Hématopoïèse

« Ensemble des phénomènes qui concourent

à la fabrication et au remplacement continu et régulé
des cellules sanguines »
1- Données générales
 Produire 1013 cellules sanguines par jour
 2 millions d’hématies par seconde !

 Production conservatrice et réactive

 Maintenir une quantité malgré les variations de consommation
 Ajustement production / consommation
 Situation normale
 Hypoxie: érythrocytes (GR)
 Situation anormale
 Hémorragies: érythrocytes (GR);
 Infections, inflammation: leucocytes (GB)
 Activation de la coagulation: thrombocytes (PQ)

 Régulation cellulaire et humorale

 Cellules spécialisées
 Cellules effectrices
 Cellules environnantes
 Facteurs de croissance
 Stimulants; inhibiteurs
Siège: variable dans le temps
 Hématopoïèse embryonnaire:
 Tissus conjonctif extra-embryonnaire ( -> 2ème mois)
 Autour de la vésicule ombilicale (vitelline):
 Formation du réseau vasculaire péri-vitellin;
Accueillera les premiers battements cardiaques
 Les îlots cellulaires de Wolff et Pander
 Liens cellules endothéliales vasculaires / hématopoïèse.
 Sonde
YS: vésicule ombilicale
écho
vaginale E: embryon
GS: sac gestationnel
Siège: variable
 Hématopoïèse fœtale:
 2ème au 6ème mois: hépatique et splénique
 Application: greffe de cellules de foie fœtal

 A partir du 4ème mois: progressivement intra-osseuse,

lors du développement des ébauches des os
 Pénétration de l’os par les bourgeons de la vasculogenèse
 Véhiculent des cellules souches hématopoïétiques

issues de la région aorto-gonado-

mesonéphrique;
 Notion d’« hémangioblaste »,

cellule souche mixte,

hématopoïétique et endothéliale vasculaire
 Hématopoïèse adulte:
 Naissance:
 Moelle osseuse exclusive
 Jusqu’à 5 ans:
 Toutes les cavités médullaires
 Après 5 ans: limitation progressive
 Os courts et plats
 Sternum, côtes, vertèbres, os iliaque
 Grand âge: involution adipeuse
Biopsie osseuse chez un adulte
Cavités médullaire s
Travée osseuse
X 100

X 400

Tissus hématopoïétique
Logettes
Adipeuse
Vaisseau sinusoïde médullaire
CEV

Tissus
Logette hématopoïétique
Adipeuse

CEV: cellule endothéliale vasculaire

2- Les compartiments cellulaires
de l’hématopoïèse
2a- Définitions
 Toutes les cellules sanguines:
issues d’une cellule souche (CS) indifférenciée primitive
 La Cellule Souche Totipotente (CST)

 Lorsqu’une CST est stimulée:

 Programme de différenciation…
 Cycles de division / maturation
 Vers un nombre de plus en plus restreint de lignées hématologiques,

 …génère des CS différenciées ou engagées

 Les Progéniteurs (médullaires):
 D’abord multipotents (plusieurs lignées)
 Puis monopotents (vers une seule lignée)
 Les progéniteurs monopotents:
 Se divisent, maturent;
 Génèrent in fine les précurseurs de lignée
 Premières cellules que
leur morphologie permet de rattacher
à une lignée sanguine « morphologiquement reconnaissables »

 Les précurseurs:
 Se divisent et maturent;
 Génèrent les cellules matures fonctionnelles
 Passent dans le sang
 A travers les vaisseaux sinusoïdes médullaires
Cellule souche totipotente

Progéniteurs multipotents

Progéniteurs monopotents

Précurseurs

Cellules Moelle osseuse

matures

Sang
Cellules
matures
 Cultures Cellule souche totipotente
Cellulaires
in
vitro
Progéniteurs multipotents

Progéniteurs monopotents

Précurseurs Explorations Morphologiques

Moelle osseuse
Myélogramme
Moelle osseuse
Biopsie ostéo-médullaire

Sang Sang
Frottis sanguin
Cellules Tissus
matures Biopsie tissulaire
 Cultures Cellule souche totipotente
Cellulaires
CD 38 -
in
vitro
Progéniteurs multipotents CD 34 +
CD 38 +

Progéniteurs monopotents

Précurseurs Explorations Morphologiques

Moelle osseuse
Myélogramme
Moelle osseuse
Biopsie ostéo-médullaire
CD 34 - Sang Sang
Frottis sanguin
Cellules Tissus
matures Biopsie tissulaire
2b- Cellules souches totipotentes
 Propriétés fondamentales:

 Autorenouvellement
 Multiplication sans différenciation
 permet de maintenir une masse de CST.
 Différenciation
 Possibilité de division et d’engageant irréversible
 Génération de progéniteurs de lignée(s).
 Plasticité
 Conversion en CS non-hématopoïétiques
 Endothélium, epithéliums, muscle, foie, cœur, cerveau,…
 Preuve murine: Till et Mc Culloch, 1961

 Irradiation 1000 rads

 Destruction MO: aplasie médullaire mortelle
 Si injection de MO de souris syngénique:
 Pas d’aplasie médullaire
 Apparition de colonies cellulaires dans la rate (spleen):
 Mixtes (plusieurs lignées hématologiques différenciées)

 Issues de CS injectées, rebaptisées « CFU-S »

(Colony Forming Unit in Spleen)

 Si irradiation du greffon: cassures chromosomiques;
 Cassures retrouvées dans toutes les lignées différenciées

(érythroïde, granuleuses, lymphocytaires, mégacaryocytaires)

d’une même colonie
 Proviennent donc bien d’une même CST
 Preuves humaines:

 Pathologies:
 Leucémie myéloïde chronique:
 Anomalie chromosomique acquise (Ph1)
 Apparaît dans toutes les lignées hématologiques.

 Techniques de culture in vitro: Dexter, 1977

 Cellules médullaires cultivées
sur couche de cellules du microenvironnement médullaire,
en milieu semi-solide,
en présence de facteurs de croissance hématopoïétiques
 Colonie mixte

Granulocytes- Erythrocytes
monocytes
 Caractéristiques des CST:
 Localisées moelle osseuse
 Peuvent passer temporairement dans le sang
 Mobilisation par les facteurs de croissance
 Très rares:
 ~10 clones assurent toute l’hématopoïèse
 Pour la plupart en dehors du cycle cellulaire: G0
 Résistance aux agents cytotoxiques spécifiques du cycle
 Marqueurs immunologiques:
 CD 34 +, CD 38 –
 Marqueurs spécifiques de lignées matures: tous négatifs

 Conservent leurs propriétés de reconstitution de toute

l’hématopoïèse après congélation à -
196°C puis décongélation
2c- Cellules souches engagées: Progéniteurs

 Première étape de différenciation:

 Lignée lymphoïde ou lignée myéloïde ?
 PLC, progéniteur lymphoïde commun
 Cellule souche lymphoïde
 PMC, progéniteur myéloïde commun
 Cellule souche myéloïde
 En culture: CFUc-GEMM
 « Colony Forming Unit
in culture- Granulocytes,
Erythrocytes, monocytes/Macrophages
et Mégacaryocytes »
 Cellules
Souches
Lymphoïdes
PLC

Cellules
Souches
Cellules
Myéloïdes
Souches
PMC
Totipotentes
CFUc-GEMM
CST

Pathologies PLC
LYMPHOIDES

Pathologies PMC
MYELOIDES CFUc-GEMM
 Deuxième étape de différenciation:
 A partir du progéniteur lymphoïde commun:
 Lymphocytes pré-B
 Lymphocytes pré-T

 A partir de la CFUc-GEMM:
 Progéniteur commun des granulocytes neutrophiles et des monocytes-
macrophages:
 CFUc-GM
 Progéniteur commun des érythrocytes et mégacaryocytes:
 CFUc-EM
 Progéniteur des mastocytes:
 CFUc-Mast
 Progéniteur des éosinophiles:
 CFUc-Eo
 Troisième étape de différenciation:
 A partir de CFUc-GM:
 CFUc-G
 Vers myéloblastes, pour polynucléaires neutrophiles
 CFUc-M
 Vers monoblastes, pour monocytes/macrophages

 A partir de CFUc-EM:
 BFU-E puis CFU-E
 Vers érythroblastes, pour réticulocytes / érythrocytes
 CFU-M
 Vers mégacaryoblaste, pour plaquettes
2d- Les précurseurs hématopoïétiques
 Premières cellules morphologiquement reconnaissables
 Plusieurs stades
 Rôle: multiplication/amplification et maturation cellulaire
 Mitoses, étapes de maturations successives
 Les plus immatures: « blastes »
 Myéloblastes (polynucléaires)
 Monoblastes (monocytes)
 Proérythroblastes (érythrocytes)
 Mégacaryoblastes (plaquettes)
 Lymphoblastes (lymphocytes)
 Modifications générales liées à la maturation:
 Diminution taille cellulaire
 Diminution rapport nucléo-cytoplasmique
 Disparition des nucléoles
 Condensation de la chromatine
 Disparition de la basophilie cytoplasmique (baisse ARNm)
 Apparition acidophilie (protéines synthétisées)

 Maturation et modifications spécifiques selon lignées:

 Noyau (segmentation des polynucléaires, lobulation des monocytes)
 Cytoplasme (granulations des granuleux)
 Membrane (protéines membranaires spécifiques: Ac monoclonaux)
CELLULES G0
SOUCHES
CD34+ CD38-
CST CST

G1

CSM CSL
5% des CD34+
CELLULES G0
SOUCHES
CD34+ CD38-
CST CST

G1

CSM CSL

PROGENITEURS
CD34+ CD38+ Pré-T Pré-B

CD7+ CD19+

PRECURSEURS
CD34 -
Lymphoblastes
CELLULES G0
SOUCHES
CD34+ CD38-
CST CST

G1

CSM CSL

PROGENITEURS CFU
CD34+ CD38+ GEMM Pré-T Pré-B

CD7+ CD19+

CFU CFU CFU CFU CD13+

EM Mast Eo GM

PRECURSEURS
CD34 -
Mastocyte Myéloblaste Lymphoblastes
éosinophile
CELLULES G0
SOUCHES
CD34+ CD38-
CST CST

G1

CSM CSL

PROGENITEURS CFU
CD34+ CD38+ GEMM Pré-T Pré-B

CD7+ CD19+

CFU CFU CFU CFU CD13+

EM Mast Eo GM
V
CFU BFU
M E
CD41+
CD36+ CFU
A,B,H E

PRECURSEURS
CD34 -
Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Lymphoblastes
Proérythroblaste éosinophile
CELLULES G0
SOUCHES
CD34+ CD38-
CST CST

G1

CSM CSL

PROGENITEURS CFU
CD34+ CD38+ GEMM Pré-T Pré-B

CD7+ CD19+

CFU CFU CFU CFU CD13+

EM Mast Eo GM
V V
CFU BFU CFU CFU
M E G M
CD41+ CD15- CD15+
CD36+ CFU
A,B,H E

PRECURSEURS
CD34 -
Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes
Proérythroblaste éosinophile neutrophile
2e- Encore plus haut…
 Données:
 Patients greffés: chimérisme tissulaire extra-hématopoïétique !
 Epithélium jugal,…
 Chez la souris greffée:
 Des cellules médullaires peuvent se différencier en cellules épithéliales,
neurones et cellules gliales, muscle squelettique, muscle cardiaque,
cellules hépatiques parenchymateuses, cellules endothéliales;

 Concept de « plasticité » des cellules souches hématopoïétiques

 Patients atteints d’athéro-thrombose sévère:

 Artériopathie sévère des membres inférieurs: l’injection de cellules
souches CD34+ permet d’induire une néo-vasculogenèse
 Concept de « Cellule Progénitrice Endothéliale »
dérivée des cellules souches médullaires: les « Angioblastes »
 Cellules souches de la moelle osseuse:

 CST hématopoïétique

 Cellule progénitrice endothéliale: Angioblaste

 CD34+
 Récepteurs pour facteurs de l’angiogenèse (VEGF,…)

 Cellule souche mésenchymateuse

 CD34-,
 CD46- (protéine membranaire de régulation du complément)
 Intégrine 2 (CD11bCD18) absente
 Différenciation en culture:
 adipocytes, chondrocytes, ostéocytes, cellules
musculaires, cardiomyocytes, cellules neuronales et gliales
 Big Mother :
Cellule Souche Embryonnaire ?

« Hémangioblaste » ?

Cellule
Souche
Cellule
Mésenchymateuse
Souche
Tissus adipeux Endothéliale
CST
Cellules osseuses « Angioblaste »
Cellules musculaires Hématopoïétique
vasculogenèse
Neurones et cellules gliales hématopoïèse
Cellules
Cellules Endothéliales
Sanguines
3- La régulation de
l’hématopoïèse
3a- Principes généraux

 Facteurs cellulaires
 Facteurs de transcription nucléaire
et induction des récepteurs
aux facteurs de croissance
hématopoïétiques
 Facteurs de croissance hématopoïétiques
 Cellules
3b- Facteurs cellulaires hématopoïétiques

Lymphocyte T

Macrophage

Cellules
accessoires

Cellules
Endothéliales
Vasculaires Adipocytes
Fibroblastes
Matrice Extra Cellulaire

Microenvironnement médullaire
3c- Facteurs de transcription nucléaire
et induction des récepteurs aux
cytokines
 Séquence:
 Activation de facteurs nucléaires de transcription
spécifiques de l’induction d’un mode de différenciation des CS
 Action: liaison à la séquence consensus du promoteur d’un gène
codant pour le récepteur d’un facteur de croissance
 Traduction du gène

 Augmentation de l’expression
des récepteurs de facteurs de croissance spécifiques
(=les CSF, colony stimulating factor)

 Effet: différenciation spécifique, maturation, inhibition apoptose

3d- Facteurs de croissance hématopoïétiques

 Soit des cytokines:

 Agissent à très faibles concentrations
 Diffusion très restreinte, action locale par contact entre cellules
productrices et cellules exprimant le récepteur
 Soit des hormones glycoprotéiques
 Synthèse/sécrétion à distance moelle osseuse (Rein,…)
 Mais toutes:
 Fixation récepteur membranaire spécifique, très forte affinité
 Activation d’une signalisation intracellulaire
 Modulation de l’expression génique
 Prolifération, différenciation
 On distingue:
 Les cytokines ayant une action de facteur de promotion:
 Action sur les CS primitives
 Passage des cellules souches de G0 en G1
 Ex: SCF stem cell factor, IL-1, IL-4, IL-6,
 Les cytokines ayant une action de facteur de croissance hématopoïétique
multipotent
 Action sur les progéniteurs précoces (activité CSF, survie)
 Ex: GM-CSF facteur de croissance des granuleux et monocytes/macrophages
 Les cytokines ayant une action de facteur de croissance hématopoïétique
restreint
 Facteurs de différenciation terminale (CSF) et de maturation
 M-CSF monocytes/macrophages, G-CSF granuleux
 IL4 basophiles/mastocytes, IL5 éosinophiles
 EPO érythropoïétine, TPO thrombopoïétine
 G0
CST CST

G1
SCF
CSM CSL
Facteur de
promotion CFU
GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V

CFU BFU CFU CFU

M E G M

CFU
E

Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Proérythroblaste éosinophile neutrophile
 G0
IL-1 CST CST

IL-4 G1
IL-6
CSM CSL
Facteurs de
promotion CFU
myéloïde GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V

CFU BFU CFU CFU

M E G M

CFU
E

Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Proérythroblaste éosinophile neutrophile
 G0
CST CST

G1
Facteur
multipotent CSM CSL

CFU
GM-CSF GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V

CFU BFU CFU CFU

M E G M

CFU
E

Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Proérythroblaste éosinophile neutrophile
 G0
CST CST

G1
Facteurs
restreints CSM CSL

CFU M-CSF
GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V

CFU BFU CFU CFU

M E G M

CFU
E

Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Proérythroblaste éosinophile neutrophile
 G0
CST CST

G1
Facteur
restreint CSM CSL

CFU G-CSF
GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V

CFU BFU CFU CFU

M E G M

CFU
E

Mégacaryoblaste Mastocyte Myéloblaste Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Proérythroblaste éosinophile neutrophile
 G0
CST CST

G1
Facteurs
restreints CSM CSL

CFU
GEMM Pré-T Pré-B

CFU CFU CFU CFU

EM Mast Eo GM
V V
TPO CFU BFU IL-5 CFU CFU
M E G M

CFU
IL-4
E

Mégacaryoblaste EPO Baso Eo Myéloblaste Monoblaste? Lymphoblastes

Eblastes neutrophile
 4- L’exploration
de la moelle osseuse hématopoïétique
4a- Exploration morphologique directe
 Le myélogramme
 Ponction osseuse / aspiration de la moelle osseuse
 Sternum, os iliaque,…
 Trocart de Mallarmé
 Frottis, séchage, coloration
 Liquide de culture pour caryotype / biologie moléculaire
 Analyse de la composition cellulaire au microscope

 La biopsie ostéo-médullaire (B.O.M.)

 Carotte d’os hématopoïétique
 Os iliaque, anesthésie locale
 Trocart de Tanzer, de Weiss, de Jamshidi, …
 Fixation, décalcification, inclusion, coupe, coloration
 Analyse histologique
Aspiration médullaire
Biopsie ostéo-médullaire
Propriétés MYELOGRAMME B.O.M.
Facilité: +++ +
Analyse cellules: +++ +
Délai résultats: +++ +
Richesse moelle: + +++
Fibrose: - +++
Architecture: - +++
Cellules souches: - -
 Faible
Grossissement

Myélogramme
Frottis
Grossissement
moyen

Forts
grossissements
Myélogramme:

 Lignées Granuleuses  Eléments non-myéloides

 50 à 70%  < 25%
 Myéloblastes < 3%  Lymphocytes < 20%

 Plasmocytes < 4%
 Eo et Baso < 4%

 Lignée Erythroblastique
 10 à 30%
 Lignée Mégacaryocytaire
 Présents
 Monocytes macrophages
 < 2%
 Hyper-
Cellularité B.O.M.
Hyperplasie
Cellularité
N°

Os

Hypo-
Cellularité Relation
Hypoplasie âge
cellularité

Fibrose m
médullaire

Métastase
osseuse
K sein
4b- Exploration des cellules souches

 Exploration des cellules souches totipotentes:

 Numération des CD34+, CD38-
 Moelle; cytométrie de flux, anticorps monoclonaux
 Culture selon technique de Dexter

 Exploration des progéniteurs: cellules souches

engagées:
 Numération des CD34+
 Cultures de progéniteurs
 CD34+, CD38+
Progéniteurs
engagés

CD34-, CD38+
Précurseurs

Moelle