Croissance et

développement des
végétaux supérieurs
Cours 2
 Plan général du cours

I) Généralités sur le développement des végétaux supérieurs

II) Comment étudier le développement ?

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle
2. Obtention et caractérisation de mutants
3. La transgénèse végétale
4. L’analyse clonale

III) L’embryogenèse
IV) Le méristème apical
V) La formation de la fleur ou l’entrée dans la phase de reproduction
VI) Le développement de la racine d’Arabidopsis thaliana
II) Comment étudier le développement
1- Arabidopsis thaliana

II) Comment étudier le développement

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle

2. Obtention et caractérisation de mutants

3. Introduction à la transgénèse végétale

a. Transgénèse végétale
b. Application: du gène à la fonction ou la génétique réverse

4. L’analyse clonale
II) Comment étudier le développement
1- Arabidopsis thaliana

Arabidopsis thaliana:
plante modèle pour le développement des végétaux.

Famille: Brassicaceae (3200 espèces, 350

genres)
Nom usuel: Arabette des dames, Arabette
de Thalius, Arabidopsis de Thalius, Arabette
rameuse ou encore Fausse arabette

www.usask.ca/.../kruger/plsc4164.html. www.botanik.uni-karlsruhe.de/garten/fotos-knoch/.
II) Comment étudier le développement
1- Arabidopsis thaliana

Arabidopsis thaliana:
plante modèle pour le développement des végétaux.

•Petite plante (occupe peu de place en culture)

•Temps de génération court (6 semaines)
•Obtention de nombreuses graines par plante (5 à 10 000)
•Génome de petite taille (125Mb), 5 chromosomes
•Code pour environ 25 500 gènes (gènes dupliqués)
•Nombreux mutants disponibles (collections disponibles)
•Carte génétique
•Plante aisément transformable (PGM)
II) Comment étudier le développement
1- Arabidopsis thaliana

Arabidopsis thaliana:
plante modèle pour le développement des végétaux.

Homo sapiens 2900 million bases ~30,000

Mus musculus 2500 million bases ~30,000
Zea Mais 2500 millions bases (en cours) 50,000-60,000
Populus trichocarpa 480 millions bases (2006) 45,500
Arabidopsis thaliana 125 millions bases (2000) 25,500
Drosophila melanogaster 180 millions bases 13,600
Caenorhabditis elegans 97 millions bases 19,100
Saccharomyces cerevisiae 12 millions bases 6300
Escherichia coli 4.7 millions bases 3200

Puis:
Oriza sativa (~466 millions de bases);
Medicago truncatula (~500 millions de bases),

Depuis 2007: nouvelles technologies de séquençage: séquençage de nombreuses autres

plantes, comme le sorgho, la tomate, le palmier à huile, le jatropha, le concombre,
Brachypodium et surtout le maïs (~2500 millions de bases!!; >50 000 gènes)
II) Comment étudier le développement
1- Arabidopsis thaliana
 II) Comment étudier le développement

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle

2. Obtention et caractérisation de mutants

3. Introduction à la transgénèse végétale

a. Transgénèse végétale
b. Application: du gène à la fonction ou la génétique réverse

4. L’analyse clonale
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse chimique
Ethylméthylsulfonate
Mutagenèse sur graine
Après germination,un secteur
du méristème porte une
mutation

Certaines graines issues de

ce secteur porte la mutation
Après
autofécondation, les
homozygotes
apparaissent en M2
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Exemple de mutants

Mutants monopteros

WT

WT Mutants brevipedicellus
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion

ADNt ou transposon

La protéine n’est plus produite;

Le phénotype est modifié
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion: un phénomène naturel du

aux transposons
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Les transposons

• Prix Nobel 1983

• Propose que le génome n’est pas une
structure statique dès 1940.
• Idée non acceptée jusqu’à la
découverte des transposons bactériens
(1970).

5050 to 60% of the genome is made of transposons

II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Les transposons
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Les éléments AC/Ds du maïs

Les éléments AC/Ds du maïs: mutation somatiques
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion: un processus utilisé par les

chercheurs pour produire des mutants avec étiquette

(IAAH) gene confers sensitivity

to naphthalene acetamide (NAM)
Nature Reviews Genetics 3, 124-136 (February
2002)
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion: un processus utilisé par les chercheurs

pour produire des mutants avec étiquette: on peut utiliser l’ADN de
transfert.

T-DNA
Issu de la bactérie agrobacterium tumefaciens

Nécessité d’utiliser la transgénèse végétale

II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Retour sur la mutagenèse par insertion

II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse: comment trouver le gène?

 Du phénotype au gène

Identification du gène
complexe: carte
génétique, marqueurs
moléculaires, marche
sur le chromosome.

Identification du
gène simple:
gène étiqueté par
l’ADN inséré.
Stratégie PCR
/Plasmid rescue
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

II) Comment étudier le développement

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle

2. Obtention et caractérisation de mutants

3. Introduction à la transgénèse végétale

a. Transgénèse végétale
b. Application: du gène à la fonction ou la génétique réverse

4. L’analyse clonale
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Qu’est ce qu’une plante transgénique?

Est dite transgénique une plante dont un ou plusieurs caractères ont été
acquis, non par transfert de gènes entre deux plantes parentales lors d'un
croisement, mais par des techniques de génie génétique.
Résultat : comme tous les organismes génétiquement modifiés (OGM), une
plante transgénique comporte des séquences d'ADN obtenues par des
manipulations in vitro.

La transgénèse permet d'introduire dans des plantes de nouveaux gènes

"construits" à volonté. Une fois intégrés dans le génome de la plante, les
transgènes sont transmis à la descendance au même titre que tous les autres
gènes. On peut ainsi introduire des gènes de résistance, stérilité, production
de nouvelles protéines etc. Ce sont ces nouveaux caractères qui déterminent
l'avantage agronomique et le risque éventuel.
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion: la

transgénèse végétale, un outil essentiel
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Organisation du plasmide Ti

(Production d’auxine et de cytokinines)

II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Mutagenèse par insertion: la

transgenèse végétale, un outil essentiel
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Notion de vecteurs désarmés

Elimination des séquences oncogènes et des gènes de

synthèse des opines

Gène d’intérêt
Ori
+marqueur
Vir de sélection
II) Comment étudier le développement
2- Obtention de mutants

Transformation par co-culture d’explants

 II) Comment étudier le développement

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle

2. Obtention et caractérisation de mutants

3. Introduction à la transgénèse végétale

a. Transgénèse végétale
b. Application: du gène à la fonction ou la génétique réverse

4. L’analyse clonale
La génétique reverse: du gène à la fonction

•Modification de l’expression du gène endogène.

•Utilisation de la transgenèse.

•Stratégie de surexpression

•Stratégie antisens ou RNAi: limitation de l’expression

La génétique reverse: du gène à la fonction

•Utilisation dela transgénèse pour modifider

l’expression du gène endogène.

•Stratégie de surexpression

•Promoteur fort contrôlant l’expression de l’ADNc cible

P 35S YFG or cDNA TER Kan R

a b
•Stratégie antisens ou RNAi: limitation de l’expression
P 35S GFY or ANDc
b a TER Kan R
 II) Comment étudier le développement

1. Arabidopsis thaliana: plante modèle

2. Obtention et caractérisation de mutants

3. La génétique reverse: du gène à la fonction

4. L’analyse clonale
 Analyse clonale du développement

Principe : marquage de cellules somatiques avec une mutation.

Il faut que toutes les cellules qui portent la mutation puissent être
visuellement différenciées des cellules non mutées.

But:
Identifier toutes les cellules dérivant d’une même cellule mère
 Étudier la distribution et l’orientation des divisions cellulaires dans
un organe.
Les chimères: un outil pour l’analyse de l‘organisation des méristèmes.

A la poursuite des chimères

Ee
L’analyse clonale peut être utilisée pour
Exemple du méristème apical de
construire « une carte des devenirs » maïs.
Des graines hétérozygotes pour certains
gènes de synthèse des pigments
(anthocyanes) sont irradiées, de façon à ce
que l’allèle dominant soit perdu dans une
cellule. Ainsi, les cellules qui dérivent de la
cellule mutée (mutant somatique) peuvent être
visuellement différenciées des cellules non
mutées (sur la base de la couleur).

Les plantes A and B présentent des secteurs

mutés qui permettent d’analyser le devenir
des cellules du méristème apical de la graine.
Le secteur mutant de A inclut à la fois des
entre nœuds végétatifs et reproducteurs. Ainsi
ce n’est pas un sous groupe particulier de
cellules qui forme les tassels.
Le secteur mutant en A est plus long et plus
large qu’en B. cela indique que plus de
cellules du méristème sont mises à
contribution pour générer les entrenoeuds du
bas.
Le secteur A représente 1/8 de la
circonférence de la tige, ainsi dans le
méristème 8 cellules sont nécessaires pour
ces entre-nœuds.
Le secteur B représente seulement 1/24 de la
circonférence de la tige, ainsi dans le
méristème 24 cellules sont nécessaires pour
ces entre-nœuds.
Dans cet exemple, seules les cellules qui
dérivent de la couche cellulaire la plus externe
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=dbio.figgrp.5004
sont analysées.