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Bioch1an16-Enzymologie Ghouali
Bioch1an16-Enzymologie Ghouali
Dr .MA.GHOUALI
Exemple :
Phosphorylase : fixe l’acide phosphorique sur les
sucres
Généralités et Définitions
Isomérases : Transforment une molécule en son isomère
Généralités et Définitions
Le co-facteur
Structure secondaire :
La séquence AA subit des repliements pour former des
motifs (hélices α et feuillet β)
Structure des enzymes
Structure tertiaire :
- Association de plusieurs motifs, donnant une forme
spatiale à la protéine.
- Cette organisation entraine une localisation:
Spécificité de substrat :
Exemple :
6 classes
Enzyme :
ATP glucose Phosphotransférase
(2.7.1.1)
Classification des enzymes
Cependant d’une manière générale, la dénomination
internationale d’une enzyme comprend :
Nom du substrat
Celui de la classe de l’enzyme
Phosphorylases :
Les enzymes qui hydrolysent les liaisons osidiques
et assurent le transfert d’un groupement phosphate
Site actif des enzymes
Les protéines enzymatiques interagissent avec d’autres
molécules protéiques ou non protéiques ; ces molécules
sont appelées ligands
Le substrat est un ligand spécifique des enzymes
Site catalytique :
Permet la réaction transformant le substrat en produit
Site actif des enzymes
Site actif des enzymes
Il comprend 3 types d’acides aminés :
E+S ES P+E
Les différentes phases de la réaction
enzymatique
Concentration
[S] [P]
Evolution de la cinétique
enzymatique
[ES]
T0 T1 T2 Temps
- Vitesse de la réaction
est constante:
Vitesse initiale
(Reste constante tant que
le substrat est à
concentration saturante
de l’enzyme)
Les différentes phases de la
réaction enzymatique
Notion d’ordre:
Décrit les variations de la vitesse en fonction de la
concentration des réactants
Les différentes phases de la
réaction enzymatique
V= - dS / dt
V= dP / dt
Phase II:
Phase I
Inflexion de la droite par:
-Epuisement du substrat
- Inactivation de l’enzyme
- Formation d’une grande
quantité de produits,
susceptible de donner la
Temps réaction inverse
Définition de la vitesse d’une
réaction enzymatique
Il est indispensable
D’étudier la vitesse initiale de réaction dans les conditions
ou la
[S] ˃ [E]
Vi constante
Vi est proportionnelle
Vi est à la E dans un
proportionnelle
à la E premier temps, puis
elle demeure constante
pour des
concentrations
enzymatiques plus
élevées
E
Variation de la vitesse initiale en fonction
de la concentration du substrat
Influence de la [Enzyme] sur la [Produit]
[P]
[E3]
[P3]
[E2] [E3] > [E2 ]> [E1]
[P2]
[E1]
[P1]
T Temps
Influence de la concentration croissante
du substrat
[P]
[S3]> [S2]> [S1]
[S3]
[S2]
[S1]
T Temps
En pratique,
Détermination d’une activité enzymatique lorsque
[S] est saturante (en excès)
Hypothèse de Michaelis-Menten
K1 K3
E+S ES E+P
K2
(K1,K2 et K3 = constantes de vitesse )
V1
Formation du complexe ES: E+S ES
(Etape rapide et réversible) V2
V3
Dissociation du complexe ES: ES E+P
Disparition de S
Apparition de P
Régénération de E
L a constante de Michaelis:Km
• D’après la loi d’action de masse:
V1 = k1 [E][S] ……. (1)
V2 = k2 [ES] ..….. (2)
Vitesse d’apparition des produits:
dP/dt= V3= k3 [ES]….. (3)
k2 + k3 = [E][S] =Km
K1 [ES]
S] = k m: V= V max/2
S] ˃˃ k m: V= V max
Méthode de détermination de la
constante de Michaelis
1- Méthode arithmétique:
1 = Km 1 + 1
V Vm [S] Vm
Méthode de détermination de la
constante de Michaelis
2- Méthode graphique d’Eadie Hofstee:
V
V = Vm - Km V
[S]
Vm
Pente= - km
Vm/ Km V/ [S]
Définition des unités enzymatiques
Unité internationale:
Quantité d’enzyme capable de catalyser la transformation
d’une micromole de substrat par min, dans des
conditions optimales de mesure
UI= µ mol/min = Activité enzymatique= V max
UI/ unité de volume
µ mol/min UI
mg de protéine mg de protéine
µ mol/min UI
µ mol de protéine µ mol de protéine
Détermination de l’activité enzymatique
En cinétique:
Do= ε . C. l C= Do. 1/ ε .1/l