La stérilisation/La désinfection/L’antisepsie

Introduction

I- La stérilisation

1- Définition

II- Les étapes préliminaires de la stérilisation

III-Les différentes procédures de stérilisation

1-Stérilisation par les méthodes physiques

a-Stérilisation par la chaleur humide

L’Autoclavage

b-Stérilisation par la chaleur sèche

Le chauffage direct

Le flambage direct

L’incinération

Le chauffage à air chaud

Four Pasteur ou poupinel

c-La stérilisation par les radiations ionisantes

d-La stérilisation par filtration

2-La stérilisation par les produits chimiques

3-Contrôle de la stérilisation

4-Stockage des produits stériles

5-Autres techniques de stérilisation

a- Le flambage à l’alcool

b-L’ébullition

c-La tyndallisation

IV-La désinfection

V-L’antisepsie

Conclusion
Introduction : dans le laboratoire de microbiologie les manipulations doivent-être réalisées en
toute sécurité dans des conditions d’asepsies rigoureuses pour cela trois actions sont
nécessaires à connaitre et à maitriser se sont la stérilisation du matériels de manipulation, la
désinfection des surfaces de manipulation et enfin l’asepsie pour réaliser les prélèvements en
toute sécurité.

La stérilisation

La stérilisation est la mise en œuvre d'un ensemble de méthodes et de moyens visant à

éliminer tous les micro-organismes vivants, de quelque nature que ce soit, portés par un objet
parfaitement nettoyé , de manière durable et irréversible afin de détruire les germes vivants
et d’empêcher leur prolifération.

Les étapes préliminaires de la stérilisation

La stérilisation ne s’effectue que sur des équipements propres ; pour cela, il faut les laver.
Cette étape est appelée le pré-traitement.

• cette étape a pour but de diminuer le nombre de micro-organismes, de faciliter le nettoyage

ultérieur, de protéger le personnel et d’éviter la contamination de l’environnement.

La température de lavage ne doit pas excéder 30°C, le rinçage à l’eau doit être abondant. il
est indispensable d'utiliser des méthodes qui ne sont pas susceptibles de gêner la prolifération
ultérieure des micro-organismes étudiés

Ainsi la verrerie à stériliser doit être propre et parfaitement sèche, éventuellement emballée.

Les différentes procédures de stérilisation

Stérilisation par les méthodes physiques

Stérilisation par la chaleur humide ou l’autoclavage :l’appareil utilisé est l’autoclave qui
fonctionne grâce à la vapeur d’eau de 01Bar et de la température de 120°C pendant 20 min.
Technique :
Le préchauffage qui assure le chauffage de l'enceinte et des parois.
La purge de l'appareil et la réalisation du vide.
Faire monter en température et en pression de la vapeur d'eau
La stérilisation commence lorsque la température et la pression choisies sont atteintes et elle
s'arrête lorsqu'elle diminue.
Le séchage par le vide qui va aspirer la vapeur d'eau.
Le retour à la pression atmosphérique normale qui va permettre le refroidissement de la
charge et l'ouverture de la porte.
Indications : la verrerie propre bouchée, les récipients contenant un milieu de culture doit être
rempli au 3/4.

Stérilisation par la chaleur sèche

Le chauffage direct : est basé sur l’emploi du bec Bunsen qui réglé avec une flamme
bleue, crée une zone de stérilité d'un diamètre d'environ 20 cm.
Cette méthode est utilisée pour la stérilisation extemporanée du matériel de manipulation
pour une utilisation immédiate : l’anse de platine porte la boucle au rouge, la pince , les
pipettes Pasteur par trois passages lents et les cols des tubes en verre contenant des milieux
de culture.

L’incinération : c’est la ddestruction totale du matériel contaminé, non récupérable par

carbonisation totale. Pour cela on utilise l’incinérateur

Le chauffage à air chaud : consiste à détruire les microorganismes par carbonisation de

leurs matières organiques

L’appareil utilisé est un four Pasteur, poupinel ou four à air chaud, c’est une étuve à air
chaud et sec. Les formes végétatives et les spores sont détruites par chauffage à 180°C
pendant 30min.

Technique : régler la température et le temps de stérilisation placer le matériel à stériliser

Le matériel ainsi stérilisé sera laissé dans le four Pasteur jusqu'à son refroidissement complet.
Indication : la verrerie bouchée avec du coton cardé, ou emballée dans du papier résistant
Les objets métalliques doivent être placés dans un tambour de stérilisation

Le poupinel est inefficace contre les Agents Transmissibles Non Conventionnels et il est
susceptible de fixer fortement l’infectiosité résiduelle des prions. Elle reste néanmoins utilisée
dans l’industrie.

La stérilisation par les radiations ionisantes

La stérilisation par les UV de Longueur d’onde 2500-2800 est bactéricide, est utilisée au
laboratoire pour la décontamination de l'air et des paillasses situées sous la hotte de protection
: le rayonnement n'agit que de façon directe et sa pénétration est faible.
D'autres radiations comme les rayons X, sont peu utilisées, peuvent cependant servir pour la
stérilisation industrielle des boîtes de Pétri en plastique.

La stérilisation par filtration :

Cette méthode est utilisée pour les milieux liquides sensibles à la chaleur comme les
sérums, et les vitamines, mais cette technique n'est possible que lorsque la viscosité de ces
milieux est faible.
Matériels utilisés : les filtres de verre poreux comme le verre fritté N°5 qui retient de
nombreuses bactéries
Et les membranes filtrantes à usage unique, de type Millipore ou Sartorius.
Technique : consiste à faire passer le liquide à stériliser à travers une paroi poreuse ou une
membrane qui retient les bactéries.

La stérilisation par des produits chimiques

Ils sont utilisés en général pour la stérilisation des salles et plans de travail et pour la
destruction des germes portés par des instruments souillés, se sont des produits gazeux.
L'oxyde d'éthylène est utilisé dans l'industrie pour la désinfection de certains matériels en
plastique à usage unique.

Autres techniques de stérilisation

Le flambage à l’alcool est opération dangereuse, n’est plus utilisée en microbiologie.

L’ébullition : c’est un chauffage de 30min à 100°C, la vapeur d’eau bouillante suffit à

détruire toutes les formes végétatives mais les spores .

La tyndallisation consiste en une série de 3 chauffages de 1h. à 70 - 80°C, séparées par un

intervalle de 24 heures à température ambiante, ce qui permet la germination des spores et
leur destruction, sans l'emploi d'une température excessive.Le matériel utilisé à cet effet est un
bain Marie à réglage automatique

La filtration par les bougies de porcelaine ou les bougies de Chamberland : se sont des tubes
à fond arrondi, formé de plusieurs couches de kaolin formant une matière poreuse qui retient
les bactéries.

La pasteurisation

Le contrôle de la stérilisation peut se faire par des indicateurs biologiques ou chimiques

Le stockage : en attendant leurs utilisations, les produits stérilisés sont stockés dans des
emballages étiquetés indiquant le nom du produit, la date de stérilisation, puis rangés dans un
endroit à l’abri de la lumière.
 La désinfection : c’est une opération au résultat momentané permettant de tuer ou d’éliminer
les microorganismes et/ou d’inactiver les virus indésirables sur des milieux inertes
contaminés. Le résultat de cette opération est limité aux micro-organismes et/ou virus
présents au moment de l'opération.

Les désinfectants :

Les dérivés chlorés : Hypochlorite de sodium ou eau de Javel, bactéricides, virucides,

fongicidse, sporicides, inactivé par l’eau chaude, matières organiques, et le savon

Les aldéhydes: formaldehydes et glutaraldéhyde, bactéricides, virucides, fongicides,

sporicides, inactivé par les matières organiques,et le savon

Les ammoniums quaternaires: Sanibon, Biocidan, bactéricides, virucides, fongicides,

inactivé par les matières organiques, et le savon, plusieurs bactéries sont résistantes, n’est
plus utilisé dans les structures hospitalières

Les Biguanides: Chlorhexidine, bactéricide, fongicide, inactivé par les matières organiques,
et le savon

Comment utiliser un désinfectant:

- Utilisation sur du matériel propre

-Respecter les dates de péremption, indiquer les dates d’ouverture et conserver selon les
recommandations à l’abri de la lumière et de la chaleur

- Attention aux contaminations : Ne pas toucher l’ouverture du flacon avec les doigts ou
objets souillés

-Respecter le mode d’emploi concentration et temps de contact

L’antisepsie : c’est la désinfection de tissus vivants dans un but prophylactique ou

thérapeutique.

Les antiseptiques utilisés sont :

Halogènes chlorés / Halogènes iodés /Alcool chirugical/Hexamidine

Conclusion