Présentation de l’ enseignement

de Toxicologie fondamentale et
appliquée

Dr :KHELIFI.A
Les objectifs du module

Une compréhension approfondie des principes

fondamentaux de la toxicologie ainsi que de leur
application dans divers domaines.
 Historique

• La connaissance des poisons est fort

ancienne car il semble que les premiers
toxiques utilisés aient servi à
empoisonner des flèches destinées à la
chasse ou à la guerre. Le terme de
toxique dérive d'ailleurs du mot grec
toxon,qui signifie «arc».
 La toxicologie
• La toxicologie est la“science des poisons”.
• Elle s’attache à étudier les substances exogènes ou
«Xénobiotiques» susceptibles d’exercer des effets délétères sur
les organismes vivants et leur environnement.
• Son importance est liée au nombre sans cesse croissant de
produits chimiques (produits industriels,pesticides…)et de
nouveaux médicaments mis sur le marché.
 La toxicologie

Science multidisciplinaire:
étudiant les
toxiques(poisons):origine ,proprietes
physiques,chimiques,biologiques ;biotransforma
tions ,modalites et mecanisme
d’action,detection,quantification;moyens de
combattre leur effets nocifs
 La toxicologie
Domaines variés:
-toxicologie medicolégale
-toxicologie professionnelle (Industrie, Agriculture).
-toxicologie alimentaire (additifs alimentaire)
- ecotoxicologie
-toxicologie sociale(toxicomanie)
-toxicologie reglementaire (limite et interdiction d’emploi de substances
éventuellement toxiques)
-biotoxicologie (toxicologie expérimentale, descriptive et clinique)
-biogenotoxicologie
-immunotoxicologie
DEFINITION:
• un poison, ou toxique est toute substance qui, après
pénétration dans l’organisme, par quelque voie que ce soit, à
une dose relativement élevée en une (toxicité aiguë ) ou
plusieurs fois très rapprochées (toxicité subaiguë) ou par
petites doses longtemps répétées (toxicité chronique),
provoque, de façon passagère ou durable, des troubles d’une
ou plusieurs fonctions ou des lésions, troubles pouvant aller
jusqu’à l’annihilation complète et même provoquer la mort.
Classification des toxiques :

• Les toxiques peuvent être classés en fonction de plusieurs critères :

1. Nature:
-Chimiques (métaux, hydrocarbure
aromatique),
-Physiques (rayonnements ionisants),
-Biologique : (toxines bactériennes, mycotoxines)
2-Organes cibles : cardiotoxiques, néphrologiques…
3-Effets biochimiques : inhibition enzymatique;
4- Effets sur l’organisme : cancérogènes, mutagénèse.
TOXIQUE
3 grandes catégories de poisons :
 les poisons chimiques (arsenic, cyanure, phénol...) ;
 les poisons biologiques (batrachotoxine, curare, toxine botulique,
muscarine, ricine,...) ;
 les poisons physiques (radionucléides : rayonnements alpha,bêta, gamma

Caractéristique d’un effet toxique :

• Local/ systémique.
• Réversible/irréversible.
• Fonctionnel/organique.
• Immédiat/retardé
TOXIQUE
Notions fondamentales
• Toxicocinétique : Étude des processus d'absorption, de
distribution, de métabolisme et d'excrétion des toxiques dans
l'organisme.
• Toxicodynamie : Compréhension des mécanismes
moleculaires et cellulaires par lesquels les toxiques exercent
leurs effets sur les organes et les tissus.
• Toxicologie génétique : Évaluation des effets des toxiques sur
l'ADN et les mécanismes de réparation de l'ADN.
• Toxicologie écologique : Application des principes de la
toxicologie aux écosystèmes et à la biodiversité.
NOTION DU DOSE
• Paracelse (1493-1541) :
“ Toute substance est un poison et aucune n’est inoffensive , c’est
simplement la dose qui fait qu’un produit n’est pas toxique
‘’Une dose appropriée différencie un poison d’un remède’’
NOTION DU DOSE
 La dose est la quantité d’une substance à laquelle un organisme est
exposé.
-plus la dose augmente, plus la réponse augmente,

 1- soit par la sévérité et la diversité

 de cette réponse
 C’est ce qu’on appelle la relation
dose-effet ou exposition -effet

DOSE

LESION
NOTION DU DOSE

2-Soit par le pourcentage d’individus

affectes
C’est ce qu’on appelle la relation dose-
reponse ou Exposition-reponse
 INTOXICATION
• DEFINITION: l’ensemble des troubles du
fonctionnement de l'organisme dues à l’introduction d’une
substance toxique dans l’organisme
Etiologie des intoxications :

-Suicide ou tentative de suicide ( par des médicaments, CO,

pesticides, produits domestiques);
-Empoisonnement criminel (par arsenic, cuivre, cyanure) ;
-Empoisonnement accidentel (eau de javel);
-Intoxication alimentaire (champignon toxique);
-Intoxication professionnelle (en milieu industriel ou
agricole);
-Intoxication due à la pollution
La toxicité
• La toxicité d’une substance est sa capacité à produire des effets
nocifs à un organisme vivant,

• La toxicité d’une substance dépend de :

• sa nature
• la quantité ingérée = dose
• la durée ou fréquence de consommation
• la sensibilité de l’individu

• Substance hautement toxique :entraîne des effets nocifs à faible

dose.

• Substance faiblement toxique :n’entraîne de tel effet que si elle est

administré à forte dose.
La toxicité
Toxicologie Appliquée

• Toxicologie clinique et humaine : Étude des effets toxiques

des substances chimiques sur la santé humaine, y compris les
maladies professionnelles, l'exposition environnementale et la
toxicologie clinique.
• Toxicologie environnementale : Évaluation des risques
toxiques pour l'environnement, y compris les études sur la
faune, la flore et les écosystèmes.
• Toxicologie alimentaire et sécurité alimentaire : Évaluation
des risques associés à la consommation de substances
toxiques dans les aliments.
• Toxicologie industrielle : Application des principes de la
toxicologie dans l'industrie pour garantir la sécurité des
travailleurs et la protection de l'environnement.
• Les concepts de base à
l’évaluation des risques
chimique
• L'évaluation des risques toxiques est un processus complexe
visant à évaluer les dangers potentiels que peuvent
présenter des substances toxiques pour la santé humaine et
l'environnement dans le but d’établir une démarche de
prévention
1-Identification des substances toxiques :

• Il s'agit de déterminer quelles substances chimiques ou agents

biologiques présentent un potentiel toxique on utilisant des
testes adapté au modalité d’exposition
Testes de toxicité
TOXICITE AIGUE
• La capacité d'une substance à provoquer un dommage
biologique grave ou mortel peu après une exposition unique
• C'est également, tout effet toxique lié à une exposition unique
de courte durée à une substance toxique.

• L’évaluation de toxicité aigüe d’une substance peut être

réalisée par plusieurs types d’études :
 Études expérimentales in vivo, qui utilisent des animaux
 Études in vitro, effectuées sur des cultures cellulaires ou
tissulaires
Evaluation qualitative
• Description de la nature des effets toxique ,le temps de leur
apparition ,les organes cibles
Evaluation quantitative
A-determination la dose minimal mortelle
(DMM)
• C’est la dose minimale de substance capable de tuer un animal par
administration intraveineuse lente

 choix des doses à utiliser pour la DL50

B- Détermination de la dose létale 50 (DL50):

la DL50 est une estimation statistique d’une dose unique de produit supposée
tuer 50% des animaux mis en expérience dans une méme espéce animal. Elle
est exprimée en mg de substance/Kg de poids corporel.

-Une façon pratique de caractériser la toxicité d’une substance

et de comparer les substances entre elles quant à leur potentiel toxique.
Protocole expérimental
• Une gamme de six doses ou plus est sélectionnée pour la
détermination de la DL50, les lots sont constitués de 10
animaux identiques sur les plans espèce, souche ou origine,
sexe, âge, et poids.
• Chaque lot d’animaux recevra une dose de la substance à
tester mais la dose diffère d’un lot à un autre afin que le
pourcentage de mortalité varie entre 0 et 100. On construit
ensuite la courbe donnant le pourcentage de mortalité en
fonction de la dose, On déduit la DL50 par des moyens
statistiques.
DL50
Intéret de la DL50
• La détermination de la DL50 permet de classer les produits
chimiques d’après leur toxicité selon l’échelle de Hodge et
Sterner
toxicité subaiguë
3 niveau de dose utilisées :Faible (active), Intermédiaire, Elevée
(toxique non mortelle)
• Les effets toxiques après expositions répétées
• Les organes cibles
• Les effets réversibles ou irréversibles
• Les phénomènes cumulatifs et effets retards
La toxicité chronique
• La toxicité chronique est le résultat de l’exposition prolongée à
plus ou moins faible dose à un toxique dont les effets néfastes
ne se feront sentir que quelques mois à quelques années voire
dizaines d’années plus tard.
• Les pathologies peuvent apparaître durant l’exposition ou bien
après la cessation de celle-ci.exp : d’asthmes,
d’encéphalopathies, de paralysies, de cancers…
• Les effets sont en fonction de la dose totale absorbée, ce qui
permet de fixer des doses seuils (ou valeurs limites
d’exposition).
Evaluation des données obtenues

• Si la toxicité n’est pas trop sévère, une dose sans effet (DSE)
peut être établie et une dose journalière admissible (DJA) peut
être extrapolée; En appliquant le plus souvent un facteur de
sécurité (facteur 100 recommandé par l’OMS) qui tient
compte de la différence de sensibilité entre l’homme et
l’animal et des autres facteurs de variabilité inter individuels.
Essais de mutagenèse
• Mutagènes: phénomènes résultant des interactions entre une
substance chimique et le matériel génétique des organismes
• Une substance mutagène induit une mutation ou augmente sa
fréquence, elle est potentiellement cancérigène.
La mutation peut être :
• Chromosomique: altération morphologique des chromosomes
• Génomique: modification du nombre des chromosomes du
génome
Cette étude est utilisée pour le dépistage des substances
mutagènes et détecter les substances cancérogènes
Tests de cancérogénicité in vivo
-Durée/observations : 18 mois chez la souris et l’hamster et 24 mois chez
les rats.
- les animaux morts doivent être autopsiés et faire des examens
histologiques on note aussi :
-Nombre différentes catégories de tumeurs
-Nombre d’animaux portant des tumeurs.
-Nombres de tumeurs pour chaque animal.
-Date d’apparition des tumeurs si possible
Les études d’embryo-toxicité et des
effets sur la reproduction
• Les études des fonctions de reproduction avec étude de la
fertilité du mâle et de la femelle permettent de calculer
différents index :
Index de fertilité:% des accouplements résultant en grossesse
Index de gestation: % de grossesses aboutissant à la mise bas
Index de viabilité: % de Nouveau nés qui survivent au moins 4
jours
Index de lactation: % d’animaux en vie au moment du sevrage
21 jours
Les études d’embryo-toxicité et des
effets sur la reproduction
• Examens de toxicité fœtale se traduit par :
L’embryo-létalité: la mort de l’embryon , elle survient lorsque le produit
exerce sa toxicité dans les premiers stades de la multiplication de l’oeuf.
La tératogénicité:survient lorsque le produit exerce son action pendant
l’organogénèse se traduit par une malformation congénitale :altération
morphologique permanente qui affecte une fonction physiologique.
 Evaluation de la toxicité aigüe par
voie locale
Test de Draize:
• Identification des produits irritants (test d’irritation) :
application sur la peau d’un lapin ou après introduction
dans le sac conjonctival de son oeil des réactions
caractéristiques sont recherchées : rougeur, urticaire, et
formation de vésicules, nécrose, conjonctivite, production
de larmes.
Evaluation de la toxicité aigüe par
voie locale
• Test de Draize:
• L’évaluation permet de classer les substances en 5 groupes
selon le pouvoir irritant:
• Non irritant
• Fortement irritant
• Faiblement irritant
• Extrêmement irritant
• Modérément irritant
Les alternatives aux tests d’irritabilité
• Eytex ;Ce test est destiné à mesurer l’irritation oculaire, il utilise une
protéine végétale dont le gel protéinique clair devient vitreux lorsqu’il
est en contact avec une substance irritante.
• L’épiderme humain reconstitué
Il s’agit de plusieurs couches de peau humaine cultivées en
laboratoire et que l’on peut utiliser pour les tests d’irritation cutanés.
Recherche des pyrogènes
• Les pyrogènes (soit « pyro » : température
élevée et « gène » qui produit) désignent un
groupe de substance, comprenant les toxines,
engendrant une élévation de la température
corporelle de l’homme et de l’animal (fièvre).
• La plus part des pyrogènes sont des LPS
• (membrane externe des bactéries Gram -).
• Deux tests sont utilisés pour l’évaluation des
pyrogène :
Test in vivo
-On administre par voie intraveineuse au niveau de la veine marginale de
l’oeil du lapin 5mg/kg de la substance à tester. La température rectale de
l’animal est mesurée avant et après 30 mn de l’administration.
-On utilise trois lots, chaque lot renferme trois
lapins
-On calcule la moyenne et l’écart type, si l’écart
type dépasse 1,45°C le test est positif et la molécule est dite pyrogène
(sachant que la température du lapin = 38°C).
Test in vitro
• Il faut signaler ici le test de LAL (Lysat d’Amoebocytes du Limulus), deux
gouttes du réactif LAL sont ajoutées à deux gouttes de la solution à tester,
s’il y aura une précipitation, le test est positif.
Essais de Cytotoxicité in Vitro
Mise en évidence de mort cellulaire
I. Test de Bleu de Trypan
II. Test de Rouge Neutre
III. Test MTT
IV. Dosage d’ATP
V. Test Lactate Deshydrogénase
Test de Bleu de Trypan
• Ce colorant d’exclusion pénètre dans toutes les cellules mais seules
• les cellules mortes le retiennent et se colorent en bleu, les cellules
vivantes apparaissent brillantes.
• Comptage des cellules après coloration
Test de rouge neutre
• Colorant vital rouge neutre s’accumule au niveau des
lysosomes.
• Les cellules mortes ne retiennent pas le colorant et ne seront
pas
• coloriées.
Test de MTT :bromure de 3-(4,5-
dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl
tetrazolium)
• Test basé sur la mesure l’activité d’une enzyme
mitochondriale, la succinate déshydrogénase.
• Dans les cellules vivantes, la succinate déshydrogénase
transforme le succinate en fumarate. Cette réaction
d’oxydation peut être couplée à une réduction du MTT
(jaune) en formazan (bleu-violet) dont la couleur est
appréciée par spectrophotométrie à 560 nm.
• L’intensité de la couleur est proportionnelle à l’activité de la
succinate déshydrogénase, elle-même proportionnelle à la
viabilité cellulaire
 Test d’ATP
• Ce test est basé sur le dosage de la quantité d’ATP des cellules qui
est proportionnelle au nombre des cellules vivantes.
• Les cellules traitées et lysées sont incubées en présence le
luciférase et luciférine. La mono-oxydation de cette dernière par
la luciférase, en présence d’ATP et d’oxygène moléculaire
produit un signal lumineux proportionnel à la quantité d’ATP
présentes dans les lysats cellulaires.
2-Communication des risques :
• Les résultats de l'évaluation des risques doivent être
communiqués de manière transparente aux parties prenantes,
y compris le public, les régulateurs et les professionnels de la
santé. La communication des risques est essentielle pour
permettre aux gens de prendre des décisions éclairées.
• 3-Gestion des risques :
• Après avoir identifié les risques, il est nécessaire de mettre en
place des mesures pour les réduire ou les éliminer. Cela peut
inclure des réglementations, des normes de sécurité, des
équipements de protection, etc.
• 4-Surveillance et réévaluation :
• Une fois que des mesures de gestion des risques ont été mises en
place, il est important de surveiller en permanence l'exposition et
les effets toxiques et de réévaluer périodiquement le risque pour
s'assurer que les mesures sont efficaces.