Phosphorylation Oxydative

Licence 2 Médecine Dentaire
2022/2023
1
Objectifs
q Décrire le transfère des électrons et hydrogènes à travers les
complexes de Green
q Décrire le mécanisme d’entrée du NADH cytosolique dans la
mitochondrie à travers les navettes Malate-Aspartate et Glycérol-3-
phosphate
q Décrire la synthèse de l’ATP
q Donner le bilan énergétique de l’oxydation complète d’une
molécule de glucose
q Citer les molécules qui inhibent la phosphorylation oxydative
q Expliquer la régulation de la phosphorylation oxydative
2
• Généralités
• Les transferts d’électrons et d’hydrogènes
• Les mécanismes d’oxydo-réduction
• L’entrée du NADH cytosolique
• La synthèse d’ATP
• Bilan énergétique
• Inhibition de la phosphorylation oxydative
• Régulation de la phosphorylation oxydative
• Particularités chez les bactéries
Conclusion
3
2
• Généralités
• Bilan
4
GENERALITES 1/5
• Encore appelée Théorie chimiosmotique ,de Mitchell

→ Prix Nobel chimie 1978
• Processus → synthèse d’ATP à partir de l’énergie libérée

lors du transport d’électrons
• Provenance de + grande partie de l’ATP produit en

aérobiose de oxydation de NADH,H+ et FADH2 dans
chaîne de transport d’électrons
• Transfert e- libérés transporteurs dont E’o + négatif vers

ceux dont + positif avec transformation l’O en H2O
5
GENERALITES 2/5
• Localisation
Ø Chez les bactéries : membrane plasmique
Ø Chez les eucaryotes : crête membrane interne
mitochondriale
• Intérêt
ØOrganismes aérobies capter +++ d’énergie libre des
substrats respiratoires que les organismes anaérobies
Ø Inhibition de PO* par certains médicaments et

poisons conséquences souvent fatales
Ø Anomalies héréditaires de mitochondrie touchant

constituants de PO* Myopathie, encéphalopathie.
6
5
GENERALITES 3/5
q Structure de la mitochondrie
GENERALITES 4/5
q Sources des équivalents réducteurs
Aliments
Lipide Glucide Protéine
Digestion + Absorption
Acides gras + Glycérol Glucose Acides aminés
β oxydation Glycolyse NADH

( cytosol)
Pyruvate
Acétyl-CoA
NADH
FADH2
Cycle de Krebs Mitochondrie
2H
Phosphorylation oxydative
8
GENERALITES 5/5
q Théorie chimiosmotique de Mitchell
Ø Base de l’interprétation de la phosphorylation oxydative
Ø Transfert d’e- aux transporteurs avec l’énergie libérée

poussant protons en provenance de matrice vers l’espace inter
membranaire, créant ainsi une triple situation
§ une différence de concentration en H+ de part et d’autre de

la membrane interne, ce qui crée un champ de force
osmotique
§ une différence de potentiel de plus de 100 mV
§ une différence de pH
• Déroulement cascade de réactions d’oxydation dans l’ordre

croissant du potentiel d’oxydo-réduction des transporteurs 9
• Généralités
• Bilan
10
Les transferts d’électrons et d’hydrogènes 1/8
q Origine de l’H
Ø Substrats
o NADH ( glycolyse, cycle deKrebs)
→ Lactate, malate, isocitrate
→ Acide pyruvique, acide α-cétoglutarique
→ Déshydrogénases à coenzymes nicotiniques
o FADH2 (cycle de krebs )

→ Acide succinique
→ Succinate déshydrogénase
11
q Les transporteurs d’électrons
ØComplexes associant protéines et coenzymes
ØFonction de canal → efflux de protons
complexes de GREEN
Ø Transporteurs mobiles
ü Coenzyme Q ( CoQ) /Ubiquinone
ü Cyt C
12
Les transferts d’électrons et
d’hydrogènes 3/8
• 4 complexes de GREEN
§ Complexe I ( CoI)
Ø Action NADH CoQ réductase
Ø Récupérant e- du NADH
Ø Efflux de 4 H+ de matrice mitochondriale
à EIM
13
14
15
16
16
• Complexe III ( CoIII )
ØAction CoQH2 cytochrome C

réductase
Ø Efflux de 4 H+
17
18
§ Complexe IV ( Co IV )
ØAction Cytochrome C oxydase
ØEfflux de 2 𝐇 +
Ø Activation de l’oxygène
19
20
§ Coenzyme Q (ou ubiquinone 10)

Ø Transition entre
ü Co I et Co III
ou
ü Co II et CoIII
Ø Accepte également électrons provenant du cytosol
§ Cytochrome C
→ Transition entre Co III et Co IV
21
q Schéma de transfert d’électrons et d’hydrogène
Au t o t a l , l a C R M a 3 s i t e s d e p o m p a g e s a u n i v e a u d e C p l . I ,
I I I , IV 22
• Généralités
23
Les mécanismes d’oxydo-réduction 1/4
q Couple NAD+ /NADH, H+
vDH2 + NAD+ Déshydrogénase D + NADH + H+
v E’o= - 0,32V
q Couple FAD+/FADH2
v DH2 + Fp FpH2 + D
v E’o = -0,10 à -0,15 V
24
q Couple UQ/ UQH2 (Coenzyme Q)
UQ oxydase
vFpH2 + UQ Fp + UQH2
vE’o = 0,10 V
qCytochromes
v Enzymes ferroporphyriniques
v Passage de forme ferrique en forme ferreuse
Cyt C oxydase
v Cyt Fe3+ + 𝑒− Cyt Fe2+
25
26
Déroulement des réactions dans l’ordre croissant du

potentiel d’oxydo-réduction
• Généralités
28
La synthèse d’ATP 1/5
q ATP syntase: Complexe V
§ Rôle
Ø Pompe ionique inversée
Ø Synthèse d’ATP grâce
au passage des protons dans
sens du gradient
§ Constitution
Ø Sous-unité F0 intra-
membranaire
→ canal protonique
Ø Sous-unité F1 matricielle
→ activitéATP-synthétase
Ø Partie statique stabilisant
structure 29
§ Formation de l’ATP
ØVia canal Fo
o Retour des H+
üDifférence de pH
→Transit du Pi
ü Différence de potentiel >100mV

→ Transit de l’ADP
üEnergie nécessaire à ATP synthase créer liaison

haute énergie entre ADP et nouveau phosphate
(Pi)
30
3
0
§ Transport de l’ATP formé
Ø Présence peu intéressante de ATP formé dans matrice

mitochondriale
Ø Passage à travers le canal Fo de l’ATPsynthase

→ EIM → cytoplasme (sens inverse de ADP)
Ø Transport 30 fois plus rapide de l'ATP par rapport à

l'ADP
→ Différence de potentiel créée en partie par
gradient de protons
31
§ Schéma récapitulatif
32
q Synthèse
12/05/2015
• Généralités
34
Entrée du NADH cytosolique 1/4
• Interaction directe des molécules produites

dans matrice avec complexes protéiques de
chaîne respiratoire
• Passage via des navettes pour molécules

polaires produites dans cytosol
→ Cas de certaines molécules de NADH
35
qNavettes
Ø Rôle
üPermettre passage à travers
membrane interne à perméabilité
sélective
üPermettre au NADH de transmettre

ses électrons riches en énergie à
d’autre de molécules de transfert,
différentes selon la navette
36
• Navette malate-aspartate
ü e- riches en énergie transférés à l’oxaloacétate pour former le malate

ü Passage Malate dans matrice mitochondriale où retransmet ses électrons au NAD+ pour
reformer NADH
ü Présente: cœur, foie et reins mammifères 37
• Navette glycérol 3-phosphate
ü Transfert e- au glycérol 3-phosphate puis au FADH2

ü Présente +++ : m. squelettiques et cerveau
38
• Généralités
Ø A partir des équivalents réducteurs d’origine mitochondriale
Ø A partir du NADH d’origine cytosolique
Ø Bilan total à partir d’une molécule de glucose
39
BILAN ENERGETIQUE 1/6
qNombre d’ATP formé par NADH et FADH2

d’origine mitochondriale
v Mesure du rapport P/O
Ø chaîne depuis NADH : P/O = 3

3 sites de phosphorylation entre
ü NADH et CoQ
ü Cyt b et Cyt c
ü Cyt a-a3 et oxygène
3 ATP
4 40
0
qNombre d’ATP formé par NADH et FADH2

d’origine mitochondriale
v Depuis FADH2 : P/O = 2
2 sites de phosphorylation entre

ü FADH2 et Cyt c
ü Cyt a-a3 et Oxygène
2 ATP
4 41
1
q Nombre d’ATP formé par NADH d’origine

cytosolique ( glycolyse)
v Entrée par navette

malate/aspartate
3 ATP
v Entrée par navette glycérol-3
Phosphate 2 ATP
4 42
2
LA CHAINE RESPIRATOIRE FOURNIT LA
PLUS GRANDE PARTIE DE L’ENERGIE
EMMAGASINEE AU COURS DU
METABOLISME
4 43
3
q A partir d’une molécule de glucose
2NADH
2x3 NADH
2 FADH2
4 44
4
q A partir d’une molécule de glucose
45
• Généralités
Ø Poisons
Ø Les agents de découplage
46
INHIBITION DE LA PHOSPHORYLATION OXYDATIVE
1/5
q Poisons
üInhibent potentiel électrochimique et synthèse d’ATP
üPar complexe
oI : les barbituriques, la roténone, l'amytal, la
ptéricidine
o II : les malonates
o III : les antimycines A
oIV : le cyanure, le monoxyde de carbone , le
cobalt, les azotures
oATP synthase : le dicyclohexylcarbodiimide

(DCCD), l'oligomycine, l'atractuloside
47
2/5
qMécanisme d’action
• Blocage de NADH-déshydrogénase : Amytal , Roténone (insecticide)

• Blocage du transport des e- entre les cyt b et c : Antimycine A (ATB)
• Inhibition du cytochrome a-a3: Cyanure et monoxyde de carbone 48
3/5
qAgents de découplage
Ø Découpleur toxique: 2,4 dinitrophénol

oRetour H+ dans la matrice sans passer par
l’ATP synthase
oDéficit du gradient électrochimique

Inhibition de l’ATP synthase
oMais fonctionnement continue de la CRM
o4 complexes de transporteurs non perturbés
49
4/5
Ø Découpleur physiologique
impliquer dans inhibition de production des radicaux
libres oxygénés ( +++ H2O2)
v Acides gras ( oméga-3)
v Protéines découplantes
üProtéines de transport ionique mitochondriales

catalysant perte régulée de protons à travers
membrane interne, détournant l’énergie libre
utilisée par l’ATPsynthase
50
5
0
INHIBITION DE LA PHOSPHORYLATION OXYDATIVE 5/5
q Protéines découplantes
ØUCP-1, UCP-2, UCP-3 (UCP = Uncoupling

Protein)
Ø Energie libérée sous forme de chaleur
Ø Fonctionnement continue de la CRM
51
• Généralités
52
REGULATION DE LA PHOSPHORYLATION OXYYDATIVE 1/3
53
Ø Pendant un effort R ↓
↑ phosphorylation oxydative
v NADH
Ø En cas fonctionnement à plein régime de Cycle de
Krebs
o Grosse production de NADH → translocation +++
H+ au travers de MI
→ ↑ fonctionnement ATPsynthase
Ø Si substrats (ADP + Pi) de Co V en quantité faible

→ Activation des protéines découplantes →
neutralisation du gradient électrochimique généré 54
v Molarité de l’O2
ØAu niveau de la cytochrome oxydase, le •NO
entre en compétition avec l'oxygène
→ Inhibition réversible cytochrome oxydase
→ ↑ production d'anions superoxydes
55
• Généralités
56
PARTICULARITES CHEZ LES BACTERIES
qBactéries dont membrane plasmique
§ « oxydase + »
ØPO ≈ sensiblement même que dans mitochondries
ØPseudomonas, Vibrio...
§ « oxydase - »
ØPO + courte
ØAbsence de complexe IV (Enterobacteriaceae...)
q Certains cas (respirations anaérobies chez

bactéries)
§ Accepteur final de la chaîne respiratoire = composé
organique
§ comme du CO2
57
Conclusion
• Les différentes voies du catabolisme (glycolyse) ne
libèrent que peu d'énergie sous forme directement
utilisable par les cellules (ATP)
• Cependant, ces voies permettent d'obtenir des

substrats réduits en grande quantité
• leur ré-oxydation au niveau de la chaîne respiratoire

permet la synthèse d'ATP
58

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• Encore appelée Théorie chimiosmotique ,de Mitchell

• Processus → synthèse d’ATP à partir de l’énergie libérée

• Provenance de + grande partie de l’ATP produit en

• Transfert e- libérés transporteurs dont E’o + négatif vers

Ø Inhibition de PO* par certains médicaments et

Ø Anomalies héréditaires de mitochondrie touchant

Lipide Glucide Protéine

Acides gras + Glycérol Glucose Acides aminés

β oxydation Glycolyse NADH

Ø Base de l’interprétation de la phosphorylation oxydative

Ø Transfert d’e- aux transporteurs avec l’énergie libérée

§ une différence de concentration en H+ de part et d’autre de

• Déroulement cascade de réactions d’oxydation dans l’ordre

o FADH2 (cycle de krebs )

q Les transporteurs d’électrons

ØComplexes associant protéines et coenzymes

ØFonction de canal → efflux de protons

ü Coenzyme Q ( CoQ) /Ubiquinone

• Complexe III ( CoIII )

ØAction CoQH2 cytochrome C

§ Coenzyme Q (ou ubiquinone 10)

q Schéma de transfert d’électrons et d’hydrogène

vDH2 + NAD+ Déshydrogénase D + NADH + H+

v E’o = -0,10 à -0,15 V

Déroulement des réactions dans l’ordre croissant du

ü Différence de potentiel >100mV

üEnergie nécessaire à ATP synthase créer liaison

§ Transport de l’ATP formé

Ø Présence peu intéressante de ATP formé dans matrice

Ø Passage à travers le canal Fo de l’ATPsynthase

Ø Transport 30 fois plus rapide de l'ATP par rapport à

• Interaction directe des molécules produites

• Passage via des navettes pour molécules

üPermettre au NADH de transmettre

ü e- riches en énergie transférés à l’oxaloacétate pour former le malate

ü Transfert e- au glycérol 3-phosphate puis au FADH2

qNombre d’ATP formé par NADH et FADH2

v Mesure du rapport P/O

Ø chaîne depuis NADH : P/O = 3

qNombre d’ATP formé par NADH et FADH2

v Depuis FADH2 : P/O = 2

2 sites de phosphorylation entre

q Nombre d’ATP formé par NADH d’origine

v Entrée par navette

LA CHAINE RESPIRATOIRE FOURNIT LA

PLUS GRANDE PARTIE DE L’ENERGIE

q A partir d’une molécule de glucose

q A partir d’une molécule de glucose

oATP synthase : le dicyclohexylcarbodiimide

• Blocage de NADH-déshydrogénase : Amytal , Roténone (insecticide)

Ø Découpleur toxique: 2,4 dinitrophénol

oDéficit du gradient électrochimique

oMais fonctionnement continue de la CRM

o4 complexes de transporteurs non perturbés

üProtéines de transport ionique mitochondriales

ØUCP-1, UCP-2, UCP-3 (UCP = Uncoupling

Ø Energie libérée sous forme de chaleur

Ø Fonctionnement continue de la CRM

Ø Si substrats (ADP + Pi) de Co V en quantité faible

q Certains cas (respirations anaérobies chez

• Cependant, ces voies permettent d'obtenir des

• leur ré-oxydation au niveau de la chaîne respiratoire