PRÉPARATION DE LA SEANCE DE TRAVAUX PRATIQUES N°2

« ÉTUDE DES PROPRIETES STRUCTURALES ET PHYSICO-CHIMIQUES DE L’ADN »

Date :

IDENTIFICATION DE l’ETUDIANT(E)

NOM : PRENOM : GROUPE :

 Calculer les volumes (en μl) à ajouter dans chaque tube et compléter le tableau ci-dessous :

Rappel :
Dans le cadre de cette expérience, il est nécessaire de réaliser une réaction témoin (contrôle) pour
vérifier que l’activité observée est due uniquement à l’action enzymatique.
Pour cette expérience, 2 témoins sont possibles car il y a 2 tampons différents, n’indiquer qu’une seule
composition dans le tableau suivant.

Conditions Tube N°0 Tube N°1 Tube N°2 Tube N°3

Solutions stocks expérimentales Témoin Digestion Digestion Digestion
par tube simple double DNase I
ADN plasmidique 300 ng
50 ng/µL
Eau Eau

Tampon ER Tampon ER 1X
10X
Tampon DN Tampon DN 1X
10X
ER1 = …… ER1 (10 U)
(20 U/µL)
ER2 = …… ER2 (10 U)
(20 U/µL)
DNaseI DNaseI (2 U)
(2 U/µL)
Vol. final
10 10 10 10
(en µL)

1
  Compléter le tableau suivant :
Indiquer le nombre de fragment(s) linéaire(s) obtenu(s) après digestion des plasmides par les
enzymes indiquées dans le tableau. Si la digestion n’est pas possible indiquer ND (pour non digéré)

pBM01 pBM02 pBM03

Nombre de Tailles des Nombre de Tailles des Nombre de Tailles des

fragments fragments fragments fragments fragments fragments
linéaires linéaires linéaires linéaires linéaires linéaires
EcoRI

BamHI

HindIII

EcoRI + BamHI

EcoRI + HindIII

BamHI + HindIII

EcoRI + HindIII +
BamHI

 Compléter le tableau Vrai ou Faux, pas de justification demandée :

VRAI FAUX
Le pic d’absorption de l’ADN est à 280nm

La dégradation de l’ADN est réversible

Les petits fragments d’ADN migrent plus vite dans le gel que les grands fragments d’ADN

1 unité d’enzyme permet de digérer 1 µg d’ADN en 1h à 37°C

Pour prélever un volume de 205 µL il faut utiliser une micropipette P200

Le tampon de charge permet de visualiser les fragments d’ADN sous UV

Un gel à 0,8% d’agarose permet de mieux séparer des fragments d’ADN de petites tailles
qu’un gel à 2% d’agarose.
Les fragments d’ADN du marqueur de taille sont des ADN double brin linéaires