Le bilan biochimique et techniques de dosage

• La biochimie est l’étude des réactions chimiques ayant lieu dans les organismes
vivants, notamment des réactions de dégradation des substances alimentaires
fournissant l’énergie nécessaire aux organismes, et des réactions de transformation
ou de biosynthèse permettant la formation des composés dont les cellules ont
besoin,

• Depuis un demi-siècle, la biochimie est parvenue à rendre compte d'un nombre

considérable de processus biologiques, au point que pratiquement tous les
domaines de la biologie, depuis la botanique jusqu'à la médecine, sont aujourd'hui
engagés dans la recherche biochimique, voire biotechnologique,
 Le bilan biochimique et techniques de dosage

• Les résultats de la biochimie trouvent des applications dans de

nombreux domaines tels que la médecine , la diététique ou encore
l‘agriculture ; en médecine, les biochimistes étudient les causes des
maladies et les traitements susceptibles de les soigner ;
les nutritionnistes utilisent les résultats de la biochimie pour concevoir
des régimes alimentaires sains tandis que la compréhension des
mécanismes biochimiques permet de comprendre les effets des
carences alimentaires ; appliquée à l‘agronomie, la biochimie permet
de concevoir des engrais adaptés aux différents types de cultures et
de sols ainsi que d'optimiser le rendement des cultures, le stockage des
récoltes et l'élimination des parasites.
 Le bilan biochimique et techniques de dosage

• La biochimie s'intéresse en particulier aux structures, aux fonctions et aux

interactions des macromolécules biologiques telles que les glucides, les lipides ,
les protéines et les acides nucléiques, qui constituent les structures cellulaires et
réalisent de nombreuses fonctions biologiques. La chimie cellulaire dépend
également de molécules plus petites et d’ions. Ces derniers peuvent être
inorganiques , par exemple l’ion hydronium H3O+, l’hydroxyle OH– ou
des cations métalliques, ou bien organiques, comme les acides aminés qui
constituent les protéines. Ces espèces chimiques sont essentiellement constituées
d’hydrogène, de carbone, d’oxygène et d’azote ; les lipides et les acides
nucléiques contiennent en plus du phosphore,
 Le bilan biochimique et techniques de dosage

• tandis que les protéines contiennent du soufre et que les ions et certains
cofacteurs sont constitués ou comprennent des oligoéléments tels que le fer
le cobalt, le cuivre, le zinc , le molybdène, l’iode, le brome et le sélénium.

➢Le matériel utilise en biochimie peut être constitue soit par des prélèvements de
liquide biologique (sang, urine, liquide de ponction...) soit par des prélèvements
tissulaires (biopsie du foie, muscles et peau). Il est indispensable de connaitre
l'origine de l’échantillon qui doit être authentique et représentatif c'est-a-dire qu'il
doit donner une image valable de l'ensemble du tissu et du liquide que l'on étudie.
 Le bilan biochimique et techniques de dosage

• Analyses biochimiques sanguines courantes

• Le bilan biochimique regroupe une série de tests sanguins qui permettent
d’évaluer le bon fonctionnement de plusieurs organes et systèmes importants pour
la santé, dont le foie et les reins etc.. Le bilan biochimique peut être effectué à jeun
ou non, et il est généralement accompagné d’une formule sanguine complète
• Diabète : taux de glucose (glycémie) et mesure réflexe de l’HBa1c en cas de
glycémie élevée dans un bilan non à jeun.
• Fonction rénale : urée, créatinine, eGFR (calcul du débit de filtration des
glomérules), acide urique, phosphore
• Goutte : acide urique
• Santé des os, fonctionnement des glandes parathyroïdes, statut en vitamine D :
calcium, phosphore, phosphatase alcaline (ALP)
 Le bilan biochimique et techniques de dosage
• Risque de maladies cardiovasculaires : cholestérol, triglycérides, cholestérol
HDL, apolipoprotéines B (si le taux de triglycérides est trop élevé)
• Fonction du foie et des voies biliaires : bilirubine totale, ALP, lactate
déshydrogénase (LDH), aspartate aminotransférase (AST), alanine
aminotransférase (GPT), gamma-glutamyltransférase (GGT), albumine
• Troubles hémolytiques : bilirubine totale et directe (au besoin)
• Fonction des glandes surrénales, déshydratation, œdème, hypertension,
anomalies du pH sanguin, etc. : Na, K, Cl
• Statut nutritionnel et fonction de la moelle osseuse : protéines, albumine,
globuline, rapport albumine/globuline (ratio A/G), LDH
• Les différents éléments du bilan biochimique permettent au clinicien de préciser
différentes avenues diagnostiques qu’il pourra confirmer par des tests
complémentaires
 Le bilan biochimique
• Principaux prélèvements en biochimie
• Les plus fréquents :
• - sang veineux
• - urine
• Plus rarement :
• - Liquide céphalo-rachidien
• - Epanchements et liquides
• - sang artériel
• - sang capillaire
• - selles
• - salive, sueur, ...
 Le bilan biochimique
• Les Différentes sortes de tubes
• Sans anticoagulant : -> sérum après centrifugation
• Tubes « secs » (b. rouge)
• Tubes avec gel de polymère activant la coagulation (b. jaune)
• Avec anticoagulant : sang total ou plasma après centrifugation
• EDTA (b. violet)
• Héparinate de Litium
• Fluorure de Na / oxalate de K (b. gris)
• Citrate de Na (b. noir ou bleu)
• Toujours manipuler avec des gants
 Le bilan biochimique

• Les glucides :Les sucres, encore appelés glucides ou hydrates de

carbone Cn(H2O)n, sont des composés comportant de nombreux
groupements hydroxyles (-OH) responsables de leur caractère très
hydrophile. La présence de groupement carbonyle (-C = O), aldéhyde
ou cétonique leur confère un caractère réducteur. Ils peuvent être
divisés en deux groupes
• Oses ou monosaccharides : Ils ne peuvent être hydrolysés en sucres plus simples.
Suivant le nombre de leurs atomes de carbone on trouve : trioses, tetroses,
pentoses, hexoses. Tous les oses naturels sont de la série D. Ex. Hexoses : le D-
glucose son énantiomère est le L-glucose
 Le bilan biochimique
• osides ou polysaccharides : Ils se forment par l’enchaînement de plusieurs
oses. Selon le nombre d’oses on peut les diviser en :
• o Holosides : formés d’un nombre d’oses généralement inférieur a 10. Les
plus important sont les disaccharides exemple : maltose, lactose saccharose,.
Le raffinose est un trisaccharides
• Polyholosides : constitués d’un nombre d’oses important pouvant atteindre
les centaines. Exemple : Glycogène, amidon , cellulose.
• L’amidon (C6H10O5)n et le glycogène sont des polymères de glucoses qui
ont une fonction de réserve très importante. Ils appartiennent tout les deux
au groupe des polysaccharides, l’amidon sert de réserve aux végétaux tandis
que le glycogène sert lui de réserve aux animaux.
Le bilan biochimique
 Le bilan biochimique

• La glycémie (du grec glukus et haima = sang) est la concentration de

glucose dans le sang, ou plus exactement dans le plasma sanguin. Elle
est généralement mesurée en g /L ou en mMol / L.
• Chez l'homme, la glycémie est très finement régulée. Les valeurs de
glycémie varient selon l’état nutritionnel de la personne ; à jeun ou
postprandial (c'est-à-dire après un repas). Elle varie aussi en fonction
de l’âge et en cas de gestation.
• Le seuil glycémique maximal à jeun, admissible pour ne pas être
considérée diabétique, est de 1,26 g/l. C'est un seuil basé sur des
analyses statistiques au delà duquel le risque de rétinopathie (maladie
provoquant des troubles de la vision) lié à la glucotoxicité augmente.
 Le bilan biochimique
• une glycémie est considérée normale si elle est comprise entre 0,74 g/l
et 1,06 g/l, avec une moyenne de 0,85g/l. Une glycémie postprandiale
(après un repas) peut aller jusqu’à 1,8 g/l (soit 10 mMol/l).
• Chez une personne diabétique, les valeurs de glycémie seront :
• plus de 7 mmol/L à jeun (soit 1,26 g/l)
• plus de 11 mmol/L après l'ingestion de 75g de glucose (soit 1,9 g/l)
• Dans le cas d’une glycémie est trop élevée, on parle d’hyperglycémie.
Dans le cas d’une glycémie trop basse, on parle d'hypoglycémie. *
 Le bilan biochimique

Complications aigües du
diabète

•DT1 :
- Coma hypoglycémique
- Coma diabétique
(acidocétose)
•DT2 :
-Coma hyperosmolaire
 Le bilan biochimique

Diagnostic et surveillance du diabète

•réaliser une auto surveillance de sa glycémie
• Il utilise pour cela un lecteur de glycémie
– Dépôt d’une goutte de sang sur une bandelette
– Mise dans un lecteur d’utilisation simple
– Technique ampérométrique (mesure indirecte de la consommation d’oxygène après une
réaction enzymatique)
– Indispensable au patient pour adapter son traitement
• La glycémie capillaire
• La glycémie se mesure avec précision sur une goutte de sang prélevée au bout du doigt.
On apprend cette mesure à l’hôpital pour la faire ensuite soi-même à la maison.
•
 Le bilan biochimique

-Réaction d’oxydation du glucose :

Le glucose est oxydé en acide gluconique par la GOD :

Malheureusement, aucun des substrats et des produits ne sont colorés et ils n’ont pas
de pics caractéristiques au spectrophotomètre.

• Il est donc nécessaire de faire appel à une autre réaction biochimique.

 Le bilan biochimique

-Réaction de Tinder (utilisant un chromogène) :

• L’eau oxygénée formée dans la première réaction est dosée :

•*

L’amino-4 antipyrine est appelé «chromogène». Par définition un chromogène est

incolore et peut être à l’origine d’un composé coloré.
La quinonéimine est appelé «chromophore». Par définition un chromophore est
coloré. La quinonéimine est coloré en rose.
 Le bilan biochimique

-Bilan des deux réactions biochimiques :

• Dans les conditions opératoires, la quantité de quinonéimine formée est
proportionnelle à la quantité de glucose qu’il y avait dans le milieu.

• D’après la loi de Beer-Lambert, et en respectant les conditions opératoires

(3 règles), l’intensité de la coloration rose obtenue est donc proportionnelle
à la quantité de glucose qui était présente dans le milieu.

• Il est donc possible de faire un dosage spéctrophotométrique du glucose.

 Le bilan biochimique
Quelques questions qui en découlent :
Dans le dosage du glucose par la GOD, on peut dire :
• Que la réaction principale est? :
La première réaction car on retrouve le glucose comme substrat.
• Que la réaction indicatrice est? :
La deuxième réaction car on retrouve la formation de la quinonéimine
qui est un chromophore coloré en rose.
 Le bilan biochimique

Les indicateurs colorés :

Un indicateur coloré est une substance chimique
qui réagit en présence d’une autre substance en
changeant de couleur.

Principe du test à l’eau iodée (lugol) :

En présence d’eau, l’iode va oxyder le groupement
carbonyle des oses en groupement acide carboxylique.
Placez dans une coupelle l’échantillon à analyser. Y
ajoutez quelques gouttes d’eau iodée. L’eau iodée est de
couleur marron et devient bleue-noire en présence
d’amidon.
 Le bilan biochimique

Principe du test à la liqueur de Fehling :

Le caractère réducteur des glucides peut être mis en évidence au moyen de
diverses réactions
On additionne de la liqueur de Fehling (liquide bleu) à la
solution que l’on veut tester. On chauffe à l’aide d’un bec
bunsen pendant quelques minutes. Le test est positif si un
précipité rouge brique apparaît.
Activité 1 : mise en évidence d’amidon.
En suivant le principe du test à l’eau iodée, déterminer les
aliments dans lesquels on trouve de l’amidon.
Activité2 : mise en évidence du glucose.
En suivant le principe du test à la liqueur de Fehling,
déterminer quels aliments contiennent
du glucose.
 Le bilan biochimique(protéines)

• Les protéines (du grec prôtos, premier) sont des polymères composés
d'une combinaison de quelque 20 acides aminés. La plupart des
protéines sont formées de l'union de plus de 100 acides aminés
(résidus) reliés entre eux par des liaisons peptidiques . Pour un nombre
moins important de résidus on parle de peptides (< 50 résidus) et
de polypeptides (≥ 50 résidus).
• Les acides aminés (« amin » du grec ammôniakos, ammoniac) sont
des composés organiques azotés qui possèdent une formule générale
du type :
Le bilan biochimique
 Le bilan biochimique(protéines)

• Devenir des protéines alimentaires

• Alimentation →protéines alimentaires (végétales et animales) → acides aminés

(par l'action de protéases)

• Acides aminés non-indispensables, indispensables (Tryptophane, Valine, Leucine,

Isoleucine, Valine, Thréonine, Méthionine, Phénylalanine), acides aminés pseudo
indispensables (Arginine, Histidine).
 Le bilan biochimique
Le "turn-over" des protéines
tissulaires est de 1 à 2%. C'est à
dire que 1 à 2% des protéines
tissulaires sont dégradés en acides
aminés. 75% des acides aminés
obtenus servent à synthétiser
d'autres protéines. Le reste est soit
dégradé sous forme de déchets
(urée), soit on en fait des glucides
ou des corps cétoniques.
Ce qui signifie que la perte nette
journalière en protéines est de
30/40g. Pertes en azote de 5 à
Schéma général du métabolisme protéique chez l’homme
7g/jour.
 Le bilan biochimique
Catabolisme des acides aminés
• a. Désamination oxydative

b-Réaction de transamination
 Le bilan biochimique

• Réaction de décarboxylation
 Le bilan biochimique
• methodes d'exploration des proteines
• Elles reposent sur les propriétés fondamentales des protéines :
• - liaison peptidique CO-NH méthodes chimiques.
• - caractère amphotère techniques électrophorétiques.
• - caractère immunogène techniques basées sur la réaction Ag-Ac.
• prélèvement : sur sérum obtenu à partir de sang veineux prélevé à
jeun.
 Le bilan biochimique
• Protéinogramme = analyse des protéines sériques
 Le bilan biochimique

• Principales situations pathologiques

• - Inflammation
• - Insuffisance hépatique
• - Syndrome néphrotique
• - Déficit immunitaire
• - Immunoglobuline monoclonale
 Le bilan biochimique
• Syndrome inflammatoire aigu
 Le bilan biochimique (lipides)
• Les lipides sont consommés après les sucres au niveau de l'intestin. L'alimentation
apporte en moyenne 80 g de lipides par jour. Les lipides sont présents dans l'huile,
le beurre, le gras, quelques viandes, poissons, fromages.
❖ La plupart des lipides alimentaires sont constitués de triglycérides (85 à 95 % des
lipides).
❖ Les lipides sont très énergétiques : ils apportent beaucoup de calories
(1 g de lipide apporte 9 kcal soit 38 kJ).

• Les lipides sont donc une forme privilégiée de mise en réserve d'énergie, surtout
chez les animaux où les lipides sont stockés dans les tissus adipeux.
 Le bilan biochimique(lipides)
• Les lipides sont indispensables au bon fonctionnement de l'organisme mais une
nourriture trop riche en graisses favorise les maladies cardiovasculaires.
• Les lipides donnent aux aliments une texture moelleuse et onctueuse.

Deux acides gras poly-insaturés sont indispensables, l'acide linoléique et l'acide

linolénique. Ces deux acides gras sont apportés par les huiles et transformés dans
l'organisme en d'autres acides gras, en particulier en acide arachidonique. Ces acides
poly-insaturés jouent notamment un rôle dans la constitution des membranes
cellulaires, surtout l'acide linoléique, ce qui explique son importance en phase de
croissance, en raison de la multiplication des cellules. Quant à l'acide linolénique, il
assure une fonction essentielle pour la structure des cellules nerveuses.
 Le bilan biochimique(lipides)

• Les lipides sanguins circulants ou graisses sanguines existent sous trois formes : le
cholestérol, les triglycérides et les phospholipides.
• Des protéines sont associées aux lipides pour permettre le transport dans le sang.
Ce sont les apolipoprotéines ou apoprotéines.
• Lorsque les lipides sont associés aux apoprotéines, ils forment des lipoprotéines
qui peuvent être de nature et de composition différente :
• Chylomycrons de très petite taille, lipoprotéines VLDL (Very Light Density
Lipoprotein) ou lipoprotéines de très faible densité,
• Lipoprotéines LDL (Light Density Lipoprotein) ou lipoprotéines de faible densité
• Lipoprotéines HDL (High Density Lipoprotein) ou lipoprotéines de haute densité
 Le bilan biochimique(lipides)

• L’exploration d’une anomalie lipidique permet de mieux connaître le profil

lipidique de la personne.

• En précisant quel type de cholestérol est augmenté ou si le déséquilibre lipidique

porte majoritairement sur les triglycérides, il est possible d’adapter la prévention
et le traitement de façon individualisée, ce qui en garantit le meilleur bénéfice.

• L’exploration d’une anomalie lipidique comporte une appréciation de l’aspect du

sérum (clair, trouble…), un dosage du cholestérol total, des triglycérides, du HDL
cholestérol et de calculer la concentration du LDL cholestérol si le taux des
triglycérides est inférieur à 4 g/L (soit 4,6 mmol/L).
 Le bilan biochimique(lipides)
• Lipoprotéines LDL (Light Density Lipoprotein) ou lipoprotéines de faible densité

• Lipoprotéines HDL (High Density Lipoprotein) ou lipoprotéines de haute densité

• L'aspect du sérum est normalement limpide. Un sérum opalescent ou lactescent

signifie la présence plus ou moins importante de triglycérides.

• La cholestérolémie correspond à la concentration de cholestérol total dans le sang

exprimée en g/L. La triglycéridémie correspond à la concentration de triglycérides
dans le sang exprimée en g/L.

• Le cholestérol HDL est encore appelé « bon cholestérol » et le cholestérol LDL

appelé « mauvais cholestérol ».
 Le bilan biochimique(lipides)

• Exploration d’une anomalie lipidique

• TG : 0,4 à 1,4 mmol/l, recommandé < 1,7 mmol/l (1,5 g/l)
• Chol total : 4,10 à 6,20 mmol/l
• (valeur recommandée : < 5,20 mmol/l)
• Chol HDL > 1 mmol/l (0,4 g/l)
• Chol LDL < 4,1 mmol/l (1,6 g/l)
 Le bilan biochimique(lipides)

eg : lorsque l'on mange une religieuse au

chocolat et que l'on ne dépense pas ce sucre par
un footing, le glucose ne se dirige pas vers le
Cycle de Krebs mais vers les Acides Gras. Il y a
conservation d'un peu de sucre pour fabriquer
du glycérol (glycérol + 3 acides gras =
triglycéride)
La transformation du glucose en triglycéride
s'appelle la lipogenèse (a lieu dans le foie et les
tissus adipeux). synthèse d'acides gras à partir de glucides
 Le bilan biochimique
Principe d’un dosage
• Doser (ou titrer) une espèce chimique (molécule ou ion) en solution, c’est déterminer sa
concentration molaire dans la solution considérée.
• Nous avons besoin de ces dosages dans tout ce qui concerne les analyses, par exemple,
analyse chimique du sang :
• Dosage du cholestérol, la concentration peut-être molaire (mol/L) ou massique (en g/L).
• Les différentes méthodes de dosage
• 3.1. Des méthodes non destructives :
• Elles ne font pas intervenir de réactions chimiques.
• On utilise des grandeurs physiques dont la valeur ne dépend que de la concentration en
espèce de la solution :
• • Variation de l’indice de réfraction.
• • Variation de l’absorption de lumière (absorbance).
• • Variation de la conductance G.
• Détection et dosage de produits dopants
 Le bilan biochimique

• Les différentes méthodes de dosage

• 3.1. Des méthodes non destructives :
• Elles ne font pas intervenir de réactions chimiques.
• On utilise des grandeurs physiques dont la valeur ne dépend que de la
concentration en espèce de la solution :
• • Variation de l’indice de réfraction.
• • Variation de l’absorption de lumière (absorbance).
• • Variation de la conductance G.
• Détection et dosage de produits dopants
Schéma1 : Les flux de glucose dans l'organisme (Danièle Rasqué., 2008)