Université Hassan Ier

Faculté des Sciences et techniques de Settat

MS-MCDA
Management Commerce et Distribution en Agroalimentaire

Les enzymes de
restriction
Présenté par : ARIF Kaoutar Encadré par : BAIDANI
Aziz
KRABTI Douha
KHALLAK Kenza
Année Universitaire: 2019/2020
 Sommaire
• Introduction
• Les enzymes de restriction
 Définition
 Histoire
 Nomenclature, propriétés et leur mécanisme
• Différentes familles des enzymes
• Types de coupures
• Domaines d’application
• Conclusion
 Enzyme de restriction,
qu’est ce que c’est?
Une enzyme de restriction est
une protéine capable de couper
un fragment d'ADN au niveau
d'une séquence de nucléotides
caractéristique appelée site de
restriction.
Ces enzymes sont issues de bactéries, leur rôle est de
couper l’ADN étranger des virus (bactériophages) qui
infectent les bactéries, empêchent les virus de se
multiplier et permettent aux bactéries de survivre.
Histoire
• En 1962, il découvre que des enzymes bactériennes
sont capables de couper l‘ADN  du phage au niveau
de zones bien déterminées appelées sites de
restriction, qui correspondent à de courtes
séquences de 4 à 8 nucléotides.

• En 1970, l'Américain Hamilton O. Smith purifie la

première enzyme de restriction à partir de la
bactérie Haemophilus influenza.

• L'année suivante, son compatriote Daniel

Nathans l'utilise pour découper l'ADN du virus SV40.
 Le 8 Décembre 1978 ,
Werner Arber, Hamilton O.
Smith et Daniel Nathans
recevaient le prix Nobel de
physiologie et de médecine
pour leur participation à la
découverte de ces
enzymes de restriction.
La recherche de l’explication de ce phénomène les a amenés à
la découverte d’une nouvelle classe d’enzymes présentes chez
les bactéries hôtes : les enzymes de restriction.
Pour se protéger de leurs propres enzymes de
restrictions, et éviter ainsi qu’elles ne coupent
l’ADN de leur propre génome, les bactéries
fabriquent d’autres enzymes, appelées
méthylases. Ces méthylases protègent l’ADN
bactérien en ajoutant un groupement méthyl sur
les sites d’action des enzymes de restriction.
Nomenclature

EcoRI
Genre Espèce Souche Première à
être
caractérisée
EXEMPLE
L’enzyme de Origine Site de
restriction bactérienne reconnaissance
EcoRI Escherichia coli RYB Site reconnu
5’ GAA TTC 3’

SmaI Serratia marcescens Site reconnu

5’ CCC GGG 3’

PstI Providencia stuartii Site reconnu

5’ CTG CAG 3’
Propriétés
• Sont des protéines extraites à partir des bactéries

• Les enzymes de restriction sont capables de cliver

seulement l’ADN bicaténaire

• Elles appartiennent à la classe des endonucléases,

c-à-dire des enzymes qui coupent à l’intérieur
d’un acide nucléique les liaisons phosphodiester
entre deux nucléotides.
Mécanisme
Différentes familles des
enzymes
• Type I
L'enzyme
. reconnaît sa
séquence puis se déplace
sur l'ADN et s'arrête de
manière aléatoire 1000 à
5000 paires plus loin et
libère quelques dizaines
de nucléotides.
• Type II

Une fois la séquence reconnue, l'enzyme coupe

l'ADN au niveau de cette séquence (les plus
courante en biologie moléculaire).
• Type III

Après reconnaissance de la séquence

spécifique, ces enzymes découpent l'ADN une
vingtaine de nucléotides plus loin.
La longueur des séquences reconnue est
comprise entre 4 et 8 bases. Elle est identique
sur les 2 brins.

Par exemple ECO RI reconnaît la séquence : De

telles séquences sont appelées palindromiques.
Types de coupures
• Coupures à bouts francs
Les enzymes coupent exactement au même
niveau les 2 brins d'ADN : exemple Puu II qui
coupe Il ne peut donc pas y avoir d'association
spontanée entre de tels fragments : une ligation
ne pourra être effectuée que par certaines
ligases.
• Coupures à bouts cohésifs ou protusifs.

Dans ce cas, les coupures sont décalées l'une par rapport

à l'autre. C'est le cas d'ECO R1 précédemment décrit. Les
parties simple brin complémentaire peuvent s'apparier.
Ainsi, grâce à ce type d'enzymes, 2 ADN d'origine
différente coupées par une même enzyme de restriction
produisant des extrémités cohésives peuvent être mis
bout à bout puis ligaturés. C'est une propriétés très
utilisée dans les recombinaisons génétiques in vitro.
Domaines d’application
• Séquençage
• Clonage
• Recherche d’une mutation dans
le génome
• Sélection une région d’intéret
• Biotechnologie (organisme
génétiquement modifié ou OGM )
Conclusion
En laboratoire, les enzymes de restrictions sont
utilises pour couper l’ADN en sections plus
petites. Les coupures sont toujours faites dans
des endroits specifiques entres les sequences de
nucleotides. Ils peuvent etre utilises dans le
clonage d’ADN, dans les empreintes génétiques
ou la deletion de sections d’ADN in vitro.
Merci pour votre attention !