Caractérisation des indices morphometriques trabéculaires des mâchoires des rats

traités au tériparatide après exposition à l’alendronate

1
Ntep Ntep David Bienvenue*
Dr, MScD, Department of oral, maxillofacial and periodontal surgery, Faculty of Medicine and
Biomedical Sciences, Yaoundé, Cameroon,
237-694847424, ntep.david@yahoo.com ; https://orcid.org/0000-0003-0192-0127

2
Mballa Amougou Jean Claude,
Dr, MSc, Department of medical imaging of the university of Douala, Cameroon,
237- 699641901, mballa.fmsb@gmail.com

1
Bengondo Messanga Charles,
Pr, PhD, Department of oral, maxillofacial and periodontal surgery, Faculty of Medicine and
Biomedical Sciences, Yaoundé, Cameroon,
237-693494214, cbengondom@yahoo.fr
Résumé
Objectif
Il s'agissait d'analyser les effets du tériparatide sur la morphométrie trabéculaire des mâchoires
des rats exposés à l'alendronate.
Design de l’étude
Il s’agissait d’une étude préclinique de rats mâles wistar, menée sur une durée de 6 mois à
l’animalerie de la Faculté de Médecine et des Sciences biomédicale de Yaoundé.
Les rats sélectionnés ont reçu per os de l’alendronate à 0,1 mg/kg /semaine pendant 8 semaines.
A la 8ième semaine, les rats atteints d’une ostéonécrose des mâchoires de stade 2 et 3 ont été inclus
et répartis en groupes 1 et 2 (tériparatide en sous cutanée à 10 et 20 µg/kg 2 fois par semaine
pendant 8 semaines) et groupe 3 (sérum physiologique en sous cutanée). À la 16ième semaine, en
plus d'un contrôle clinique, les rats ont été sacrifiés et les mâchoires ont été insérées dans la
résine polyacrylique pour une tomodensitométrie.
Résultats : 44 rats ont été inclus et répartis aléatoirement en 3 groupes soit 30 dans le groupe 1
et 2 et 14 dans le groupe 3.
Les valeurs moyennes des indices morphometriques trabéculaires étaient globalement plus
élevées chez les rats exposés au téripartide comparativement aux indices des rats témoins. Il
y’avait une différence statistiquement significative concernant, l’épaisseur des travées(p=0,036),
le nombre moyen de trabécules (p=0,04), le diamètre des travées(p=0,031) et la densité de
connectivité entre les groupes de rats exposés au tériparatide et le groupe témoin.
Conclusion. Cette étude a montré une différence statistiquement significative de la
caractérisation de la microarchitecture trabéculaire entre les groupes de rats exposés au
tériparatide et le groupe témoin.
Introduction
Depuis que les premiers cas d'ostéonécrose de la mâchoire liée aux bisphosphonates (BRONJ)
ont été publiés en 2003,[1] il y a eu une recherche de traitements innovants à propos de cette
maladie. Cependant, Il n'y a pas d'approche standard au traitement de BRONJ car il y a un
manque de données de haute qualité pour en étayer l'efficacité.
Les options thérapeutiques vont de la prise en charge conservatrice avec des bains de bouche
antiseptiques et des antibiotiques au débridement chirurgical[2–4]. Bien que les rapports de cas
et les petites séries de cas suggèrent un bénéfice possible des traitements expérimentaux tels que
l'oxygénothérapie hyperbare, l'ozonothérapie et la vitamine E, le bénéfice n'a pas été démontré
dans les essais contrôlés randomisés[2,3].
Plusieurs rapports de cas font état de l'administration intermittente de PTH à faible dose pour le
traitement de l'ONM. Cependant, il existe peu de données factuelles concernant l'efficacité du
traitement par le tériparatide ainsi que sa posologie et sa durée optimale dans la prise en charge
de l’ONM [5–7].De plus, très peu d’études ont évaluées les effets du tériparatide sur la densité
minérale osseuse et la microarchitecture trabéculaire des mâchoires.
En raison des limites de l'étude de l’ONM et de son traitement chez l'homme et à cause des
puissants effets ostéoanaboliques du tériparatide chez le rat[7], l'utilisation de ce modèle animal
pour l'étude de l’ONM a suscité notre intérêt.
Cette étude été conçue pour évaluer les effets du tériparatide sur les indices morphometriques des
alvéoles post-extractionnelles de rats wistar exposés à une dose thérapeutique d'alendronate.
Matériels et méthodes
Il s’agissait d’une étude préclinique en simple aveugle de cohorte de rat mâles (Rattus
norvegicus albinus). L’étude s’est étalée de Mars 2022 à Aout 2022, soit une durée de 6 mois à
l’animalerie de la Faculté de Médecine et des Sciences Biomédicales de Yaoundé.
Les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité d'éthique de la Faculté
de Médecine et des Sciences Biomédicales de Yaoundé et menées selon les principes de la
méthodologie basée sur les animaux[8].
Les rats, (âge moyen de 12 semaines) et de poids corporel ≥ à 230 g ont été logés à une
température et une humidité standard et avec un cycle lumière/obscurité de 12 heures. La
nourriture et l'eau filtrée ont été livrées autant que possible. Le poids corporel a été mesuré de
façon hebdomadaire.
Conception expérimentale et procédures chirurgicales
Après 2 semaines d’acclimatation, un scanner corps entier fut réalisé au préalable à tous les rats
afin d’exclure une potentielle lésion des mâchoires. Ensuite, tous les rats ont reçu par gavage, de
l’alendronate à raison de (0,1 mg / kg) 01 fois /semaine pendant 8 semaines.
Quatre semaines après l’administration de l’alendronate, les premières molaires maxillaires et
mandibulaires gauches de chaque rat ont été extraites sous anesthésie générale (100 mg/kg de
kétamine 10 %), 8mg/kg de Diazépam et 0,4 mg/kg d’Atropine).[9,10]. L’animal était placé en
dorsal décubitus, la cavité buccale étant maintenue ouverte au moyens d'écarteurs. La dent était
retirée à l'aide d'un davier approprié et l’alvéole post-extractionnelle. Après l'intervention
chirurgicale, tous les animaux ont reçu une dose quotidienne de 25 mg/kg d'ampicilline et de
0,075 mg / kg de Tramadol pendant trois jours.
Le temps de chaque intervention chirurgicale était enregistré.
Huit semaines après l’administration d’alendronate un observateur aveugle à l’étude effectuait un
examen oral et exobuccal minutieux afin de rechercher d’éventuels signes d’une ostéonécrose
des mâchoires de stade 2 et 3 selon Ruggiero et al.,[11].
Ensuite, Les animaux inclus ont été répartis aléatoirement en trois groupes en fonction de la prise
ou non de tériparatide.
Tableau I : Répartition des rats par groupes en fonction des médicaments administrés
Groupes de rats Médicaments administrés

Groupe 1 Téripartide s/c: 10 μg/kg/ de 2 fois /

semaine de pendant 8 semaines

Groupe 2 Téripartide s/c: 20 μg/kg/ de 2 fois /

semaine de pendant 8 semaines

Groupe 3 (contrôle) Nacl 0,9% s/c : 40 ul /kg /2 fois /

semaine de pendant 8 semaines

Une semaine après la dernière injection de solution saline et de tériparatide, les rats ont été
sacrifiés en utilisant une injection IP de 200 mg/kg de kétamine (10 %).
La solution saline (0,9%) a été choisi comme témoin des plaies car il s'agit d'une solution
isotonique qui n'interfère pas avec le processus normal de cicatrisation, n'endommage pas les
 tissus, ne provoque pas de sensibilisation ou d'allergies ou ne modifie pas la flore bactérienne
normale de la peau[12].
Après l'euthanasie, les rats ont été examiné pour détecter la présence ou non d'une fistule
intrabuccale ou extrabuccale, d'une exposition osseuse et d’une fracture pathologique. Le stade
post-traitement de la maladie pour chaque rat a également été enregistré.
Puis, les mâchoires des rats sacrifiés ont été collectées, fixées dans de la résine polyacrylique.
Elles ont alors été scannées comme le montre la figure 1.

Echantillon du
maxillaire

Résine
polyacrylique

Echantillon de
mandibule Plaque de
support

Figure 1 : Dispositif mis en place pour la réalisation d'un DENTASCAN des échantillons de mâchoires
fixés dans la résine polyacrylique

Les images de projection des données brutes ont été reconstruites et analysées à l'aide du
logiciel dentascan
Une zone circulaire de taille prédéfinie (0,001 à 0,002) a été sélectionnée comme région
d'intérêt dans les images bidimensionnelles de l’alvéole post-extractionnelle de chaque rat. Le
niveau de coupes variait de 0,625 à 1 mm. Les régions trabéculaires et corticales ont été définies
avec quatre fantômes à l’aide d’un volume d’histogramme en en fixant une valeur seuil de 690
mg et 1452 mg HA\ cm3.
La densité minérale osseuse corticale et trabéculaire (DMO ; mg HA/cm 3) et les indices
morphométriques de la zone post-extractionnelle ont été mesurés par sur des coupes axiales,
coronales et sagittales.
 Pour l’os trabéculaire on utilisait :
 ROI 1 : entre la trabécule inférieure et la trabécule médiane ; ROI 2 : entre la trabécule
médiane et la trabécule supérieure ; ROI 3 : entre la trabécule supérieure et le bord crestal
de l’os mandibulaire.
 Pour l’os cortical on utilisait :
ROI 1 : correspondait à la région médiane de la corticale externe mandibulaire ; ROI 2
correspondait à la région médiane de la corticale linguale mandibulaire ; ROI 3 :
correspondait à la région médiane de la corticale basale mandibulaire.

Le résumé de cette procédure expérimentale est indiqué sur la figure ci-dessous.

Induction de L’ONM liée à l’alendronate (8 Traitement de L’ONM liée à l’alendronate (8
semaines) semaines)
1 4 8 12 16

 Stop : ALN

G1 : 10 μg/kg/2
fois / semaine de
tériparatide s/c Sacrifice

Echantillon 2 semaines
ALN par Recherche G2 : 20 μg/kg/2
de rats (12 gavage Extraction de signe 1. Observation
d’acclimata-  fois / semaine de
semaines dentaire D’ONM de tériparatide s/c 2. Dentascan
tion stade 2 et 3
d’âge)  G3 : : ss 40 ul
/kg/2 fois /
 semaine s/c

Figure 2 : Résumé de la procédure expérimentale de traitement de l’ONM liée à l'alendronate

SS : sérum salée ; ALN : alendronate;

Analyse statistique des données

Les tests de Friedman, d’ANOVA à sens unique ont été utilisés pour comparer les médianes et
moyennes respectivement. Un test du chi carré a été utilisé pour comparer les fréquences.
Le seuil de signification a été fixé à 0,05
Résultats
Pour caractériser la structure trabéculaire nous avons évalué, l’épaisseur des travées, le diamètre
et le nombre de trabécules, et le degré de connectivité des travées.
1. Effet du tériparatide sur l’épaisseur des travées des rats exposés à l’alendronate
Les valeurs moyennes étaient de 0,77 ± 0,25 mm dans le G1, 0,89± 0,36 mm dans le G2 et de
0,53± 0,30 mm dans le G3. (Voir figure 3)

p = 0,023

p ajustée = 0,036

Figure 3 : Répartition de l'épaisseur des travées des groupes de rats de l'étude

A la 16ième semaine d’expérimentale, pour les trois groupes à l’étude, l’épaisseur des travées était
corrélée positivement et significativement à la DMOv trabéculaire (G1 : r1’=0,909, p=0,025;
G2 : r2’=0,919, p=0,008 ; G3 : r3’= 0,69, p=0,03. (Voir figure 4)

G1-10 µg G2-10 µg G3-SS

Epaisseur des travées (mm)
Epaisseur des travées (mm)

f(x) = 12
NaN x + NaN 1.5
Epaisseur des travées

R² = 010
8 f(x) = 0.0005419914
1 x + 0.1187389132
R² = 0.919551566189964 2
6 0.5
(mm)

4 1.5
2 0 1
0 f(x) = 0.0004539131 x + 0.4351445804
0.5
R² = 0.692471103814828
400 600 800 1000 1200 1400
0
-2000 -1000 0 1000 2000

DMOv trabéculaire (mg HA.cm - DMOv trabéculaire (mg HA.cm - DMOv trabéculaire (mg HA.cm -3)
3) 3)

Figure 4 : Corrélations observées entre le degré de minéralisation osseuse et l'épaisseur des

travées osseuses chez les rats après huit semaines de traitement au tériparatide
Les images scanographiques présentées à la figure 5 indiquent des variations dans l’épaisseur des
travées des différents groupes à l’étude
 Figure 5 : Tomodensitométrie en coupe sagittale oblique de l'épaisseur des travées des groupes
de rats de l'étude
2. Effet du tériparatide sur nombre de trabécule des rats exposés à l’alendronate
Treize rats (86,36 %) traités avec 20 µg de tériparatide et 8 rats (53,3%) traités avec 10 µg de
tériparatide avaient un nombre de trabécules égal à 3. Tandis que, dans le groupe témoin
seulement deux rats soit 14,2 % avaient un nombre identique de trabécules.
Les valeurs moyennes étaient de 2,4 ±0,73 ,2,73± 0,7 et 1,14±1,02 respectivement dans le G1,
G2 et G3. (p=0,042)
L’histogramme observé pour les différentes valeurs de degré de minéralisation (DMOvs) après 8
semaines de traitement au tériparatide à 10 µg ou à 20 µg montre que la distribution de la
minéralisation est déplacée vers les alvéoles ayant le plus grand nombre de trabécules. (Voir figure
6)

nombre de trabécules nombre de mesures

13
14
12
10 8
8 6
5
6
Effectif

4
3 3 3
4 2 2 2 2 2 2
1 1 1
2 0
0
(-1011) 544 518 122 601 429 804 1327 861
-226 577 654 595 963 535 1351 2154 1258
G3-ss G2-20 G1-10 G3-ss G1-10 G3-ss G1-10 G2-20 G3-ss
µg µg µg µg µg
DMOv en mg.cm -3

Figure 6 : Histogramme des différentes valeurs de degré de minéralisation en rapport avec le

nombre de trabécules. La distribution de la minéralisation est déplacée vers les alvéoles ayant un
nombre de trabécules égal à 3
Les images scanographiques présentées dans la figure 7 confirment les observations vues plus
dans l’histogramme. On y voit dans les groupes de rats traités aux deux régimes de tériparatide
des trabécules hyperdenses contrairement aux hypodensités observées dans les trabécules des
groupes témoins.

Figure 7 : Coupes sagittales obliques comparant le nombre de trabécules des groupes de rats
traités aux régimes de 10 et 20 µg de tériparatide au groupe contrôle
3. Effet du tériparatide sur le diamètre trabéculaire des rats exposés à l’alendronate
Les diamètres les plus élevés étaient retrouvés dans le groupe témoin et les valeurs moyennes
étaient de 0,88 ±0,31, 0,76± 0,39 et 1,05± 0,35 respectivement dans le G1, G2 et G3 (p=0,031).
(Voir figure 8)

G1-10 µg G2-20 µg G3-SS

2.5

2
1.82
Diamètre trabéculaire (mm)

1.5 1.35
1.12 1.16 1.21
1.14
1.01
1 0.94

0.5

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Figure 8 : Répartition des diamètres trabéculaires des groupes de rats de l'étude

Par rapport aux valeurs mesurées, l’augmentation du diamètre trabéculaire était corrélée à une
diminution de la densité minérale osseuse volumétriques trabéculaire. (Voir figure 9)
 G1-10 µg G2-20 µg G3-SS

1.5 2.5 1.5

diamètre trabéculaire
diamètre trabéculaire

diamètre trabéculaire
2
1 f(x) = − 0.00018441x + 0.99651893
f(x) = − 0.000719352463 x 1.5 R² = 0.819297722120657

(mm)
+ 1.480949519631 f(x) = − 0.00075454299 x
(mm)

(mm)
R² = 0.653721824881327 1 0.5
0.5 + 1.91324958619
0.5 R² = 0.797469444236124
0
0 0 -2000-1000 0 1000 2000
400 600 800 1000 1200 1400 0 500 1000 1500 2000 2500
DMOv trabéculaire (mg HA.cm -
DMOv trabéculaire (mg HA.cm -3) DMOv trabéculaire (mg HA.cm -3) 3)

Figure 9 : corrélations observées entre le degré de minéralisation et le diamètre des trabécules

huit semaines après traitement au tériparatide chez les rats exposés à l’alendronate. (Ces
régressions comprenant les valeurs des G1, G2 et G3 montrent que plus le diamètre trabéculaire
diminue, plus la densité minérale tissulaire osseux est élevée).
Les coupes scanographiques suivantes montrent des espaces trabéculaires plus petits chez les rats
traités aux deux régimes intermittents de tériparatide contrairement aux rats témoins où les
diamètres trabéculaires étaient plus élevés. (Voir figure 10)

Figure 10 : Mesures sur des coupes sagittales et coronale des diamètres trabéculaires des groupes
de rat de l'étude
4. Effet du tériparatide sur le degré de connectivité des rats exposés à l’alendronate
Les résultats ont montré que la densité moyenne de connectivité entre la trabécule inférieure et le
canal dentaire inférieur était supérieure dans le groupe de rats traité au tériparatide à 20 µg
(1040,3±161,38 mgHA .cm-3) comparativement au groupe de rats traités à 10µg de tériparatide et
au groupe témoin soit, 984,25 ± 173,17 mgHA .cm-3 et 647,7 ± 270,70 mgHA .cm-3.
(p<0,044).Cette tendance s’observait également avec l’épaisseur de la travée séparant le canal
dentaire inférieur et la trabécule inférieure. (Voir tableau II)
Tableau II : Comparaison des variables composant le degré de connectivité entre les groupes de
rats de l'étude
Variables Conn D1 Conn D2 ET
( mg HA.cm -3 ) ( mg HA.cm -3 ) (mm)

G1-10 µg 984,25 ± 173,17 786,53 ± 173, 2 1,01 ± 0,15

G2-20 µg 1040,3±161,38 799,93 ± 209,9 1,12 ± 0,41

G3-SS 647,7 ± 270,70 386 ± 169,9 0,56 ± 0,25

P value 0,044 0,03 0,046

P value ajustée 0,008 0,496 0,006

Conn D1 : densité de connectivite entre la trabécule inférieure et le canal dentaire inferieure

Conn D2 : densité de connectivite entre la trabécule inférieure et la trabécules médiane

E.T : épaisseur de la travée entre la trabécule inférieure et le canal dentaire inferieure

A l’observation des coupes sagittales obliques comme le montre la figure 11, les trabécules des
groupes de rats exposés à la mélatonine et à la vitamine D avaient une forme régulière en huit
interconnecté par des travées osseuses dont le niveau de gris apparaissait plus élevé et plus
homogène. Par contre, dans le groupe témoin les trabécules étaient séparées par des travées
osseuses hypodenses par endroit accompagnées parfois par une rupture des septa osseux
intertrabéculaires.

Figure 11 : Comparaison des variables composant le degré de connectivité entre les groupes de
rats
Discussion
1. Les forces : Notre étude présentait plusieurs points forts, notamment :
 Une méthodologie contrôlée, randomisée et en aveugle.
 L’évaluation de deux doses différentes et de deux durées d'administration de tériparatide
dans la même étude.
 La fréquence et la voie d’administration du tériparatide étaient identiques de celles
utilisées chez l’homme.
 L'évaluation clinique et tomodensitométrique simultanée du traitement à la seizième
semaine de l’étude.
2. Les limites :
 Le coût du tériparatide étant élevé, la durée du traitement a été limitée à 8 semaines.
 Par ailleurs, l'administration à court terme de tériparatide (4 et 8 semaines) a permis
d'améliorer les caractéristiques cliniques de l'ONM avec des résultats
tomodensitométriques prometteurs. Cependant, pour minimiser le risque de récidive de
l'ostéonécrose, l’alendronate ne doit être repris qu'après la résolution complète de l’ONM.
Par conséquent, d'autres études évaluant les effets d'un traitement plus prolongé et les
effets de différents schémas posologiques, sont recommandées.
3. Le tériparatide améliore la densité minérale osseuse volumétrique et les indices
morphometriques des rats présentant une ONM de stade 2 et 3 induite par l’alendonate
L'ampleur des changements observés de la DMOv trabéculaire chez les rats traités au tériparatide
concorde avec d’autres études.
Dans une étude menée par Ersan et al. (2013), 30 μg/kg/jour de tériparatide et le même volume
de solution physiologique ont été administrés pendant 8 semaines à des rats recevant un
traitement au zolédronate et une extraction dentaire [13]. D’après l’analyse
microscannographique, la densité minérale osseuse dans l'alvéole d'extraction était plus faible
dans le groupe exposé au zolédronate que dans le groupe exposé à la fois au zolédronate et au
tériparatide soit 791,38 ± 22,79 mgHA.cm-3 et 835,53 ± 35,33 mgHA.cm-3 respectivement. Par
contre, malgré l'administration de teriparatide à 20 μg/kg/2 fois/semaine, nos valeurs étaient de
loin supérieures à celles de la présente étude.
On peut en déduire que, le tériparatide a induit une nouvelle formation osseuse sur les surfaces
osseuses inactives et a stimulé davantage l'apposition minérale sur les surfaces de remodelage
actives, ce qui a entraîné une augmentation de l'épaisseur trabéculaire, du nombre de trabécules
qui associé à l’augmentation significative du diamètre trabéculaire a entrainé l’augmentation de
la densité de connectivité trabéculaire. En effet les corrélations entre l’épaisseur travées et la
DMOv trabéculaire s’explique car la résistance de l’os trabéculaire est directement liée à
l’épaisseur des travées[14,15]. Cependant, l’augmentation de la densité de connectivité
trabéculaire majore la résistance mécanique plus qu’un simple épaississement des travées[15,16].
D’une manière générale, l’augmentation de la connectivité trabéculaire réduit la longueur non
soutenue des travées en augmentant la résistance mécanique de l’ensemble[14].
Ceci démontre l'intérêt de l'administration discontinue de téripartide dans la réparation des
lésions osseuses, parce que son injection continue à des effets cataboliques, causant une
résorption osseuse nette et une hypercalcémie, tandis que l'administration intermittente a des
effets anabolisants sur les os [17].
Conclusion
Cette étude a montré une différence statistiquement significative de la microarchitecture
trabéculaire entre les groupes de rats traités aux régimes de tériparatide au niveau l’épaisseur
trabéculaire, du nombre de trabécules, de la densité de connectivité en comparaison aux rats
témoins. D’autres études devraient être réalisées pour affiner cette différence de caractérisation
entre les régimes intermittents de tériparatide par une évaluation au microtomographie et de
préférence sur des échantillons humains prélevés chez les vivants.
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