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Spectroscopie de Rsonance Magntique Nuclaire

Applications de la RMN la
dtermination structurale
Applications de la RMN la dtermination structurale

Contenu

Proprits magntiques des noyaux, niveaux d'nergie,


processus de relaxation, RMN impulsionnelle par transforme
de Fourier, effet Overhauser nuclaire, dcouplage homo et
htro-nuclaire, chos de spin, DEPT/INEPT/APT, RMN 2D,
corrlation au travers des couplages scalaires 1H-1H (COSY),
1H-13C (HMBC/ HMQC/ HSQC), corrlation au travers des
couplages dipolaires (NOESY). Application l'interprtation de
spectres 1H, 13C, 19F, 31P et autres noyaux.
Applications de la RMN la dtermination structurale

Prrequis

Bases thoriques de la RMN

RMN 1H : paramtres (dplacement chimique, intgration,

couplage); interprtation des spectres protoniques 1H


Objectifs

L'objectif gnral du cours :

* Apporter les bases ncessaires dans l'utilisation des techniques


modernes de la RMN pour la dtermination de la structure de
molcules organiques plus ou moins complexes.

* Apprendre utiliser une stratgie pour l'attribution des spectres


Apprendre exploiter les rsultats de ces expriences sur le
plan structural.
Rsonance Magntique Nuclaire

Pourquoi tudier la RMN ?

Etudes de caractrisation Structure 3D (macromolcules)


structurale
- Protines; ADN / ARN
- Chimie des produits naturels - Polysaccharides
- Chimie de synthse

Etude de la dynamique des Recherche pharmaceutique


systmes - Relation structure / activit
- Cintique de raction
- tude des quilibres Mdecine
chimiques ou structuraux - Imagerie par
Rsonance Magntique.
Etc...
Rsonance Magntique Nuclaire

1- INTRODUCTION

La RMN correspond un ensemble de techniques bases


sur labsorption rsonante dune radiofrquence (100MHz -
1GHz) par des noyaux possdant un spin nuclaire (1H, 13C, 15N,

19F, 31P), plongs dans un champ magntique statique trs


intense.
Rsonance Magntique Nuclaire
Rsonance Magntique Nuclaire

2- SCHEMA GENERAL DUNE EXPERIENCE RMN

Lchantillon est plac dans


un champ magntique
statique intense (B0). Les
molcules sont soumises un
champ magntique appliqu
(B1) qui provoque une
perturbation des atomes
considrs.
Rsonance Magntique Nuclaire

2- SCHEMA GENERAL DUNE EXPERIENCE RMN

Lapplication de ce champ de
(RF) choisie (impulsion) est
de courte dure (qqs ms). Les
noyaux gnrent leur tour
un micro-champ magntique
qui sera capt par une bobine
rceptrice, cest le signal
R.M.N. (Donnes).
Rsonance Magntique Nuclaire

2- SCHEMA GENERAL DUNE EXPERIENCE RMN

Ces donnes sont envoyes


un ordinateur o elles sont
analyses et transformes en
signal. Le traitement
mathmatique (ou TF),
permet de transformer le
signal en spectre R.M.N.
Dconvoluer le FID
Rsonance Magntique Nuclaire

3- PRINCIPE DE BASE

Magntique : chantillon soumis l'action de deux champs


magntiques perpendiculaires :

- L'un intense et fixe (B0)


- L'autre 10000 fois plus
faible et variable (B1).

B1 est produit par une


source de radiation EM
B1
(radiofrquences), il
oscille dans un plan
perpendiculaire au champ B0
Rsonance Magntique Nuclaire

Nuclaire : Absorption par certains noyaux de


frquences de l'onde porteuse du champ
oscillant (B1).

Noyaux possdant un moment magntique m

Pour faire la RMN, le moment doit tre non nul..


Proprits magntiques des noyaux

Le spin dune particule



- Associe au moment cintique L I
- Cest une grandeur quantique

L I
m = moment magntique
= rapport gyromagntique

- Vritable micro-boussole qui soriente


dans un champ magntique
Proprits magntiques des noyaux

Le spin dun noyau A


Z X
- I (spin) dpend de la composition du noyau :
Z (e=p) et A (p+n)

- A et Z pairs : I = 0 (m = 0 )

- A pair, Z impair : I = x
m0
Spin nuclaire I - A impair : I = x/2
Proprits magntiques des noyaux

Tous les noyaux avec I 0 donc m 0

proprit magntique

donc peut tre tudi en RMN

Abondance
- Les noyaux les Noyau (radian.T-1.s-1) naturelle
(%)
plus utiliss en
1H 26,75 99,98
RMN sont ceux
13C 6,73 1,10
pour lesquels :
19F 25,18 100
I = 1/2 15N -2,71 0,37
31P 10,84 100
Proprits magntiques des noyaux
Interaction spin champ magntique B0

- Si un noyau de spin non nul est soumis un champ


magntique

L'interaction entre B0 et m modifie


l'nergie du noyaux


E .B0 - .B0 cos z.B0 I.B0
E = - .m.B0

m = nombre quantique magntique d'un noyau


de spin gal I
Interaction spin champ magntique B0

mz : ne peut prendre que m = 2I + 1 valeurs,


quantification lie aux valeurs (m), de la projection

du vecteur spin sur Oz.

Soit (en units h/2) : m = -I, -I+1, , +I-1, +I

En consquence, lors de linteraction, E ne peut

prendre que 2I + 1 valeurs.

E .B I.B
z 0 0 E = - .m.B0
Interaction spin champ magntique B0

Cas du noyau d'hydrogne (proton) : I = 1/2


m = + 1/2 et m = - 1/2 (nots usuellement ( et )
Interaction spin champ magntique B0

- Si B0 = 0, les spins sont dgnrs


Interaction spin champ magntique B0

Deux populations de noyaux apparaissent (2I+1=2


orientations possibles pour 1H)

- Si B0 0, il y a leve de dgnrescence
Interaction spin champ magntique B0
Population de noyaux (I=1/2) dans un champ magntique B0
(Loi de Boltzman)

B0 1 B
E
E 1 B
0

2
02
E B
EN
.B 0
0

E 1 B
0
2
E 1 B
0
2 N/N

N/N
Interaction spin champ magntique B0
Interaction spin champ magntique B0

- Seul le lger excs de la population E est responsable


du signal RMN.

- L'augmentation de B0 accrot l'cart entre les deux


populations et donc la sensibilit.
La condition de rsonance

- Cette condition est remplie si on apporte une radiation

EM d'nergie E' = htelle que :

HB0
E' h E HB0
2
Relation de Larmor

Soit = 400.195 MHz pour des 1H sous un champ de 9.4 T


et = 100.685 MHz pour des 13C sous un champ de 9.4 T

H C H C 4
La condition de rsonance

Cette radiation est apporte par un champ de RF B1

engendre par un courant variable la mme

frquence (antenne place auprs de l'chantillon).

Si B1 est suffisamment puissant, on cre une cohrence

observable par dtection de la composante dans le plan (x,y).


RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier


L'tat du systme de spins aprs une impulsion de RF B1
avec une phase selon l'axe x (/2)x ou (90)x est donc :
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

La priode de prcession libre est accompagne d'un


phnomne de relaxation

Elle retourne l'tat initial (Mz) avec une certaine


vitesse selon deux mcanismes :
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

1- Le retour de la magntisation longitudinale Mz la valeur


d'quilibre Mo suit une cintique du 1er ordre dont la
constante de temps T1

- C'est la relaxation longitudinale (spin-rseau)


dont la vitesse est 1/T1 (T1 (s))

La fonction dcrivant la
rapparition de Mz dans le
temps est du type :
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

2- La disparition de la magntisation transversale Mxy allant


vers 0) suit une cintique du 1er ordre dont la constante de
temps T2

- C'est la relaxation transversale (spin-spin) dont


la vitesse est 1/T2

La fonction dcrivant la
rapparition de Mxy dans
le temps est du type :
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

On peut la dcomposer maintenant comme la somme


de deux projections selon les axes x et y

My = M0cos(t)
Mx = M0sin(t)

On dit que MX est


module en Cos[t]

et My est module en Mxy
Sin[t]
Quand Mxy tourne, on peut voir facilement que les
deux composantes Mx et My vont avoir des intensits
et des directions diffrentes.
Si on observe les variations de la composante Mx on peut
voir qu'elle a une variation rectiligne sinusodale.
Observons le dplacement de Mx sur un graphe en fonction
du temps.
Bien entendu, la mme observation pour la composante My.
Sa variation est galement une variation rectiligne sinusodale.
Si on regarde le phnomne vu de haut selon l'axe vertical z,
on peut examiner l'extrmit du vecteur Mxy.lors du retour
du vecteur M vers la verticale,
cette extrmit
du vecteur Mxy
va dcrire une
trajectoire en
colimaon.
Ainsi, dans le plan xy, l'extrmit du vecteur Mxy
dcrit une trajectoire en colimaon
On peut d'imaginer que les composantes Mx et My de Mxy
vont avoir une variation rectiligne sinusodale dcroissante.
Cette variation apparat nettement si l'on porte l'intensit
de ce champ Mx
en fonction du temps.

Bien entendu, ce que


l'on observe pour
Mx est galement
observ pour
la composante My.
On observe donc une dcroissance libre de l'induction Mxy
travers ses deux composantes Mx et My.

Pour enregistrer ce "F.I.D.", il suffit de placer un solnode


sur l'axe des y pour l'induction Mx (va agir comme
rcepteur). En ce qui concerne l'induction My,
on utilisera le solnode
prcdemment mis
en place pour crer le
champ tournant B1
(agira en metteur-
rcepteur...
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

Ce que dtecte l'antenne de la sonde RMN durant la


priode de prcession libre : The Free Induction Decay

Le courant lectrique induit par la prcession libre de


l'aimantation cohrente, aprs une impulsion de RF B1 (/2)
ou 90, est proportionnel au flux (ou plutt la variation de
ce flux dans le temps) de l'aimantation dans la surface de
l'antenne.
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

Ce flux met en jeu dans


(x,y) seulement la
composante Mxy de
l'aimantation. Il faut
placer l'antenne le plus
prs possible de
l'chantillon avec une
forme la plus favorable
(en "selle de cheval")
pour capter le flux maximum.
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

Avantage de la mthode par impulsions de champ r.f. et TF

Accumulation de signaux en rptant n fois lexprience, prs


que l'aimantation soit revenue l'quilibre
Description simple de l'volution de
l'aimantation macroscopique

Cette F.I.D. est amplifie, dmodule, pour ne garder


qu'un domaine o la frquence est mesurable, numrise durant
l'acquisition, et stocke en mmoire sous forme d'un fichier de
donnes {temps, amplitude}.

La T.F permet le passage de ce signal un signal {frquence,


amplitude} donnant le spectre.
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

Exprience RMN 1D
RMN par impulsions de champ radio frquence et
transforme de Fourier

La squence devient donc :


Obtention dun spectre RMN

Techniques
Spectromtrie balayage ( onde continue)
- radiofrquence fixe
- induction magntique variable
- mthode ancienne

Spectromtrie T.Fourier ( onde pulse)


- radiofrquence variable excitant tous les noyaux
- induction magntique fixe
- rsolution du signal complexe par TF
- mthode moderne
Obtention dun spectre RMN
Obtention dun spectre RMN RMN onde continue

- Irradiation de lchantillon avec une radiofrquence fixe.

- Par balayage avec une induction magntique variable,


les diffrents noyaux sont excits successivement et les
pics de rsonance acquis squentiellement.
Obtention dun spectre RMN RMN onde pulse

- Champ magntique externe constant et intense (4,7-19 T).

- Une impulsion trs courte (<10 ms) de toutes les


radiofrquences est applique lchantillon.

Excitation simultane de tous les noyaux en mme temps

- La relaxation de tous les noyaux excits vers ltat


fondamental (< 10 s) donne un seul signal contenant toute
linformation sur les frquences de rsonance.

- La transforme de Fourier conduit au spectre.


Appareillage R.M.N.

- Un aimant l'origine du champ Bo

- Un metteur-rcepteur de radiofrquences RF

- Un ordinateur

- Une table traante


Appareillage R.M.N.
Appareillage R.M.N.
Appareillage R.M.N.
Appareillage R.M.N.
Dconvoluer le FID

Reste voir maintenant pourquoi on a plusieurs frquences pour


une molcule un peu complexe...et interprter les rsultats...
Dplacement chimique

Au sein dune molcule, le noyau de chaque atome se


trouve dans un environnement diffrent des autres.

Les lectrons des liaisons crent un faible champ


magntique de sens oppos linduction principale.

L'cran magntique engendr est appel blindage

La valeur de linduction est donc diffrente pour chaque


atome, ce qui induit des dcalages de frquence de
rsonance caractristique de chaque atome impliqu
dans une liaison.
Dplacement chimique

Tous les protons ont le mme , mais cause de la


variation de la densit lectronique qui les entoure
(effet d'cran), ils ne sont pas tous soumis au mme
champ magntique.
Dplacement chimique

Un noyau non isol subit un champ effectif (Beff) :

- qui lui est propre

- qui dpend de son environnement magntique

- qui induit une frquence de rsonance qui lui est propre


Dplacement chimique

- Pour dfinir la position du signal de rsonance dun


proton ou dun groupes de protons isochrones, on

utilise le dplacement chimique qui sexprime en ppm:


Dplacement chimique
Dplacement chimique
Dplacement chimique
Dplacement chimique

p =effets msomres

Groupe msomre accepteur rduire densit


lectronique du proton rsonant augmente

Groupe msomre donneur : Cest linverse


Dplacement chimique
Dplacement chimique
Dplacement chimique

Annulene
Dplacement chimique

Changement de solvant
glissements de

Variations trs utiles pour


les interprtations spectrales
Dplacement chimique

- Les noyaux dune mme molcule ayant mme sont dits


isochrones ou quivalents.
Dplacement chimique
Dplacement chimique

- Les noyaux de lev (noyaux blinds) apparaissent


champ fort et ceux de petit (noyaux dblinds) apparaissent
champ faible.
Dplacement chimique

Ce quil faut retenir


Calcul empirique des dplacements chimiques

Retrouver, par le calcul, les dplacements chimiques des


protons de certains groupements

Cas des enchanements saturs - Rgle de Shoolery

H du groupe mthylne dans les jonctions:

ppm(CH2) = 0,23 + X + Y CH4 = 0,23 ppm

CH2 = 0,23 + 1,83 + 3,01 = 5,07 ppm


Observ : 5,10 ppm
Calcul empirique des dplacements chimiques

Cas des enchanements insaturs - Rgle de Tobey,Pascual,


Meyer et Simon

Dtermination approche de pour H de type =C-H

= 5,28 + gem + cis + trans

H1 = 5,28 + 0,56 = 5,84 ppm


Observ: 5,82 ppm
H2 = 5,28 + 0,84 = 6,12 ppm
Observ: 6,14 ppm
H3 = 5,28 + 1,15 = 6,43 ppm
Observ: 6,42 ppm
Calcul empirique des dplacements chimiques

Cas des hydrognes benzniques

Calcul donn par la relation :


H 7,27 i
i

H1 = 7,27 + 0,74 = 8,01 ppm

Observ : 8,03 ppm


H2 = 7,27 + 0,07 = 7,34 ppm
Observ : 7,42 ppm
H3 = 7,27 + 0,20 = 7,47 ppm
Observ: 7,53 ppm
Les couplages J homonuclaires H-H

Couplage spin-spin :

- Proprit fondamentale de la RMN


- Rsulte dune interaction entre 2 noyaux A et X
non isochrones.
Les couplages J homonuclaires H-H

Couplage spin-spin :

- La raie de rsonance est alors ddouble.


- Lcart entre les deux raies (hertz) est appel
constante de couplage JAX.

- La situation tant rciproque pour X.


Les couplages J homonuclaires H-H

Classification des couplages spin-spin


Les couplages J homonuclaires H-H
Les multiplets

Systme AXn (spins ) :


(Triangle de pascal) (n+1)
Les multiplets
Analyse des spectres de RMN

1) Intgration :
nombre de protons quivalents

2) Dplacement chimique () :
environnement

3) Multiplicit :
nombre de protons voisins

4) Constantes de couplage (J) :


informations structurales
Analyse des spectres de RMN

Degr dinsaturation dune molcule

- permet de connaitre le nombre d'insaturation = le

nombre de liaisons ou de cycle prsents dans une


molcule.
Ni = (2nC+2 nH + nN nX)/2
Avec:
nC : nombre datomes de carbone
nH : nombre dhydrogne
nN : nombre datome dazote
nX : nombre datome dhalogne
Analyse des spectres de RMN
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