Culture Bactériologique

Cette culture biologique de microbes révèle le rôle essentiel joué par les micro-organismes
dans les processus géochimiques. C’est son développement de la culture enrichissante qui a
eu l’impact le plus immédiat sur la microbiologie en permettant la culture d’une large gamme
de microbes avec des physiologies sauvages différentes.

En biologie, une culture est une méthode de multiplication de micro-organismes, tels que des
bactéries dans lesquelles un milieu optimal est préparé pour favoriser le processus souhaité.
Une culture est utilisée comme une méthode fondamentale pour l’étude des bactéries et autres
micro-organismes (virus, pathogènes, spores…) qui causent des maladies en médecine
humaine et vétérinaire

Méthodes de culture bactériologique

Les bactéries ont été observées pour la première fois par Anton von Leeuwenhoek à la fin du
17ème siècle, mais ne sont devenues l’objet d’études scientifiques sérieuses qu’au 19ème siècle,
lorsqu’il est devenu évident que certaines espèces causaient des maladies humaines. Les
méthodes mises au point par Robert Koch, Louis Pasteur et leurs associés au cours de « l’âge
d’or » de la microbiologie, qui s’étend du milieu des années 1800 au début des années 1900,
sont encore largement utilisées aujourd’hui. La plupart de ces méthodes impliquaient d’isoler
des bactéries uniques dérivées d’une source naturelle (comme un animal ou un humain
malade) et de les cultiver dans un environnement artificiel en tant que culture pure pour
faciliter des études supplémentaires.

La culture de bactéries en culture pure est toujours l’une des méthodes les plus utilisées en
microbiologie. De nombreuses bactéries, en particulier celles qui causent des maladies et
celles utilisées dans les études scientifiques, sont hétérotrophes, ce qui signifie qu’elles
dépendent de composés organiques comme nourriture, pour fournir de l’énergie et du carbone.
Certaines bactéries nécessitent également des composants nutritionnels supplémentaires tels
que des vitamines dans leur alimentation. Un environnement physique approprié doit être
créé, dans lequel des facteurs importants tels que la température, le pH et la concentration des
gaz atmosphériques (en particulier l’oxygène) sont contrôlés et maintenus.

Les besoins nutritionnels des bactéries peuvent être satisfaits grâce à des milieux
microbiologiques spécialisés qui contiennent généralement des extraits de protéines (comme
source de carbone et d’azote), des sels inorganiques tels que le phosphate de potassium ou
le sulfate de sodium et, dans certains cas, des glucides tels que le glucose ou le lactose. Pour
les bactéries exigeantes (c’est-à-dire celles qui mangent difficile), des vitamines et / ou
d’autres facteurs de croissance doivent également être ajoutés.

Les milieux de culture bactériologiques peuvent être préparés sous forme liquide (bouillon),
solide (milieu en plaque ou milieu incliné) ou sous forme semi-solide (en profondeur). Les
milieux solides et semi-solides contiennent un agent de solidification tel que agar ou gélatine.
L’agar, qui est un polysaccharide dérivé d’algues rouges (Rhodophyceae) est préféré car il
s’agit d’une substance inerte non nutritive. La gélose fournit une surface de croissance solide
pour les bactéries, sur laquelle les bactéries se reproduisent jusqu’à ce que les grumeaux
distinctifs de cellules que nous appelons colonies se forment.

Cultiver des bactéries en culture

Une population de bactéries cultivées en laboratoire est appelée culture. Une culture pure ne
contient qu’un seul type ; une culture mixte contient deux ou plusieurs bactéries différentes.
Si une culture bactérienne est laissée dans le même milieu pendant trop longtemps, les
cellules utilisent les nutriments disponibles, excrètent des métabolites toxiques et finalement
la population entière mourra. Ainsi, les cultures bactériennes doivent être périodiquement
transférées ou repiquées dans de nouveaux milieux pour maintenir la population bactérienne
en croissance.

Les microbiologistes utilisent des techniques de sous-culture pour cultiver et maintenir des
cultures bactériennes, pour examiner les cultures pour leur pureté ou leur morphologie, ou
pour déterminer le nombre d’organismes viables. Dans les laboratoires cliniques, la sous-
culture est utilisée pour obtenir une culture pure d’un agent infectieux, ainsi que pour des
études conduisant à l’identification de l’agent pathogène. Étant donné que les bactéries
peuvent vivre presque n’importe où, les étapes de repiquage doivent être effectuées de
manière aseptique, pour s’assurer que la contamination bactérienne ou fongique indésirable
est maintenue hors d’une culture importante.

En microbiologie, les techniques aseptiques ne nécessitent essentiellement que du bon sens et

de bonnes compétences de laboratoire. Tout d’abord, considérez que toutes les surfaces que
vous touchez et l'air que vous respirez peuvent être contaminés par des micro-organismes.
Pensez ensuite aux mesures que vous pouvez prendre pour minimiser votre exposition aux
intrus invisibles indésirables. Vous devez également réfléchir à la manière d’éviter la
contamination de vos cultures bactériennes par des bactéries du milieu environnant (ce qui
vous inclut).
Pour maintenir un environnement de travail aseptique, tout ce avec quoi vous travaillez doit
être initialement exempt de microbes. Ainsi, nous commençons par des pipettes pré-
stérilisées, des tubes de culture et de la verrerie. Des boucles d’inoculation et des aiguilles en
fil métallique peuvent être utilisées pour transférer des bactéries d’un milieu à un autre, par
exemple de la surface d’une plaque d’agar à un bouillon. Les outils métalliques peuvent être
stérilisés en les chauffant dans la flamme d’un bec Bunsen. Les outils en verre ou les
épandeurs en métal ou les pinces qui ne peuvent pas être stérilisés par la chaleur directe sont
plongés dans de l’alcool suivi d’un bref passage à travers la flamme pour accélérer le
processus d’évaporation. Les techniques aseptiques standard utilisées pour la culture des
bactéries seront démontrées au début du laboratoire.

Une méthode très importante en microbiologie consiste à isoler un seul type de bactérie à
partir d’une source qui en contient plusieurs. Le moyen le plus efficace pour ce faire est la
méthode de la plaque à stries, qui dilue les cellules individuelles en les étalant sur la surface
d’une plaque de gélose (voir figure 2). Les cellules individuelles se reproduisent et créent des
millions de clones, qui s’entassent tous au-dessus de la cellule d’origine. Les piles de cellules
bactériennes observées après une période d’incubation sont appelées colonies.
Chaque colonie représente les descendants d’une seule cellule bactérienne et, par conséquent,
toutes les cellules des colonies sont des clones. Par conséquent, lorsque vous transférez une
seule colonie de la plaque à stries vers un nouveau milieu, vous avez obtenu une culture pure
avec un seul type de bactérie.

Différentes bactéries donnent naissance à des colonies qui peuvent être assez distinctes de
l’espèce bactérienne qui les a créées. Par conséquent, une étape préliminaire utile dans
l’identification des bactéries consiste à examiner une caractéristique appelée morphologie
coloniale, qui est définie comme l’apparition des colonies sur une plaque de gélose ou une
inclinaison. Idéalement, ces déterminations devraient être effectuées en examinant une seule
colonie ; cependant, si la croissance coloniale est plus abondante et que les colonies isolées
sont absentes, il est encore possible de décrire certaines des caractéristiques coloniales, telles
que la texture et la couleur de la croissance bactérienne.

## Développement de la réponse :

**Introduction :**

La culture bactérienne est une technique fondamentale en microbiologie qui permet d’isoler,
de cultiver et d’étudier les bactéries. Elle joue un rôle crucial dans la compréhension des
processus géochimiques, le diagnostic et le traitement des maladies infectieuses, le
développement de nouveaux antibiotiques et la biotechnologie.

**Méthodes de culture bactériologique :**

**Historique :**

Les premières observations de bactéries ont été réalisées par Anton von Leeuwenhoek au
17ème siècle. Mais ce n’est qu’au 19ème siècle, grâce aux travaux de Robert Koch, Louis Pasteur
et d’autres, que les techniques de culture bactérienne ont été développées et que l’étude des
bactéries a pris son essor.

**Principes de la culture :**

Les bactéries ont besoin de nutriments et d’un environnement adéquat pour se développer. Les
milieux de culture, composés d’extraits de protéines, de sels minéraux et d’autres substances,
leur fournissent les éléments nécessaires à leur croissance. La température, le pH et la
concentration d’oxygène sont également des facteurs importants à prendre en compte.

**Techniques de culture :**

Les milieux de culture peuvent être préparés sous forme liquide (bouillon), solide (gélose) ou
semi-solide. Les bactéries sont ensuite inoculées dans le milieu de culture choisi et incubées à
une température et une atmosphère appropriées.

**Cultiver des bactéries en culture :**

**Types de cultures :**

Une culture pure ne contient qu’un seul type de bactérie, tandis qu’une culture mixte en
contient plusieurs.

**Repiquage et subculture :**

Le repiquage consiste à transférer des bactéries d’un milieu de culture à un autre. La
subculture est une technique utilisée pour obtenir des colonies bactériennes pures à partir
d’une culture mixte.

**Asepsie :**

L’asepsie est un ensemble de mesures visant à prévenir la contamination des cultures

bactériennes par des micro-organismes indésirables.

**Isolement de colonies bactériennes :**

**Méthode de la plaque à stries :**

Cette technique permet d’isoler des colonies bactériennes pures à partir d’un échantillon
contenant plusieurs types de bactéries.

**Morphologie coloniale :**

L’observation de la morphologie des colonies (forme, couleur, texture) peut fournir des
informations utiles pour l’identification des bactéries.

**Conclusion :**

La culture bactérienne est un outil essentiel en microbiologie. Elle permet d’étudier les
bactéries, de diagnostiquer les maladies infectieuses et de développer de nouveaux
traitements.

**Remarques :**

* Ce document est une introduction à la culture bactérienne. Il existe de nombreuses autres

techniques plus spécialisées qui ne sont pas décrites ici.
* Pour plus d’informations, veuillez consulter des manuels de microbiologie ou des articles
scientifiques spécialisés.

**En plus de ce développement, voici quelques points supplémentaires qui pourraient être
ajoutés :**

* **Applications de la culture bactérienne :**

* Diagnostic des maladies infectieuses
* Développement de nouveaux antibiotiques
* Production de vaccins
* Biotechnologie (production d’enzymes, de vitamines, etc.)
* **Limites de la culture bactérienne :**
* Certaines bactéries ne peuvent pas être cultivées en laboratoire
* Les techniques de culture peuvent être longues et fastidieuses
* **Nouvelles technologies en culture bactérienne :**
* Microfluidique
* Culturomique
* Séquençage du génome

**J’espère que ce développement est plus complet et répond à vos attentes.**

## Développement des parties non présentes dans le document :

**Applications de la culture bactérienne :**

* **Diagnostic des maladies infectieuses :** La culture bactérienne est un outil essentiel pour
le diagnostic des maladies infectieuses. Elle permet d’identifier le type de bactérie
responsable de l’infection et de déterminer sa sensibilité aux antibiotiques.
* **Développement de nouveaux antibiotiques :** La culture bactérienne est utilisée pour
tester l’efficacité de nouveaux antibiotiques contre des bactéries pathogènes.
* **Production de vaccins :** De nombreux vaccins sont produits à partir de bactéries
cultivées en laboratoire.
* **Biotechnologie :** La culture bactérienne est utilisée pour produire des enzymes, des
vitamines, des acides aminés et d’autres produits d’intérêt biotechnologique.

**Limites de la culture bactérienne :**

* **Certaines bactéries ne peuvent pas être cultivées en laboratoire :** On estime que environ
99% des bactéries présentes dans l’environnement ne peuvent pas être cultivées en
laboratoire. Cela limite notre compréhension de la diversité bactérienne et de son rôle dans les
écosystèmes.
* **Les techniques de culture peuvent être longues et fastidieuses :** La culture bactérienne
peut prendre plusieurs jours, voire plusieurs semaines, pour obtenir des résultats. Cela peut
être un frein pour la recherche et le diagnostic des maladies infectieuses.

**Nouvelles technologies en culture bactérienne :**

* **Microfluidique :** La microfluidique permet de cultiver des bactéries dans des micro-
environnements contrôlés. Cela permet d’étudier le comportement des bactéries à l’échelle
individuelle et de développer de nouvelles techniques de diagnostic et de traitement.
* **Culturomique :** La culturomique est une approche métagénomique qui permet
d’identifier et de cultiver des bactéries qui ne peuvent pas être cultivées par des méthodes
traditionnelles.
* **Séquençage du génome :** Le séquençage du génome permet d’identifier les bactéries et
de déterminer leur résistance aux antibiotiques. Cette technologie est de plus en plus utilisée
pour le diagnostic des maladies infectieuses.

**En plus de ces points, voici quelques exemples concrets d’applications de la culture
bactérienne :**

* **Développement du vaccin contre la poliomyélite :** Le vaccin contre la poliomyélite a

été développé à partir de cultures de cellules de singe infectées par le virus de la poliomyélite.
* **Production d’insuline :** L’insuline, une hormone utilisée pour traiter le diabète, est
produite par des bactéries génétiquement modifiées.
* **Développement de nouveaux antibiotiques :** La vancomycine, un antibiotique utilisé
pour traiter les infections à staphylocoques résistants, a été découverte à partir d’une bactérie
du sol.

**La culture bactérienne est un outil puissant qui a permis de réaliser des progrès importants
en médecine et en biotechnologie. Les nouvelles technologies en culture bactérienne
permettront d’améliorer encore notre compréhension des bactéries et de développer de
nouvelles applications pour le bien-être humain.**