CHAPITRE 7 :LECOMPETURDHEMATOLOGIE

CHAPITRE7 LE COMPETUR DHEMATOLOGIE

Objectifs pdagogiques :

- Dcrire les principes de fonctionnement des automates

dhmatologie
- Dcrire les principales parties dun
compteur dhmatologie

- Dcrire les bonnes pratiques dutilisation dun automate
d hmatologie
dhmatologie
- Dcrire les procdures dentretien courant des compteurs
dhmatologie
g
I- Gnralits

Les compteurs dhmatologie ou automates dhmatologie sont des

appareils plus ou moins complexes utiliss pour la ralisation de
l hmogramme.
lhmogramme
Lhmogramme est l'tude cytologique quantitative et qualitative du
sang circulant. Il comprend :
- la
l dt
dtermination
i ti d des nombres
b absolus
b l d de globules
l b l rouges, d de globules
l b l
blancs et des plaquettes ;
- Lee dosage de lhmoglobine
og ob e ;
- la mesure de lhmatocrite ;
- le calcul des constantes rythrocytaires : VGM, TCMH et CCMH ;
- ltablissement po
pourr les glob
globules
les blancs de la form
formule
le le
leucocytaire
coc taire
donnant les pourcentages des diffrents types de leucocytes :
polynuclaires
p y neutrophiles,
p p
polynuclaires,
y osinophiles,
p basophiles,
p
lymphocytes.
Il faut noter que la plupart des automates calcule l'hmatocrite partir
de la numration des globules rouges et du volume globulaire moyenmoyen.
 II Principesdecomptageetdemesuredescompteursdhmatologie
Ilexisteessentiellementdeuxprincipesdecomptageutilissparles
automatesd'hmatologieutilissparleslaboratoires.
'h l l l l b
II1 Lavariationdimpdance
AAppelencore,principeCoulterdunomdesoninventeur:Elleestla
l i i C l d d i Ell l
mthodederfrence.
LL'appareil
appareilutiliselesvariationsd
utilise les variations dune
unersistancelectriqueafindedterminer
rsistance lectrique afin de dterminer
latailledescellulessanguines.
Lescellulesenpassanttraversuneouverturedplacentunvolumegalde
fluideconducteur.Deplusuncourantlectriqueestappliquauniveaude
cetteouverture.Chaquepassaged'unecelluletraversl'ouvertureprovoque
alors une augmentation de la rsistance lectrique Cette augmentation est
alorsuneaugmentationdelarsistancelectrique.Cetteaugmentationest
traduiteenimpulsionslectriquesdontlahauteurestdirectement
proportionnelleauvolumecellulaire.Ladterminationdelatailledelacellule
estdoncbasesurledplacementduliquideetonobtientparconsquent
lamesureduvolumecellulaire(c'estdireleVGM)directement.
Lenombredeglobulesrougesestdterminparletotald
Le nombre de globules rouges est dtermin par le total dimpulsions
impulsions
enregistres.Letauxdhmatocriteestalorsdduitselonlaformule:
Ht=GRxVGM/10.
 PRINCIPEDEMESUREPARLAVARIATIONDIMPEDANCE

Lgende
1 : Electrode Positive
2 : Electrode Ngative
3 : Capillaire de mesure
4 : Globule
5 : Flux aspirant
6 : Sang entier dilu

BGB BGR
 PRINCIPEDEMESUREPARLAVARIATIONDIMPEDANCE
LavaleurdelimpulsionUestproportionnelleauvolumecellulaire

El t d iinterne
Electrode t I= constante
I=constante

Vide rgul U=RI etR=l /s

Bacde
comptage Electrode
externe 1impulsionU=
1particule
l

Saphirperc
dunmicro
orifice U

Fl de
Flux d diluant
dil t conducteur
d t

Microorifice, Impulsion Temps

surface s
surfaces

Diamtre4mm
II-2: La mesure optique

Elle associe la cytomtrie en flux et la diffraction lumineuse. La

source de lumire peut tre un laser ou une lampe au tungstne
La cytomtrie en flux consiste globalement faire dfiler une
une des cellules devant un faisceau laser. Plus p prcisment,, on
utilise d'abord un systme d'hydrofocalisation qui va permettre de
canaliser les cellules et de les faire passer en file indienne. Lors
d leur
de l passage travers
t le
l llaser, elles
ll mettent
tt t ddes signaux
i
lumineux qui sont analyss par l'ordinateur associ au cytomtre.
Ces signaux peuvent tre de plusieurs natures comme par
exemple une diffraction de la lumire par la cellule qui est alors
lie sa taille ou un signal
g de fluorescence mis spontanment
p
par la cellule ou parce qu'elle a t marque par un antigne, une
coloration...
PRINCIPEDEMESUREPARMETHODEOPTIQUE

Diluant Diluant

Cellule SOURCE
photolectrique

Diluant
l Diluant
Echantillon
 H d f
Hydrofocalisation
li ti

Flux FOCALISATION
de
HYDRODYNAMIQUE
gainage
Flux Flux
de d
de
gainage gainage
Fluxchantillon Flux
chantillon
Diffractionlumineuse
Intensitdelalumirediffractepeuttrecorrledescaractristiques
morphologiquescellulaires:
Intensitdelalumirediffracte parlacellule,recueilliedansl'axedelalumire
incidente dite "diffraction
incidente,dite diffractionauxpetitsangles
aux petits angles" (26),(FALSForwardAngleLight
(2 6) (FALS Forward Angle Light
Scatter,ouFSCForwardScatterChannel),estenrelationproportionnelleavecla
taillecellulaire,laformecellulaire,etlindicederfractioncellulaire
Intensitdelalumirediffracte parlacellule,recueilliede8 90 del'axedela
lumireincidente,"diffractionauxgrandsangles", (RALSRightAngleLightScatter,ou
SSC Side Scatter Channel) est relation proportionnelle avec l'htrognit
SSCSideScatterChannel),estrelationproportionnelleavecl htrognitdu
du
contenucellulaire,prsence/absenceettailledegranulationcytoplasmique,forme
ettailledunoyau,rapportN/C,densitchromatiniennedunoyau,ceParamtreest
appel Granularit
appel

Dtectionauxpetitsangles:
p g
Taille

Dtectionauxgrandsangles: Granularit
 II3:Mesuredelhmoglobine
g
Lhmoglobineestdoseparmthode
spectrophotomtrique(525550nm)aprslalyse
h i (525 550 ) l l
deshmaties.

Echantillon Diluant + lyse

LED Optique Cellule de mesure Photodtecteur

 II-4: Principe de mesure de lhmatocrite
La hauteur de limpulsion
l impulsion engendre par le passage dune
d une cellule dans le
micro orifice est directement proportionnelle au volume de la cellule analyse.
Lhmatocrite est mesure en fonction de lintgration numrique du volume
globulaire moyen (VGM)
(VGM).

Total volume VT

Centrifuge

VT
HCT (%) = V / VT x100

V
III PRESENTATIONDECOMPTEURSDHEMATOLOGIE
ETDEQUELQUESPARTIESIMPORTANTES

Figure 2
Figure 1

SYSMEXXP300 SYSMEXXT
Figure 3 : Modle de bacs de comptage de GR et GB
 a. Prsenter verticalement
le tube dchantillon
d chantillon et
actionner en mme temps
laspiration

Figure 4 : Aspiration automatique de lchantillon

 b. Attendre la rentre
b
de laiguille
daspiration
p et retirer
verticalement le tube
dchantillon

Figure 5 : Retrait du tube dchantillon de laiguille daspiration

Figure 6 : Modles de systmes daspiration

6-a- Assemblage de seringues

sans cartouche de protection

6-b- Assemblage de seringues avec

cartouche de protection soufflets

6- c- Pompes pristaltiques
Figure7 :Modesdeprsentationdesractifsducompteur
dhmatologie

7-a : Un compartiment de lappareil peut

contenir une solution de lyse et de
nettoyage Le diluant tant a lextrieur
nettoyage. l extrieur

7-b
7 b : Un pack ou carton de ractifs
peut contenir le diluant, la lyse et la
solution de nettoyage
 IV Lesbonnespratiquesdutilisationdescompteurs
dh t l i
dhmatologie

Utiliser toujours un onduleur avec prise de terre pour llalimenter

alimenter
Permettre une bonne circulation dair autour de lappareil
(50 cm du mur)
Allumer lappareil et attendre environ 10 minutes avant son emploi
Vrifier quil ny a pas de bulles dair dans les tuyauteries de ractifs
Vrifier toujours les fuites de ractifs dans le circuit hydraulique
Vrifier toujours les fuites dair ou de vide dans le circuit
Eviter les allumages et extinctions intempestives
Eviter la pollution des ractifs par la poussire
Ne pas tirer sur le bec daspiration aprs aspiration
Mlangez
Mlangez soigneusement llchantillon
chantillon avant emploi
Passer de temps autre le sang de contrle
Observer toujours la procdure darrt de lappareil
V Procduresdentretienduncompteurdhmatologie
Seconformertoujoursauxrecommandationsdufabricant
51 Entretienjournalier
j
Nettoyerrgulirementlecorpsdelappareil
Nettoyerlappareilavantetaprslanalyseavecdeleaudistille
Nettoyerlappareilaveclasolutiondenettoyageprconise
Essuyertoutetracedesang
5 2 Entretienhebdomadaire
52 Entretien hebdomadaire
Effectuerunrinageavecunesolutiondtergenteoufongicide
Nettoyageetrinagedesbacsdemesure
y g g
53 Entretiensemestriel
Remplacerlescordonsdespompesdelappareil
54 Entretienannuel
Remplacerlestuyauterieshydrauliques
Remplacer les cordons des pompes
Remplacerlescordonsdespompes
Remplacerlesjointsdesseringues
VI PRATIQUE :
VI-

Prsentation
P t ti dun
d automate
t t dhmatologie
dh t l i
Instructions avant et aprs utilisation quotidienne
Instructions
I t ti h bd
hebdomadaires
d i
Instructions mensuelles
Instructions
I t ti t
tous l six
les i mois
i
Changement de ractifs
Remplacement
R l t de
d tuyaux
t
Nettoyage gnral