Chapitre 1: Aspects généraux de la chromatographie

1. Généralités
La chromatographie est une méthode physique de séparation et de quantification des
composants d’un mélange. L’échantillon à analyser est introduit en petite quantité
dans une colonne contenant la phase stationnaire puis la phase mobile entraîne
l’échantillon à travers la colonne. Si les vitesses de migration des constituants
de l’échantillon sont différentes ils pourront alors être recueillis séparément. A
leur sortie de colonnes un détecteur permet de mesurer en continue la quantité de
chaque constituant du mélange.
Toujours phase stationnaire sinon pas de séparation possible.
2. Classification des techniques chromatographiques
Les techniques chromatographiques peuvent être réparties soient :
⁃ à partir de la nature physique des deux phases (stationnaire et mobile)
⁃ Selon le procédé ou la technique opératoire utilisée
⁃ Selon la nature du phénomène physico-chimique à l’origine de la
séparation. Ce phénomène physico-chimique est caractérisé par le coefficient de
distribution de Nernst ( K ) ainsi défini K =CS/CM
Cs : Concentration massique phase stationnaire
Cm : Concentration massique phase mobile
1. Chromatographie liquide - solide
Phase mobile toujours liquide
Phase stationnaire toujours solide
2. Chromatographie liquide liquide ( CLL)
Les deux phases (stationnaire et mobile) sont des liquides
Pour immobiliser dans la colonne un liquide on y introduit d’abord un matériau
inerte et poreux qui joue un rôle de support . Dans ce type de chromatographie le
coefficient de distribution de Nernst sera appelé coefficient de partage.
3. Chromatographie gaz liquide (CGL)
La phase mobile est un gaz
La phase stationnaire un liquide immobilisé sur un support inerte
Le coefficient de distribution de Nernst (K) est appelé coefficient de partage
lorsque la phase stationnaire est un liquide.
4. Chromatographie gaz solide (CGS)
La phase stationnaire est un solide poreux et la phase mobile un gaz
Phase stationnaire toujours solide ou liquide
Phase mobile toujours liquide ou gaz
Toujours coefficient de Nernst
3. Le Chromatogramme
C’est un diagramme à deux dimensions présenté sur écran ou sur papier . Il montre
l’évolution en fonction du temps d’un paramètre qui dépend de la concentration
instantanée du soluté en sortie de colonne. Le temps (quelque fois le volume)
d’élution est porté en abscisse et le signal du détecteur en ordonnée.
L’élution est l’entraînement des solutés dans la colonne par la phase mobile. La
courbe est formée d’autant de pics distincts qu’il y’a de composés séparés par la
colonne. La ligne de base correspond aux tracés obtenus en absence de composé
analysé. Si le signal envoyé par le détecteur varie linéairement avec la
concentration il en sera de même de l’aire correspondant sur le chromatogramme.
Un constituant est caractérisé par son temps de rétention (tR) qui est le temps
écoulé entre l’instant de l’injection et celui déterminé au maximum du pic lui
correspondant sur le chromatogramme .
tR = tS + tM
Un constituant non retenu par ( phase stationnaire) sort de la colonne au temps tM
appelé temps mort et quelque fois désigné par t0.
t0 = tM or tM = L/U
La séparation est totale ou complète quand un chromatogramme présente autant de
pics revenant à la ligne de base qu’il a de solutés dans le mélange analysé.

 4. Grandeurs de rétention
⁃ Volume de la phase mobile (Vm)
Le volume de la phase mobile dans la colonne (appelé volume mort) Vm correspond au
volume interstitiel disponible. Il peut être calculé d’après le chromatogramme à
condition d’introduire un soluté non retenu par la phase stationnaire.
Vm = débit de la phase mobile multiplié par tM
⁃ Volume de la phase stationnaire ( Vs)
Ce volume Vs n’apparaît pas sur le chromatogramme. Il peut être calculé à condition
de connaître les dimensions de la colonne.
⁃ Volume de rétention (Vr)
Le volume de rétention de chaque soluté représente le volume de phase mobile
nécessaire pour le faire migrer d’une extrémité à l’autre de la colonne
Vr = débit phase mobile multiplié par le temps de rétention