SALMONELLA SEROLOGY

SÉRODIAGNOSTIC DES FIÈVRES TYPHOIDES ET PARATYPHOIDES

881169 – 2014/11

1- INTERET CLINIQUE
Les Salmonelles sont des Enterobactériacées parasites du tube digestif de l’Homme et des animaux à l’origine de
salmonelloses majeures (fièvres typhoïdes ou paratyphoïdes) ou mineures (gastro-entérites). Si la présence d’anticorps anti-
salmonelles peut faire soupçonner une infection récente, le diagnostic de certitude reste l’isolement du germe pathogène.

2- PRINCIPE
Le sérodiagnostic des fièvres typhoïdes et paratyphoïdes de Widal et Felix est une technique de détection et de titrage des
agglutinines anti-O et anti-H spécifiques par dilution des sérums de patients. L’agglutination H est rapide (2 heures) et
floconneuse à 37°C ; l’agglutination O est lente (18 heures) et granulaire à température ambiante (18-30°C). Les résultats d’un
résultat positif sont interprétés en comparant les titres des agglutinines anti-O et anti-H sur un ou plusieurs prélèvements.

Remarque :bien que les infections à Salmonella paratyphi C soient très rares en Europe, les suspensions CO et CH sont
préparées parce qu'elles permettent de dépister des infections dues à des Salmonella ayant des antigènes O et H communs
avec ce sérotype. Si les infections à Salmonella paratyphi A sont rares en France, elles sont fréquentes en Extrême-Orient et en
Afrique.

3- PRESENTATION- CONSERVATION - VALIDITE

 Présentation : 1 flacon de 50 ml.

Oznaczenie Nr kat.
Salmonella typhi Antigen O (TO) 63402
Salmonella typhi Antigen H (TH) 63312
Salmonella typhi Antigen Vi 63572
Salmonella paratyphi A Antigen O (AO) 63412
Salmonella paratyphi A Antigen H (AH) 63322
Salmonella paratyphi B Antigen O (BO) 63422
Salmonella paratyphi B Antigen H (BH) 63332
Salmonella paratyphi C Antigen O (CO) 63432
Salmonella paratyphi C Antigen H (CH) 63342
Salmonella typhimurium Antigen H (TMH) 63542
Salmonella typhimurium Antigen H (ENH) 63272

 Conservation : à + 2-8 °C.

 Validité : jusqu’à la date de péremption indiquée sur le coffret (y compris après ouverture).

4- PRECAUTIONS D'UTILISATION
La qualité des résultats est dépendante du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes :
 Avant utilisation, laisser tous les réactifs atteindre la température ambiante (+18-30°C).
 Ne pas utiliser de réactifs après la date d’expiration.
 Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l’eau distillée ou de préférence du matériel à usage unique.
 Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque échantillon.

CONSIGNES D’HYGIENE ET SÉCURITÉ :

 Porter des gants à usage unique lors de la manipulation des réactifs.
 Ne pas pipeter à la bouche.
 Considérer le matériel directement en contact avec les échantillons comme des produits contaminés.
 Eviter les éclaboussures d’échantillons ou de solution les contenant.
 Pour connaître les recommandations liées aux risques et les précautions relatives à certains produits chimiques contenus
dans ce kit, consulter le(s) pictogramme(s) figurant sur les étiquettes et les informations fournies à la fin des instructions
d'utilisation. La fiche technique de sécurité est disponible sur www.bio-rad.com.
5- ÉCHANTILLONS
1. Les tests sont effectués sur des échantillons de sérum prélevé sur tube sec uniquement.
2. Respecter les consignes suivantes pour le prélèvement, le traitement et la conservation de ces échantillons :
- Prélever un échantillon de sang selon les pratiques en usage.
- Laisser le caillot se former complètement avant centrifugation.
- Conserver les tubes fermés.
- Après centrifugation, extraire le sérum et le conserver en tube fermé.
- Les échantillons seront conservés à +2-8°C si le test est effectué dans les 24 heures.
- Si le test n’est pas effectué dans les 24 heures, ou, pour tout envoi, les échantillons seront congelés à -20°C (ou plus
froid).
- Il est conseillé de ne congeler / décongeler les échantillons qu'une fois seulement. Les échantillons devront être
soigneusement homogénéisés (vortex) après décongélation avant le test.
3. Les interférences liées à une surcharge en albumine, lipide, hémoglobine et bilirubine n'ont pas été testées.
4. Ne pas chauffer les échantillons.

6- MODE OPÉRATOIRE
А. MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI
 Eau physiologique
 Tubes à hémolyse
 Incubateur ou bain-marie
 Gants à usage unique
 Pipettes, multipipettes, automatiques ou semi-automatiques, réglables ou fixes pouvant distribuer de 10 à 1000 µl et 1, 2 et
10 ml

B. TECHNIQUE CLASSIQUE A L'ETUVE A 37°C

1. Diluer les échantillons à tester au 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 et 1/160 dans de l'eau physiologique.
2. Répartir dans une série de tubes et pour chaque suspension antigénique :
- 0,1 ml de chaque dilution de sérum
- 0,9 ml de la suspension
La dilution finale des échantillons est alors de 1/100 à 1/1600 pour chaque suspension antigénique.
3. Incuber les tubes 2 heures à l'étuve ou au bain-marie à 37°C.
4. A la fin de l’incubation, lire les tubes ayant reçu les suspensions H. L'agglutination H, floconneuse, facilement dissociable (ne
pas agiter trop brusquement les tubes) est apparente si le sérum contenait des agglutinines anti-H correspondant à l'une des
suspensions.
5. Laisser les tubes ayant reçu les suspensions O jusqu'au lendemain, soit environ 24 heures, à température ambiante (18-
30°C).
6. Le lendemain, lire les tubes ayant reçu les suspensions O. L'agglutination O est fine, granulaire, difficilement dissociable.
Faire, de préférence, la lecture au-dessus d'un miroir concave.

C. TECHNIQUE RAPIDE PAR CENTRIFUGATION

1. Faire deux dilutions des sérums à tester
- Sérum 0,2 0,1
- Eau physiologique 1,8 1,9
- Dilution obtenue 1/10 1/20
2. Préparer un portoir de 16 petits tubes à hémolyse sans collerette.

N°TUBES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Sérumau
0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
1/20
Sérumau
0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
1/10
Rajouter dans
chaque tube
TO TO TH TH AO AO AH AH BO BO BH BH CO CO CH CH
0,9 ml des
suspensions
Dilutions
1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200
terminales

3. Centrifuger 5 minutes à 3000 tours/minute pour faire sédimenter la suspension bactérienne.

4. Remettre le culot en suspension, par une chiquenaude sur le fond du tube. Si la suspension redevient homogène, le résultat
est négatif. Si des agglutinats sont facilement visibles à l'œil nu, le résultat est positif.
En présence d’une agglutination, par exemple avec les suspensions TO et TH au 1/200ème alors que tout est négatif,
recommencer l'opération avec des dilutions au 1/40ème, 1/80ème et 1/160ème du sérum à tester, afin de déterminer son titre ; ne
procéder à ce 2ème test que pour les suspensions ayant agglutiné, dans l'exemple TO et TH. Les titres finaux seront 1/400,
1/800, 1/1600.

Remarque : la morphologie des agglutinats est moins différenciée que par la méthode classique.

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7- INTERPRETATION DES RESULTATS
 Dans les fièvres typhoïdes ou paratyphoïdiques, les agglutinines anti-O apparaissent vers le 8ème jour de la maladie,
atteignent un titre moyen de 1/400 et disparaissent rapidement après la guérison clinique. Les agglutinines anti-H
apparaissent entre le 10ème et le 12ème jour, atteignent un titre moyen de 1/800 à 1/1600, baissent dans les semaines
suivants la guérison clinique et persistent des mois, voire des années à un titre moyen de 1/100 à 1/200.
 Après injection d’un vaccin TAB, il y a production d’agglutinines anti-O et anti-H à titres faibles. Les agglutinines anti-H
persistent parfois pour T, B et parfois A à des titres inférieurs à 1/200.
 Dans les fièvres typhoïdes ou paratyphoïdiques traitées précocement par un antibiotique actif, les agglutinines anti-O, qui
normalement signent la maladie, peuvent ne pas apparaître. Le diagnostic ne pourra être évoqué que par l’apparition ou
l’augmentation significative du titre des agglutinines anti-H au cours de deux prélèvements espacés de quelques jours.
Exemples :en présence d’agglutinines anti-TO, le diagnostic d'une fièvre typhoïde à S. typhi à son début peut être évoqué ;
quelques jours plus tard, la présence d’agglutinines anti-TH dans un second prélèvement signe le diagnostic.
Si, dans ce cas, une agglutinine anti-H autre qu’anti-TH est détectée, il peut s'agir d'une infection à Salmonella ayant
uniquement l'antigène O commun avec Salmonella typhi. La salmonelle la plus fréquemment rencontrée possédant ces
caractères est Salmonella enteritidis. Pour confirmer ou infirmer l’hypothèse, il est nécessaire de rechercher l'agglutination d'une
suspension H de Salmonella enteritidis.
Dans le cas où la suspension BO seule est agglutinée, il est nécessaire de rechercher l'agglutination d'une suspension H de
Salmonella typhimurium.

8- SÉRODIAGNOSTIC VI
A) SUSPENSION
La suspension antigénique Vi est préparée à partir d’une souche de S. typhi O non agglutinable, traitée à l’alcool (destruction de
l'antigène H) et stabilisée par 5 g/l de chlorure de calcium.

B) TECHNIQUE
Identique à celle de la recherche des agglutinines anti-O avec les dilutions finales au 1/10ème, 1/20ème, 1/40ème.

C) RESULTATS
Les anticorps anti-Vi apparaissent tardivement après les anticorps anti-O et anti-H. L’intérêt de leur recherche réside dans le
dépistage des porteurs sains de bacilles d'Eberth lors d'enquêtes épidémiologiques ; néanmoins, seuls l’isolement et
l’identification de S. typhipermet d'affirmer l'état de porteur.

9- PERFORMANCES / CONTROLE QUALITE DU TEST

Les performances des coffrets Salmonella Serology sont contrôlées à l’aide du coffret Antiserum Salmonella polyvalent T, A, B,
C, Vi (code 61261) Antiserum Salmonella monovalent H: i (code 60161) et Antiserum Salmonella monovalent H:g,m(code
61121) comme suit :
Diluer le sérum agglutinant en eau physiologique au 1/100ème pour la recherche d’agglutinines anti-H, au 1/50ème pour la
recherche d’agglutinines anti-O et 1/10èmepour la recherche d’agglutinines anti-Vi.
L'incubation et la lecture sont faites dans les conditions indiquées ci- dessus par la technique classique. Observer les
agglutinations correspondantes.

10- CONTROLE QUALITE DU FABRICANT

Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la
réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un
contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la
production et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant.

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