D6tection colorim6trique des moisissures
allergisantes de I'habitat domestique
F.M. KNIEST *
RESUME
Les allerg~nes produits par les moisissures peuvent induire
des r6actions allergiques cutandes positives chez 10
30 % de la population. La croissance des moisissures dans
les habitations et l'excr6tion d'exo-enzymes dans la pous-
sibre domestique est un ph6nombne normal. Le d6veloppe-
ment d'un test de d6tection simple et rapide destin6 5
d6terminer la quantit6 d'allerg~nes des moisissures domes-
tiques est souhaitable. La production d'enzymes telles que
celles qui sont mesur~es avec les bandes APIZYM paraR
pouvoir Otre utilis6e. Cette production est comparde h la
croissance des moisissures ~ l'aide de tests de laboratoire
utilisant une moisissure domestique x6rophile tr6s fr6quente.
Aspergillus repens. Dans un milieu de culture compos~ de
r6sidus de rasage (squames 6pidermiques et poils de barbe)
on a pu observer un accroissement de trois phosphatases,
de deux est~rases et de N-acetyl-Mta-glucosaminidase. Une
~tude avec d'autres milieux nutritifs naturels, testant d'au-
tres moisissures xdrophiles sera effectu6e ult~rieurement.
Le r61e d e c e r t a i n e s m o i s i s s u r e s e n t a n t q u e
pneumallerg~nes, est actuellement parfaitement
6 t a b l i [10]. La c o n n a i s s a n c e d e l ' a l l e r g i e a u x
m o i s i s s u r e s e s t a n c i e n n e . E n 1873 d6jh, B l a c k l e y
[4] d a n s u n e a u t o - o b s e r v a t i o n a v a i t m o n t r 6 q u e
l'inhalation de spores de moisissures pouvait
provoquer des accbs de rhume des loins. En
1924, S t o r m V a n L e e u w e e n [14] c o n s i d 6 r e q u e
la m o i t i 6 d e s p a t i e n t s a s t h m a t i q u e s p r 6 s e n t e
u n e h y p e r s e n s i b i l i t 6 a u x s p o r e s de m o i s i s s u r e s .
Les a l l e r g b n e s i n c r i m i n d s s o n t p r 6 s e n t s d a n s
les s p o r e s d e m o i s i s s u r e s a i n s i q u e d a n s le m y -
c e l i u m o u d a n s le s u b s t r a t d e c r o i s s a n c e . 39 p.
cent seulement des moisissures signaldes dans
le m i l i e u d o m e s t i q u e o n t 6t6 t e s t 6 e s q u a n t
* L a b o r a t o i r e d ' E c t o p a r a s i t o l o g i e et Milieu de l'habitation, Groupe
de Travail <~Maison et Sant6 ~, Universit6 de l ' E t a t . Catharijnesingel
101, 3511 GV UTRECHT (Pays-Bas).
Tir~s ~ part : D. F.M. Kniest, a d r e s s e ci-dessus.
Conference pr6sent~e aux Journ~es Nationales de la Soci6t~ Fran-
~alse d'Allergolog~le, S t r a s b o u r g , 27-28 m a i 1988.
SUMMARY
Colorimetric detection of allergenic fungi in the indoor
environment. - - The allergens, produced by the fungi, can
induce allergic skin-problems in 10-30 p. cent of the popu-
lation. Fungal growth in dwellings and linked excretion of
exo-enzymes is a normal phenomenon in house-dust. The
development of a simple and quick test to measure the
quantity of fungal allergens in house dust seems necessary.
The enzyme production, as measured by the APIZYM me-
thod, seems a useful base. In laboratory test, growth of
a very common xerophilic fungus Aspergillus repens, is
related to measure enzyme production. An increase of three
phosphatases, two esterases and N-acetyl-beta-glucosamini-
dase could be found on a growth medium of human dander
and beard hairs. Experiments with other natural growth
media and with other common xerophilic fungi are planned
in the near future.
l e u r p o t e n t i e l a l l e r g 6 n i q u e [6]. Les t e s t s c u t a -
n~s r6alis~s a v e c ces m o i s i s s u r e s c h e z d e s pa-
t i e n t s s e n s i b i l i s ~ s s o n t p o s i t i f s d a n s 10 h 32 p.
c e n t d e s c a s [6]. D ' a u t r e s r e c h e r c h e s a c t u e l l e -
m e n t p o u r s u i v i e s v o n t 6 g a l e m e n t d a n s ce s e n s
[8, 12, 131.
Les m o i s i s s u r e s a l l e r g d n i q u e s s o n t c a p a b l e s
d ' i n d u i r e la p r o d u c t i o n d ' a n t i c o r p s c h e z l ' h o m -
m e [11]. Un p a t i e n t a l l e r g i q u e a u x m o i s i s s u r e s
n'aura aucun sympt6me lors d'un s6jour dans un
e n d r o i t d 6 p o u r v u d e s p o r e s d e m o i s i s s u r e s . Des
s y m p t 6 m e s li6s h l ' h y p e r r 6 a c t i v i t 6 b r o n c h i q u e
r e s t e n t c e p e n d a n t p o s s i b l e s . II p o u r r a i t y a v o i r
u n e r e l a t i o n e n t r e la c r o i s s a n c e d e s m o i s i s s u r e s
et la p r o d u c t i o n d e s a l l e r g ~ n e s .
La croissance des moisissures est un probl~-
m e m o n d i a l . Les h a b i t a t i o n s m o d e r n e s en Eu-
I KNIEST F.M. -- D6tection colorim~trique des rnoisissures I
allergisantes de I'habitat domestique. Rev. fr. allergoh, 1988, [
28 (2), 139-142. [
140
r o p e occidentale c o n t i e n n e n t u n tr~s grand
n o m b r e de biotopes propices aux moisissures
tels que les p a p i e r s peints, les peintures, les
~nimaux d o m e s t i q u e s et les plantes, les d4chets
nutritifs de t o u t e sorte [7].
Les aIlerghnes p r o d u i t s p a r les moisissures
sont une p a r t des n o m b r e u s e s causes ~bioti-
ques ,, des affections respiratoires. Une des
possibilit4s p e r m e t t a n t de r4soudre les pro-
blhmes d'allergie aux moisissures est d ' a b a i s s e r
le niveau de ces allerghnes dans l'environne-
m e n t domestique, et dans la poussihre de mai-
son. Or, la d 4 t e r m i n a t i o n du niveau des aller-
g~nes des m o i s i s s u r e s est non s e u l e m e n t coh-
teuse, mais encore difficilement praticable. Ainsi
les analyses utilisant l'inhibition du RAST, qui
p e u v e n t d o n n e r u n e indication sur la concentra-
tion des allerg6nes ne sont r4alisables qu'avec
l'aide d'un l a b o r a t o i r e sp4cialis4. I1 p a r a l t oppor-
tun, et m 4 m e n4cessaire, de r e c h e r c h e r une m4-
t h o d e simple et aisdment applicable p a r le pra-
ticien, p e r m e t t a n t de contr61er rdgulihrement le
niveau des allerg~nes de moisissures dans l'envi-
r o n n e m e n t du patient.
La croissance des m o i s i s s u r e s p e u t 4tre raise
en r a p p o r t avec la quantit4 d ' e n z y m e s exogbnes
secrdt4es dans le milieu de croissance. Les en-
zymes, excrdtdes 5 l'ext4rieur du m y c e l i u m se
r e t r o u v e n t darts la poussihre de maison.
Le b u t de cette 4rude est de r e c h e r c h e r s'il
existe une relation entre l ' a u g m e n t a t i o n des exo-
enzymes dans u n milieu nutritif et la croissance
des m o i s i s s u r e s x4rophiles dans ce milieu. Cette
relation c o n s t i t u e r a la b a s e de d d v e l o p p e m e n t
d ' u n test de d4tection d'une activit4 fongique.
Ce test p o u r r a i t alors p e r m e t t r e de d 4 t e r m i n e r
l ' i m p o r t a n c e des allergbnes de m o i s i s s u r e pro-
duits dans un e n d r o i t d4termin4, puis de v4rifier
la rdduction de ces allergbnes aprhs application
de m e s u r e s d'dviction.
MATERIEL ET M E T H O D E S
Un m~lange de s q u a m e s 4 p i d e r m i q u e s et de
poils est pr41evd avec u n a p p a r e i l de rasage (mar-
q u e : B r a u n micron, R4p. F4d. d'Allemagne). Du-
r a n t 72 h e u r e s on expose u n tiers de ce mat4riel
aux U.V.-C de q u a t r e l a m p e s germicides de 15
Watts (253,7 n m ) (TUV-lampe germicide, Philips,
Eindhoven, Pays-Bas) plac6es 5 10 c m du sub-
strat. Les particules sont 4tal6es et agit4es trois
lois p a r j o u r p o u r a s s u r e r leur exposition totale.
L ' a u t r e p a t t i e du matdriel n ' e s t pas irradi6e.
Sur des milieux de Czapek on r4alise une cul-
t u r e d'AspergiItus repens. On y d4pose deux ml
d ' u n e solution de T w e e n 80 (0,02 %) a v a n t de
secouer f e r m e m e n t et soigneusement. On obtient
• F.M. KNIEST/
ainsi une s u s p e n s i o n de 100000 s p o r e s / m l au
m i n i m u m . De cette s u s p e n s i o n on pr41hve 0,1 ml
p o u r le m41anger ~ 50 m g de s u b s t r a t irradi4
(<< Test UV >,). P o u r l ' e x p f r i e n c e cinq suspensions
de spores sont n4cessaires.
Dans cinq boltes de Petri st6riles p a r t i e l l e m e n t
remplies de plMre (CaSO ; Beamix, Pays-Bas) on
place un filtre st4rile, humidifi4 ~ l'aide de 3 m l
d'eau distill4e st4rile. La suspension (mat4riel
trait4) est divis4e en 5 parties d4.pos4es en cercle
sur le filtre de chaque boite de P4tri. Celui-ci
p e r m e t d'4viter le d e s s b c h e m e n t du mat6riel
trait4. Les boites sont ensuite scellfes et conser-
vdes 5 20 °C et 75 p. cent d ' h u m i d i t 6 relative.
Aprbs 0 heure, 36 heures, 7 jours, 2 semaines
et 4 semaines, on c o m p t e les spores en re-suspen-
d a n t t o t a l e m e n t les cinq parties assembl6es d'une
boite de P4tri dans 5 ml d ' e a u distill4e st4rile
ensuite plac4e dans un h 4 m o c y t o m ~ t r e . On y d4-
n o m b r e 25 cases de 1/16 m m 2 (le n o m b r e de
spores observ6 sera multipli6 p a r 32000 p o u r
o b t e n i r le n o m b r e de s p o r e / m l ) .
Pour la d 4 t e r m i n a t i o n Apizym (kit de d4tection
e n z y m a t i q u e d4velopp4 en F r a n c e ; Api S y s t e m
S.A., Montalieu Vercieu, France), on ajoute 5 m l
d'eau distillfe st4rile /~ la suspension restante.
De ce liquide on p i p e t t e chaque lois 65 micro-
litres dans chacun des 20 m i c r o t u b u l e s du kit
Apizym, lequel est m a i n t e n u p e n d a n t trois h e u r e s
37 °C. On ajoute ensuite deux gouttes de zymA
et de z y m B r e s p e c t i v e m e n t p o u r chaque micro-
tubule afin de p r o d u i r e la rdaction. Apr~s dix mi-
nutes, on 4limine la couleur j a u n e interf4rante
du r4actif z y m B au m o y e n d ' u n r a y o n n e m e n t
sous l a m p e de 1 000 w a t t s ( L a m p e haloghne E 9 ;
Philips, Eindhoven, Pays-Bas) d u r a n t une minute.
La r4action colorim4trique r4siduelle du test
Apizym ( z y m o g r a m m e ) rdvhle la quantit4 d'en-
zymes prdsentes dans le m41ange de s q u a m e s
avant, et p e n d a n t la croissance de la m o i s i s s u r e
Aspergillus repens. I1 est possible de d 4 m o n t r e r
la pr4sence de 19 enzymes diff4rentes: trois
p h o s p h a t a s e s , trois esterases, huit glucosidases
et cinq prot4ases. On d 4 t e r m i n e l'intensit4 (0, 1,
2, 3, 4, 5) 5 l'aide d ' u n e 6chelle colorim6trique.
On p e u t ainsi d d t e r m i n e r Ia quantit4 d'enzymes
d6tect~es c o r r e s p o n d a n t ~ la quantit4 de s u b s t r a t
hydrolys4 en n a n o m o l e s p o u v a n t s'41ever a 0, 5,
10, 20, 30 et > 40 nanomoles. Une e r r e u r de 20 p.
cent est admise.
De cette mani~re, deux s4ries t4moins (sans en-
s e m e n c e m e n t de moisissures) ont 4t4 t e s t d e s :
l'une c o r r e s p o n d a n t 5 50 m g de s q u a m e s non ir-
radi4s aux U.V.-C (~ T6moin },) et l ' a u t r e corres-
p o n d a n t g 50 m g de s q u a m e s irradi4s (<~ T6moin-
UV ,,). P o u r chaque s4rie, on ajoute au matdriel
0,1 ml de solution T w e e n 80 (0,02 %) 5 la place
d'une suspension de spores fongiques. L'exp4-
rience est men4e en duplicata.
Rev. ft. Allergol., 1988, 28. 2.
/DETECTION COLORIMETRIQUE DES MOISISSURES ALLERGISANTES • 141

TABLEAU I. - - Z y m o g r a m m e s (en unit6s) du milieu de r,~sidu
de rasage (squames ~pidermlques/poils de barbe) non lrradi~
aux UV-C et non inocul6 avee des spores de moisissures (t6moin)
durant une p6rlode d'incubation de quatre semaines (25 oC ; > 75 96
humidit6 relative). Apr~s quatre semaines une sporulation
d'Aspergillus niger et Penicillium sp est observ~e.
TABLEAU II. - - Z y m a g r a m m e s (en unit~s) du milieu de rdsidu
de rasage (squames ~pidermiques/pails de bathe) irradi6 aux UV-C
et non inoeul6 avcc des spares de moisissures (t6rnoin UV)
durant une p~rlode d'incubatian de quatre semaines (25 oC ;
> 75 % humldit6 relative). Apr~s quatre semaines aucune sporulation
de moisissures ne se produit.

Non4 de l'enzyme Pdriode d'incubation Non4 de l'enzyme Pdriode d'incubation

(nurn~ra Apizym) 0 h 36 h 1 sen4. 2 sere. 4 sen4. (num6ro Apizym) 0 h 36 h 1 sere. 2 sent. 4 sere.

Phosphatase alcaline 1 2 1 2 3 Phosphatase alcaline 0 0,5 0,5 0,5 0,5

(no 2) (n ° 2)
Phosphatase acide 5 4 5 5 5 Phosphatase acide i 1 0,5 0,75 0,5
(n ° 11) (n ° 11)
Phosphoamidase 2 3 3.5 5 5 Phosphoamidase 1 1 1 1 0.5
(n ° 12) (ri° 12)
Estdrase C4 0 0 1 1,5 5 Est6rase C4 0 0 0 0,25 1
(n ° 3) (no 3)
Est6rase/lipase C8 0.5 1 1 1,5 3 Estdrase/lipase C8 0,5 0,5 1 1 1
(n ° 4) (nO 4)
N-ac~tyl-b~ta- 0.5 0.75 2 3 4 N-ac~tyl-b~ta- 0 0 0 0 0
glucasaminidase glucosaminidase
(n° 18) (n ° 18)

RESULTATS TABLEAU III. - - Z y m a g r a m m e s (en tmit~s) du milieu de r~sidu

de rasage (squames ~pidermiques/poils de barbe) irradi6 aux LW-C
et inocul~ avec des spores de moisissure Aspergillus repens
(Test UV *) durant une p~riade d'incubation de quatre semaines
T a n t la solution stdrile T w e e n 80 que l'eau std- (25 ~C; > 75 % humidit6 relative). Apr~s quatre seinatnes,
rile utilisde m o n t r e n t une activit6 e n z y m a t i q u e une sporulation d'Aspergillus repens se produit n e t t e m e m .

de m o i s i s s u r e s trbs limit6e.
Le milieu de s q u a m e s 6 p i d e r m i q u e s et poils Nora de l'enzyme Pdriode d'incubation
de b a r b e non irradi4 (~ T6moin ,,) contient un (num6ro Apizym) 0 h 36 h 1 sere. 2 sere. 4 sere.
tr~s g r a n d n o m b r e de spores viables, le n o m b r e
en ddbut d'expdrience 6tant estim6 h m o i n s de Phosphatase alcaline 0,63 0 0,25 1,25 3
32 000 spores p a r ml. Aprhs une s e m a i n e d'incu- (no 2)
Phosphatase acide 0 0 3,5 4,25 4,5
bation, le s u b s t r a t nutritif est couvert d'un g r a n d (n ° n )
n o m b r e de diff4rentes m o i s i s s u r e s des genres Phosphoamidase 0,5 1,25 3,25 4 4,25
Aspergillus sp et Penicillium sp. Le n o m b r e de (n ° 12)
Est¢rase C4 0,13 0 3,5 2,75 3
spores est estim6 h 7,2 × l06 p a r ml. Parall61e- (n ° 3)
merit, on o b s e r v e une a u g m e n t a t i o n de l'activit6 Estdrase/lipase C8 0,25 0,25 0 1 l
e n z y m a t i q u e (tableau I). (n ° 4)
N-ac6tyl-bOta- 0 0 0,25 0,88 0,75
Le milieu t6moin irradi~ ( , T6moin UV ,,) ne glucosaminidase
(n ° 18)
pr6sente p a r contre aucune s p o r u l a t i o n de moi-
sissure, m ~ m e aprbs q u a t r e semaines d'incuba- * Corrig6 par l'activit6 enzymatique du tdmoin (tdmoin UV) pour
tion. On r e t r o u v e tout au plus, u n m y c e l i u m std- exactement cerner l'effet de l'Aspergillus repens.
rile h peine p e r c e p t i b l e h l'ceil nu. Le h o m b r e de
spores comptdes fi l ' h e m o c y t o m ~ t r e ainsi que
l'activit6 e n z y m a t i q u e sont p e u modifides (ta-
Parallblement ~ cette croissance d'Aspergillus
b l e a u II).
repens, on observe une nette 61dvation de l'acti-
Les dchantillons s q u a m e s 6 p i d e r m i q u e s et polls vit6 des six e n z y m e s : p h o s p h a t a s e s alcaline et
de b a r b e irradi~s, inoculds avec des spores de acide, p h o s p h o a m i d a s e , esterase C4, lipase/este-
moisissures Aspergillus repens (Test UV) mort- rase C8 et N.acetyl-beta-glucosaminidase (ta-
t r e n t au t e m p s z6ro une quantitd de spores de bleau I I I ) .
22,4 X 104 p a r ml. Apr~s 36 heures, le n o m b r e
de spores est diminu6, se chiffrant ~ 32 X 103
(du fait de la germination). I1 s'~l~ve ensuite h
n o u v e a u et atteint apr~s q u a t r e semaines j u s q u ' g DISCUSSION ET CONCLUSION
cinq fois la quantit6 initiale. Apr~s deux semaines
d'incubation, une s p o r u l a t i o n de m o i s i s s u r e appa- P a r c o m p a r a i s o n avec le tdmoin st6rile, l'expd-
ralt (il s'agit selon toute probabilit~ d'Aspergillus rience m o n t r e une nette relation entre l'augmen-
repens). Apr~s q u a t r e semaines d'incubation, la tation des six exo-enzymes p r o d u i t e s p a r Asper-
s p o r u l a t i o n d'Aspergillus repens est n e t t e m e n t vi- gillus repens et la croissance de cette moisissure.
sible. En r u e d ' o b t e n i r un test e n z y m a t i q u e l a r g e m e n t

R e v . Jr. A l l e r g o l . , 1988, 28, 2.

142 • F.M. K N I E S T /

utilisable pour la d6tection des moisissures pul- sectes (Kniest et coll. [9]). C'est pourquoi, il
vicoles, les zymogrammes d'autres moisissures parait n4cessaire d'identifier clairement les enzy-
xerophiles des genres PeniciIiiurn, Aspergitlus et mes sp6cifiques des moisissures dans l'optique
de WaIIemia s e b i d o i v e n t 6 t r e d 6 f i n i s . D a n s le d'un test de d4tection pr4cis. Les phosphatases,
m6me contexte devront 4tre test6s d'autres sub- paraissent ainsi peu adfquates comme premier
s t r a t s , a s s i m i l a b l e s ~t l a p o u s s i ~ r e d e m a i s o n , a f i n indicateur d'activit4 fongique. La combinaison
de d6tecter l'4ventuelle influence de la composi- des phosphatases et de la tr~s spfcifique N-acetyl-
tion et de la qualit6 du substrat sur la produc- beta-glucosaminidase (chitinase) semble plus ap-
tion enzymatique. propri4e.
D e p u i s p e u , il e x i s t e u n t e s t s e m i - q u a n t i t a t i f e t Cet ou ces indicateurs devront donc en pra-
indirect de d6tection de la concentration d e s al- tique ~tre spfcifiquement mis en relation avec
lerg6nes des acariens commercialis6 sous le nora des cas d'asthme induits par les moisissures. Cet
d ' A c a r e x R * . C e t e s t e s t b a s 4 s u r l a m i s e e n 6vi- indicateur devrait permettre ia d6termination
dence d'un produit d ' e x c r 6 t i o n d e s a c a r i e n s , la d'un seuil limite d'exposition. Le test pratique
g u a n i n e . I1 a 4 t 4 c o n f i r m 4 q u e l a g u a n i n e p r d s e n t e permettant de mesurer l'activit4 des moisissures
darts la poussihre de maison provenait essentiel- allergisantes dans des 6chantillons de poussi6re
lement des acariens de la poussi~re de maison de maison et d'4valuer l'effieacit4 des mesures
[5]. Contrairement h la guanine, les enzymes pr4- anti-allerg6nes n'est pas encore mis au point,
sentes darts la poussihre de maison peuvent pro- mais une importante 4tape a 4t4 franchie. D'au-
venir d'un grand nombre d'organismes autochto- tres travaux concernant ce sujet sont en cours.
n e s t e l s q u e l e s b a c t 4 r i e s , l e s a c a r i e n s e t l e s in-
Reraerciements
Je remercie le Docteur D. de Saint Georges Gridelet pour la tra-
* Werner and Mertz, Sparte Umweltmedizin, MAINZ (RFA). duction du manuserit.

REFERENCES

1. t~ischoff E., Schirmacher W. -- Farbnachweis ftir allergenhal-.
tigen Hausstaub. 1. Mitteilung. AllergoIogie, 1984, 7, 446-447.
2. Bischoff E., Schirmacher W. -- Farbnachweis fiir allergenhalti-
gen Hausstaub. 2. Mitteilung : Weitere Gesichtspunkte. AUergo-
logic, 1985, 8, 36-38.
3. Bischoff E., Schirmacher W., Schober G. -- Farbnachweis fiir
allergenhaltigen Hausstaub. 3. Mitteilung : Anwendung in der
Praxis. AlIergologie, 1985, 8, 97-99.
4. Blackley C. -- Experimental research on the causes and nature
o[ Catarrhus aestivus (hay [ever or hay asthma). Londres, Bail-
liere, TindaIl and Cox, 1873.
5. Bronswijk J.E.M.H. van. -- Guanine as a hygienic index for
allergological relevant mite infestation in mattress dust. Exp.
Appl. Aearol., 1986, 2, 231-238.
6, Bronswijk J.E.M.H. van, Bischoff E., Schirmacher W., Berrens
L., Schober G. -- A rapid house-dust allergen test : preliminary
results. J. reed. Entornol., 1986 a, 23, 217-218.
7. Bronswijk J.E.M.H. van, Rijckaert G., Lustgraaf B., van de. --
Indoor fungi, distribution and allergenicity. Acta bot. ,~eerl.,
1986 b, 35, 329-345.
8. Kersten W., Hock G.T. -- Schimmelpilz Allergic. Wien Med.
Wochenschr., 1980, 130, 275-282.
9. Kniest F.M., Bouma C., Schober G. & gronswijk J.E.M.H.
van. -- Detection of biotic contamination in mattress dust by
determining the quantity of extraceIlular phosphatase enzymes.
J. rned. Entomol. (submitted).
10. Mallea M., Charpin J. -- Moisissures. In : Charpin J., AlIergo-
logic, 2e gal. Paris, Fiammarion Medecine-Sciences, 1986.
ll. Mazar A. -- Antibodies to inhalant fungal antigens in patients
with asthma in Israel. Ann. Allergy, 1981, 47, 361.
12. Prince H.E., Morrow M.B. -- Practical approach to mold aller-
gy. West Virginia Med. J., 1962, 58, 129-135.
13. Romanski B., Taraszkiewicz W., Swiderska A. -- Asthme aux
moissisures. Etude clinique et immunologique. Rev. Jr. AlIergoI.,
1968, 8, 51-58.
14. Storm van Leeuwen W. -- I3ronchial asthma in relation to cli-
mate. Proc. Soe. Med., 1924, 17, 19.

R • •

R e v . Jr: Allergol., 1988, 28, 2.