendant 5-7 jours

4. milieu PCA

 1 ml de dilution 10-4 est prélevé puis introduit dans une boîte de Pétri stérile. On y
Coule ensuite 10 à 15 ml de PCA préalablement préparé
 L’inoculum et le PCA sont alors homogénéisés par des mouvements d’huit de la boîte
Pétri puis séchés et solidification
 Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 30°C pendant 24 h
 Lecture

Milieu Produit grain De blé cils 4 photo

Nombre de colonie
GN indénombrable
La forme cercle

Nombre de colonie
TSA indénombrable
Forme ronde ondulée

Surface lisse une seule colonie

PDA plus grande coloured vert halo
blanche

10 colonie Blanc jaunâtre

forme cercle ronde ondulée
PCA
 Purification
Milieu PDA
Purification
dan le
milieu PDA