Département de Biologie

FILIERE SCIENCES DE LA VIE

Manuel des Travaux Dirigés (TD) de Microbiologie SV3

Module de Microbiologie générale

Elaboré par les Enseignants chercheurs dont les noms suivent :

M. BARAKATE N. OUAZZANI
L. HASSANI K. OUFDOU
B. IMZILN Y. OUHDOUCH
N. MEZRIOUI L. RAFOUK

Année Universitaire
2020 - 2021
 Avant-propos

Ce document est préparé pour les étudiants de SV3. Les étudiants doivent le lire attentivement avant
d’assister aux séances de travaux dirigés (TD),
Les enseignements de travaux dirigés permettent de compléter les notions de base acquise en cours. Les
différents TD qui seront réalisés en présentiel ou à distance vont porter principalement sur les parties du
cours suivantes :
 TD1 : Dénombrement bactérien
 TD2 : Nutrition et métabolisme bactériens
 TD3 : Identification bactérienne
 TD4 : Croissance bactérienne
 TD 2 : NUTRITION ET METABOLISME BACTERIENS
L'oxydation des composés réduits du soufre dans le sol est surtout un processus biologique dû aux bactéries.
En fonction du type trophique, les bactéries appelées sulfureuses ou sulfo-oxydantes peuvent être classées en 3
groupes différents :

Groupe I : Les Chlorobactériacées et les Thiorhodacées

Les bactéries de ce groupe se développent en présence de la lumière et d'hydrogène sulfuré (H2S) et en absence
d’oxygène. Elles sont capables d'utiliser le gaz carbonique comme seule source de carbone.

1) Quel est le métabolisme énergétique qui caractérise les organismes qui se développent seulement en
présence de la lumière ?
2) Ce métabolisme nécessite t- il une alimentation en donneur des H+ et e- ? Si oui précisez la nature de ce
donneur chez les bactéries sulfureuses de ce groupe ?
3) Donnez une réaction globale qui montre à quel niveau H2S est utilisé dans ce type de métabolisme énergétique
?
4) A quel type trophique appartiennent ces bactéries par rapport au besoin énergétique ?
5) A quel type trophique appartiennent ces bactéries par rapport au besoin carboné ?

Groupe II : Les Thiobactériacées

Les bactéries de ce groupe se développent en présence des formes réduites du soufre (H2S, S-, S, S2O3- -) seulement au
contact de l'atmosphère et à l'obscurité.
1) Pour leur métabolisme énergétique, ces bactéries ont besoin de 2 nutriments à la fois. Lesquels ? Quelle est
leur fonction ?
2) A quel type trophique appartiennent ces bactéries par rapport au besoin énergétique ? Précisez la signification
de la dénomination utilisée ?
3) Quel est le type physiologique (métabolisme énergétique) correspondant à ce type trophique ?
4) Quels seront les produits accumulés à partir du donneur d’H+ et d'e- ?
5) Et à partir de l’accepteur des H+ et e- ?
6) Quelle est généralement la nature du besoin carboné chez les bactéries de ce groupe trophique ?

Groupe III : constitué par les microorganismes variés qui tirent leur énergie principalement de l’oxydation d’un
nutriment organique, et accessoirement de l'oxydation de composés soufrés. Leur source de carbone est toujours
une molécule organique.
1) Quel est le type trophique correspondant au métabolisme énergétique principal de ces bactéries ? Quel est
leur type trophique par rapport au besoin carboné ?
2) Peut-on considérer que ces bactéries appartiennent à 2 types trophiques à la fois ? Si oui, lesquels ?
3) Certaines bactéries chimiotrophes du sol ont pour donneur d’électrons une molécule organique et pour
accepteur d'e- SO42-. Donnez le nom de ce métabolisme énergétique et le type trophique correspondant ?
4) Dans le tableau suivant, précisez les 3 types d’accepteurs d'e- correspondant à chaque type de métabolisme
énergétique :

Accepteur d’H+ et e- ? ? ?
Type de métabolisme respiration aérobie respiration anaérobie fermentation
 1. Pour un de ces trois types physiologiques, un seul type de nutriment est nécessaire pour satisfaire le besoin
énergétique.
a) De quel métabolisme énergétique s'agit-il ?
b) Quelle est la fonction de ce type de nutriment ?
c) Pourquoi est-il seul nécessaire ?

A/ Application à l'enrichissement
On ensemence une flore mixte de bactéries du cycle du soufre sur le milieu suivant ; à l'obscurité : Glucose : 16g/l;
(NH4)2SO4 : 1g/l; K2HPO4: 7g/l; KH2PO4 : 3g/l; Mg SO4, 7H2O: 0,1 g/l.
On obtient une culture.
1. Auquel des groupes bactériens précédents appartiennent les souches qui sont sélectionnées ?
2. Donnez le type trophique de ces souches pour le besoin énergétique et le besoin en carbone ?
3. vous devez sélectionner les bactéries du 2ème groupe autotrophes strictes pour le carbone, dans une flore
mixte de bactéries sulfo-oxydantes. Vous disposez d'un milieu de base constitué par : K2HPO4,
KH2PO4, MgSO4, Fe SO4, CaCl2 et MnCl2 , et des produits suivants: NH4Cl , NaHCO3 , Na2S , glucose, parmi
lesquels vous pouvez choisir des additifs au milieu de base. Donnez :
4. Donnez :
a. les conditions de culture nécessaires pour un enrichissement ?
b. la composition qualitative du milieu d’enrichissement que vous pouvez préparer ? milieu de base +
……………….. ?

B/Application à l'identification
On a trois souches de bacilles mobiles "Gram-" cultivant bien sur un milieu ordinaire (milieu riche en matière
organique exposé à l'air, maintenu à l'obscurité à 37°C), et ne croissant pas sur un milieu exclusivement minéral.
1. Quel est le type trophique commun à ces 3 bactéries ? Ces trois souches appartiennent à 3 familles bactériennes
différentes ; le tableau ci-dessous en donne les caractères d'identification principaux :
N° de souche Voie d’attaque Nitrate
Famille Besoin en O2 Oxydase
du glucose réductase
1 Pseudomonadaceae Aérobie oxydative
strict
+ +
2 Vibrionaceae Anaérobie fermentative
facultatif
+ +
3 Enterobacteriaceae Anaérobie fermentative
facultatif
- +

* La nitrate réductase catalyse la réduction : NO3 NO2

2. En vous appuyant sur ce tableau, précisez : les types métaboliques de chaque souche ?