TOXICOLOGIE ET QUALITÉ

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 TOXICOLOGIE
• Nécessité de liaison du médicament à sa cible
“Corpora non agunt nisi fixata”
• Effet du médicament est initié par sa liaison à une
macromolécule (cible): reconnaissance et affinité.
• Médicament modifie le fonctionnement des cellules.

Mécanisme
médicament Cible cellulaire
de signalisation

Modification Modification du Réponse

d’une fonction de fonctionnement cellulaire
l´organisme d´un organe
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 TOXICOLOGIE
“Corpora non agunt nisi fixata”

Limite du dogme de liaison du médicament/cible!!

-Médicaments n´intéragissent pas strictement avec
une cible de l´organisme auquel sont administrés.
Ex:
-Médicaments destinés à détruire les pathogènes.
-Modificateurs du pH.
-Surfactant pulmonaire.
-Laxatifs.

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 TOXICOLOGIE
Diversité des médicaments et leur cibles

Combien de molécules actives commercialisées?

-Milliers de médicaments commercialisés ne
correspondent en fait qu´à près de 1 200 molécules
actives d´origine végétale et synthétiques.
-Chaque année quelques nouvelles molécules actives
sont mises sur le marché et autres retirées.
-Les organismes d´autorisation de mise sur le marche
des médicaments (ANSM, EMA, FDA) ont des
exigences toujours plus grands: EFICACITE ET
INNOCUITE.

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 TOXICOLOGIE
Diversité des médicaments et leur cibles

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 TOXICOLOGIE
Diversité des médicaments et leur cibles

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 TOXICOLOGIE
Diversité des médicaments et leur cibles

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 TOXICOLOGIE
Diversité des médicaments et leur cibles

Combien de cibles moléculaires?

-1200 molécules actives: 330 cibles (270 codées par le
génome humain et 60 aux pathogènes).
-Ces 330 cibles représentent qu´un très faible
pourcentage des cibles potentiels.
-Une même cible peut être visée par plusieurs
médicaments.

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 TOXICOLOGIE
Les grandes families de cibles

-Les enzymes (25%).

-Les pompes et canaux ioniques: protéines membranaires

qui régissent les équilibres transmembranaires des
principaux ions (15%).

-Les récepteurs membranaires (40%):

agonistes/antagonistes.

-Les récepteurs nucléaires (10%): agonistes/antagonistes.

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

La caractérisation de l´effect d´un médicament comprend:

-La mesure de l´affinité de ce médicament pour sa cible.
-La définition qualitative et quantitative de la réponse
biologique induite.
-L´approche de la sélectivité de cette nouvelle molécule
pour sa cible permettant d´envisager ses effets
secondaires éventuels.

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

IN VITRO IN VIVO

FRAGMENTS
ORGANE ISOLÉ ORGANISME ENTIER
MEMBRANAIRES

RÉCEPTEURS
CELLULES ISOLÉES
PURIFIES

ETUDE DE LIAISON SPECIFIQUE

ETUDES FONCTIONNELLES

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

-Calcul des paramètres définissant les propriétés du

médicament: modèle mathématique dit loi d´action
de masse. Exprimer l´affinité chimique ou force de
réaction entre les masses de deux composés.
-Une réaction chimique réversible entre les composés
A et B ateint un équilibre A+B<->AB, caractérisé
pour une cte d´équilibre à une T.
K=k1/k-1.
-Ou k1 est la cte d´association et k-1 de dissociation.

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

Détermination de l´affinité Enzyme/Substrat/Inhibiteur

La loi d´action de masse a été adaptée aux réactions E/S
et E/I
-L´affité du couple E/S est quantifiée expérimentalement
par KM ou constante de Michaelis.
KM=([E]x[S])/[ES]=k-1/k1
Concentration de substrat permettant 50% de la vitesse
maximale de la réaction enzymatique.

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

La KM est déterminé graphiquement em mesurant la

vitesse de réaction enzymatique en fonction des
concentrations croissantes de substrat.

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 TOXICOLOGIE
L´affinité entre cible et médicament

- L´affinité du couple E/I est quantifié

expérimentalement pa la valeur CI50 permettant
calculer dans certains cas la Ki.
- Pour l´ensemble des inhibiteurs, une seule
concentration de substrat permet d´evaluer la CI50,
concentration d´Inibitrice diminuant de 50% la vitesse
de la réaction. Les valeurs sont comparables que dans
les conditions identiques.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament
PARAMETRES GENERAUX DE L´ACTIVITÉ DES MEDICAMENTS
DE50 ET CE50.
-Deux types de réponses de l´organisme au médicament
peuvent être observés:
Les réponses quantales, tout ou rien (animal entier).
Quantifiées par le DE50 (dose efficace 50) qui représente
la dose nécessaire pour produire un effet chez 50% des
animaux. La dose létale 50, DL50, est la dose létale chez
50% des animaux.
Les réponses graduelles, plus courrantes, augmentent
graduellement en fonction de la concentration (in vitro) ou
la dose (in vivo) du médicament. Elles sont quantifiées par
CE50 (concentration efficace 50) et DE50.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

PARAMETRES GENERAUX DE L´ACTIVITÉ DES

MEDICAMENTS DE50 ET CE50.
-Ces expériences permettent caractériser un ligand
comme:
Agoniste.
Antagoniste.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

Paramètres de l´activité des agonistes: CE50

Généralement quantifié in vitro.
CE50 est la concetration d´agoniste nécessaire pour
obtenir 50% de l´effet maximun.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

Paramètres de l´activité des agonistes: CE50 (In vitro)

In vivo DE50.
L´étude systématique des relations effect-concentration
pour des analogues chimiques permet définir les
rélations structure/activité à l´intérieur d´une même
serie chimique. La comparaison de CE50 obtenues pour
divers agonistes sur le même recepteur permet de les
classer par ordre d´activité. Idéalement on choisira
l´agoniste dont l´affinité et l´activité sont les plus
grandes, mais attention avec la sélectivité.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

Paramètres de l´activité des agonistes: Activité

intrinsèque des agonistes.
Dans une même série d´expériences, la comparaison des
courbes effet-concentration permet d´observer des
phénomènes d´agonisme partiel (réponse maximale
faible).
Activité intrinsèque (α). Agoniste entier: α=1; Agoniste
partiel: α<1; antagoniste neutre: α=0; antagoniste:
α<0.

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

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 TOXICOLOGIE
L´activité du médicament

Paramètres de l´activité des antagonistes: CI50.

Concentration d´antagoniste nécessaire pour diminuer
50% l´effet .

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 TOXICOLOGIE
La sélectivite du médicament
Séléctif ou spécifique?
La sélectivité est une notion essentielle à la connaissance d´un
médicament.
Sélectivité est un terme relatif. Spécificité est absolu.
En pratique la sélectivité d´un ligand pour la cible R1 vis-a-vis de la
cible R2 correspond au rapport de son affinité pour R2 sur son
affinité pour R1.
Corrélativement, la sélectivité de l´effet du médicament L pour
l´effet E1 vis-à-vis de l´effet secondaire E2, correspond au
rapport de sa concentration, entraînant l´effet E2 sur la dose ou
concentration entraînant E1.
On utilisera em pratique le rapport des CE50 ou DL 50.
Marge thérapeutique, différence entre les doses nécessaires à
l´effet recherché et les doses à l´effet secondaire, voire toxique.

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 TOXICOLOGIE
Etudes toxicologiques

• Bioguidage.
• Criblage in vivo.
• Criblage in vitro
• Criblage in silico.
• Criblage chimique

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