Cours Du SAPL

Laboratoire d’hématologie
Hôpital RAZI – CHU MED VI
Diagnostic au laboratoire d’un Syndrome des

AntiPhosphoLipides (SAPL)
Dr. MHIRIG Ibtissam
Pr. SAYAGH Sanae
Laboratoire d’hématologie, hôpital Razi des spécialités
CHU Mohamed VI de Marrakech

Plan
Introduction
Rappel
A. Physiologique
B. Physiopathologique
III. Circonstances de découverte
IV. Diagnostic au laboratoire des SAPL
A. Etape pré-analytique
B. Etape analytique
a. Tests d’orientation
b. Tests spécifiques
V. Critères diagnostiques des SAPL
VI. Conslusion
Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique
B. Etape analytique

I. Introduction
A. Définition
 Une entité clinico-biologique:
* Evénements thrombo-emboliques veineux et ou artériels
* Complications obstétricales
* Présence persistante d’anticorps anti-phospholipides

 Appanage de la femme jeûne avec un âge moyen de 42 ans
 Pouvant être primitive ou secondaire
 1ère cause de la thrombophilie acquise

I. Introduction
A. intérêt de la question
 Fréquence et des pathologies thrombo-emboliques
 Gravité des pathologies thrombo-emboliques
 La recherche des ACC dans le cadre d’un SAPL est une prescription de
1ère intention dans le bilan de la thrombophilie

 Éviter les récidives.
 Complexité diagnostique.
 Rôle primordial du laboratoire dans le diagnostic positif et le suivi

Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique
B. Etape analytique
VI. Conslusion
II. Rappel
A. Physiologique
a. Coagulation : In vitro
II. Rappel
A. Physiologique
a. Coagulation : In vivo
II. Rappel
A. Physiologique
a. Coagulation : In vivo
II. Rappel
A. Physiologique
a. Coagulation : Inhibiteurs de la coagulation
II. Rappel
A. Physiologique
a. Coagulation : Inhibiteurs de la coagulation
II. Rappel
A. Physiologique
b. Phospholipides
II. Rappel
B. Physiopathologique ( Anticorps anti-phospholipides APL)
D’où vient les aPL?
Dans la situation physiologique
•L’antigène qui est la Phosphatédylsérine (PS) = PL anioniques peu immunogène et présente à
la face interne de toutes les membranes cellulaires
•En cas d’apoptose, inversion et exposition des phospholipides anioniques à la surface des
cellules
•La PS peut lier de nombreux cofacteurs protéiques, comme la β2GP I, et constitue alors des
stimuli répétitifs des lymphocytes B naïfs de la moelle osseuse
• Synthèse de lymphocytes B producteurs d’aPL qui restent sous le contrôle des mécanismes
de tolérance
II. Rappel
A. Physiopathologique ( Anticorps anti-phospholipides APL)
Dans la situation physiologique

II. Rappel
En cas de SAPL
• Prédisposition génétique
• Stimulus antigéniques persistants: la récurrence des infections bénignes aigues; des
épitopes viraux ou bactériens qui peuvent simuler la β2GP I:
• Production des aPL pathologiques : sont davantage mutés au niveau des régions
variables PL et ont une affinité moyenne aux PL, supérieure à celle des aPL du sujet
normal,
II. Rappel
II. Rappel
a Grande hétérogéinité
• Les APL : Large famille hétérogène d’auto
anticorps:
• Ils reconnaissent diverses antigènes, soit
+ Directement les phospholipides (PL)
anioniques (Anti Cardiolipines) ou neutres.
+ Des protéines se fixant sur les PL: anti

β2GPI ou anti- prothrombine.
+ Anticorps dépendants ou pas aux

cofacteurs (LA)
II. Rappel
• Les APL : ne sont pas spécifiques du SAPL:
• Transitoires :
- Infections (la syphilis, la lèpre, les

hépatites virales et l’infection par le VIH ou
l’EBV); prise médicamenteuse
(bétabloquants); des néoplasies
(hémopathies malignes et tumeurs solides)
- Ils ne sont pas pourvoyeuses de

thrombophilie
II. Rappel
• Persistantes ==== SAPL.
- SAPL primitive: en dehors des MAI
- SAPL secondaire : LEAD

II. Rappel
b Allongement paradoxal des tests de coagulations PL
dépendants (LA)
- APL de type lupique +++ LA
+ LA ne dépendant pas de cofacteurs

rencontrès en cas d’infections
+ LA dépendants de cofacteurs ( B2GP1)

en cas de LEAD ; thrombogènes
NB : De rares LA dépendants de la
prothrombine responsable d’une
hypoprothrombinémie sont pourvoyeuses
des hémorragies
II. Rappel
b Allongement paradoxal des tests de coagulations PL dépendants (LA)
IN VITRO
- aPL se dirigent contre les complexes de
coagulation PL dépendants (ténase

intrinsèque et pro-thrombinase)
- Lorsque les aPL ne sont pas dirigés contre
les PL du réactif, les tests de coagulation

sont normales
II. Rappel
IN VIVO
(Activation
cellulaire)
II. Rappel
b Allongement paradoxal des tests de coagulations PL
dépendants (LA)
IN VIVO
(Diminution
Des inhibiteurs)
PC/PS
II. Rappel
IN VIVO
(Diminution
Des inhibiteurs)
ANNEXINE A5
= Rôle protecteur
Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique

B. Etape analytique
a. Recherche du LA
b. Recherche des aCL et BIIGPI

A. Cliniques
 Evénements thrombo-emboliques veineux et ou artériels récidivants
ou inhabituels par leur localisation

 Neurologiques : Convuslions et chorée
 Hématologiques : Syndrome anémique, hémorragique, infectieux
 Rénales
 Complications obstétricales : HELLP Sd, Préeclampsie, éclampsie
 Complications fœtales : RCIU; MFIU; FC

B. Découverte fortuite
 Allongement des tests de la coagulation
 NFS : Découverte d’une thrombopénie, anémie ou leucopénie
 Dissociation VDRL (aCL) et TPHA
TPHA négatif et VDRL positif

 Demandée dans le cadre d’un bilan pré-thérapeutique, suivi d’une
pathologie générale, bilan général de la santé

Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique

B. Etape analytique
a. Recherche du LA
b. Recherche des aCL et BIIGPI
A. Etape pré-analytique (externe au laboratoire)
Le respect de ses étapes conditionne la fiabilité des résultats
Patient.
 Assurer le patient: Fg est augmenté en cas de stress majeur.
 Prélévement fait le matin, à jeûn sauf en cas d’urgence.
 Éviter les stimulants: Café, tabac, alcool, exercice physique dans l’heure
suivant le prélèvement:
 Position assise, au repos pendant 5 min.
le respect de ses étapes conditionne la fiabilité des résultats
Prélèvement.
 PVF
 VGC
 Éviter prélèvement avec la seringue ( risque d’activation plq et de la coagulation)
 Garrot
 Le choix de tube dépend de la nature des bilans qu’on veut réaliser
+ Tube citraté pour la recherche du LA
+ Tube sec pour la recherche des aCL et Anti-BIIGPI.

A.Etape pré-analytique(externe au laboratoire)
Prélèvement.
Tube citraté
 Tube en verre siliconné ou en plastique
 Concentration de 3,2 % OMS ( une concentration de 3,8% est acceptable)
 1 volume d’anticoagulant pour 9 volumes de sang :

Remplissage à 90% : recommandé
Remplissage ≥ 80% : acceptable
Remplissage < 80% : refuser le prélèvement
 Si tube peu rempli  plasma hypercitraté  temps
d’hémostase faussement allongés
Prélèvement.
Tube citraté
- Hématocrite et anticoagulant :
o Le volume d’anticoagulant dans les tubes citratés est adapté à un
hématocrite entre 20% et 55%

o Si Hte < 20% : volume de plasma augmenté et volume d’anticoagulant
insuffisant  temps de la coagulation raccourcis

o Si Hte > 55% : volume de plasma diminué et volume d’anticoagulant très
important  faux allongement des temps de la coagulation

Prélèvement.
Tube citraté
 Transport : Rapide 1h à2h; délai max de 4H
 Conservation : T° ambiante ;entre 15°C et 25°C

A. Etape pré-analytique (interne au laboratoire)
Éliminer les non conformités :

• Absence d’identification
• Discordance entre étiquetage et l’identité marquée sur le bon de
demande
• Délai d’acheminement > 4h
• Tube inapproprié
• Prélèvement coagulé
• Prélèvement hémolysé
• Ratio anticoagulant / sang non respecté
A. Etape pré-analytique (interne au laboratoire)
Double centrifugation .
Décantation du plasma
permet d’assurer un nb
de plaquettes résiduel
< 10G/L
B. Etape analytique
Le diagnostic biologique du SAPL est centré sur trois paramètres qui sont les aPL
conventionnels :
lupus anticoagulant (LA)
Anticorps anticardiolipine (aCL).
Anticorps anti β2glycoprotéine I (anti β2GPI)
==== d’isotypes IgG ou IgM.
.
B. Etape analytique ( Recherche du LA)
 La recherche du LA doit être pratiquée en suivant les recommandations
du sous-comité «lupus anticoagulant/anticorps antiphospholipides» de la

Société Internationale d’Hémostase et Thrombose (ISTH) de 1995, revues
dernièrement en 2009, comportent quatre étapes.
 Dépistage
 Mise en évidence d’une activité inhibitrice
 Confirmation de la dépendance en phospholipides de l’inhibiteur
 Exclusion d’une autre anomalie de la coagulation (inhibiteurs
spécifiques)
Dépistage
 Suite à un allongement des tests de coagulation PL dépendant
TCA : explorant la voie intrinsèque de la coagulation
dRVVT (temps de Venin de Vipère Russell Dilué): explorant la voie commune
Temps de Thromboplastine Diluée (TTD): explorant la voie extrinsèque, n’est pas

recommandée.
 2/3 tests positifs sont en faveur d’un dépistage positif.
Dépistage
TCA sensible (Voie intrinsèque)
Temps de coagulation d’un plasma citraté, pauvre en plaquettes, recalcifié, en
présence de Céphaline (PL synthétiques en faibles quantités) et un activateur de la

phase contact sensible (acide éllagique).
 TCA allongé, exprimé en s et intérprété par rapport à un témoin sup à 1.2
Éliminer une erreur pré-analytique : Tube mal rempli, Hte supérieur à 55%
Éliminer une prise d’ héparine: Temps de thrombine et activité anti Xa : normales
TCA allongé sur un deuxième tube de prélèvement de contrôle.
==== Test de mélange : Indice de Rosner supérieur à 15%

B. Etape analytique (Recherche du LA)
Dépistage
TCA sensible (Voie intrinsèque)
Si les aPL d’un patient atteint du SAPL ne sont pas dirigés contre les PL du réactif ,
le TCA sensible revient normal.
D’où l’intérèt d’ un allongement d’au moins de 2 tests dépendants en PL .

Dépistage
dRVVT (Voie commune) Temps de Vénin de Vipère Russel Dilué
Son allongement est plus spécifique des LA que celui du TCA et plus sensible aux
LA induits par les anticorps anti β2GPI qui sont les plus pathogènes.
La coagulation est déclenchée par un venin activateur direct du facteur X en
présence de Calcium et en faibles quantités en PL ( LA screen)

Il n’est donc pas influencé par les déficits en facteur VIII, IX ou en facteurs du
système contact ou par les inhibiteurs dirigés contre ces facteurs

LA screen est allongé en cas de SAPL.
Dépistage
TTD (Voie extrinsèque)
Le temps de Quick, qui est réalisé en excès de thromboplastine tissulaire dilué.
Il est rarement perturbé par la présence d’anticoagulants circulants lupiques.
Test abondonné
Mise en évidence d’une activité inhibitrice

 C’est l’épreuve de correction ou mélange à parties égales des plasmas du malade
et d’un témoin "M+T "

 L’obtention d’une correction est en faveur d’un véritable déficit d’au moins un des
facteurs explorés par le test

 L’absence de correction ou la correction partielle du temps de coagulation signe la
présence d’un inhibiteur de la coagulation.
AU TOTAL ! mev de la présence d’un ACC : Spécifique ou Non spécifique ?

Mise en évidence d’une activité inhibitrice
DRVVT Screen
Confirmation de la dépendance en phospholipides de l’inhibiteur
 Pour distinguer les LA des inhibiteurs dirigés contre un facteur de la coagulation
(par exemple un anticorps anti-VIII), il faut refaire le ou les tests de dépistage allongés
en présence d’un excès de phospholipides = Tests de neutralisation.
 Si l’inhibiteur présent est bien un LA, on observe une correction au moins partielle
de l’allongement du test.
Confirmation de la dépendance en phospholipides de l’inhibiteur
 Nous calculons un rapport « normalisé » (RN) selon la formule

Faible
qtes de
PL
Excès de
PL
Exclusion d’une autre anomalie de la coagulation (inhibiteurs spécifiques)

Les LA de forte activité peuvent interférer dans la mesure chronométrique des
facteurs de la coagulation réalisée dans les conditions habituelles.

 Il est alors recommandé de renouveler la mesure des facteurs abaissés sur
des dilutions croissantes du plasma du patient (pouvant aller jusqu’à 1/80):

 La persistance de l’abaissement d’un facteur est en faveur d’un déficit sous-
jacent ou d’un anticorps antifacteur associé.

 Méthodes de dosage chromogéniques non influencées par le LA doit être
envisagé
B. Etape analytique (Recherche du BIIGPI)
(Recherche des aCL)
Technique immunologique : ELISA

IV. Diagnostic au laboratoire de SAPL
B. Etape analytique (classification de SAPL)
Un bilan biologique positif devrait obligatoirement être controlé sur un deuxième

prélèvement séparé d’au moins 12 semaines
Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique
B. Etape analytique
a. Recherche LA
b. Recherche BIIGPI
V. Critères diagnostiques du SAPL

Critères de
SAPPORO
== le critère biologique doit être présent sur 2 semaines ; et entre 12 semaines et 5 ans
après l’événement clinique.
Plan
I. Introduction
II. Rappel
A. Physiologique
B. Etape analytique
a. Recherche LA
b. Recherche BIIGPI

Conclusion
 Le SAPL doit être évoqué devant tout épisode de thrombose ou de complication
obstétricale évocatrice, surtout chez un sujet jeune.

 La recherche de LA, d’aCL et d’anti-B2GP1 est alors indispensable pour poser le
diagnostic.
 La mise en évidence d’un aPL par ces tests biologiques devra ensuite,
impérativement être contrôlée sur un nouveau prélèvement séparé d’au moins 12

semaines.
 Il est obligatoire d’éviter les diagnostics par excès (aPL non spécifiques), car la prise
en charge thérapeutique actuelle repose sur la prescription d’AVK au long cours.

 Une bonne collaboration clinicobiologique permet de mieux identifier les
populations à risque, les diagnostiquer et les traiter comme ile le faut.

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Hôpital RAZI – CHU MED VI

Diagnostic au laboratoire d’un Syndrome des

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CHU Mohamed VI de Marrakech

III. Circonstances de découverte

IV. Diagnostic au laboratoire des SAPL

V. Critères diagnostiques des SAPL

III. Circonstances de découverte

IV. Diagnostic au laboratoire des SAPL

V. Critères diagnostiques des SAPL

 Une entité clinico-biologique:

* Evénements thrombo-emboliques veineux et ou artériels

* Présence persistante d’anticorps anti-phospholipides

 Pouvant être primitive ou secondaire

 1ère cause de la thrombophilie acquise

 Fréquence et des pathologies thrombo-emboliques

 Gravité des pathologies thrombo-emboliques

1ère intention dans le bilan de la thrombophilie

 Rôle primordial du laboratoire dans le diagnostic positif et le suivi

III. Circonstances de découverte

IV. Diagnostic au laboratoire des SAPL

V. Critères diagnostiques des SAPL

Dans la situation physiologique

•L’antigène qui est la Phosphatédylsérine (PS) = PL anioniques peu immunogène et présente à

la face interne de toutes les membranes cellulaires

stimuli répétitifs des lymphocytes B naïfs de la moelle osseuse

Dans la situation physiologique

• Stimulus antigéniques persistants: la récurrence des infections bénignes aigues; des

épitopes viraux ou bactériens qui peuvent simuler la β2GP I:

• Les APL : Large famille hétérogène d’auto

• Ils reconnaissent diverses antigènes, soit

+ Directement les phospholipides (PL)

anioniques (Anti Cardiolipines) ou neutres.

+ Des protéines se fixant sur les PL: anti

+ Anticorps dépendants ou pas aux

• Les APL : ne sont pas spécifiques du SAPL:

- Infections (la syphilis, la lèpre, les

- Ils ne sont pas pourvoyeuses de

• Persistantes ==== SAPL.

- SAPL primitive: en dehors des MAI

- SAPL secondaire : LEAD

+ LA ne dépendant pas de cofacteurs

+ LA dépendants de cofacteurs ( B2GP1)

coagulation PL dépendants (ténase

les PL du réactif, les tests de coagulation

III. Circonstances de découverte

b. Recherche des aCL et BIIGPI

V. Critères diagnostiques des SAPL

 Evénements thrombo-emboliques veineux et ou artériels récidivants

ou inhabituels par leur localisation

 Hématologiques : Syndrome anémique, hémorragique, infectieux

 Complications obstétricales : HELLP Sd, Préeclampsie, éclampsie

 Complications fœtales : RCIU; MFIU; FC

 Allongement des tests de la coagulation

 NFS : Découverte d’une thrombopénie, anémie ou leucopénie

 Dissociation VDRL (aCL) et TPHA

TPHA négatif et VDRL positif

pathologie générale, bilan général de la santé

III. Circonstances de découverte

IV. Diagnostic au laboratoire des SAPL

 Prélévement fait le matin, à jeûn sauf en cas d’urgence.