BILAN PERSONNEL ET

PROFESSIONNEL

STAGE EN ENTREPRISE

Par Elodie BETARD

GB1
Groupe C
27/07/2010
 Sommaire
● Présentation du stage
● Planning/déroulement de la semaine de stage
● Objectifs du métier de technicien en analyses biomédicales
● Cadre et conditions de travail
● Circuit d'un échantillon
● Secteurs et techniques
● Bilan
● Remerciements

27/07/2010
 Présentation du laboratoire
Laboratoire d'analyses de biologie médicale Bernez
●
Secteur d'activité (privé) : analyse médicale
●
Localité : Patay (45)
●
Directeur : Patrick Bernez
statut : Biologiste-Pharmacien
●
Nombre d'employés : 5 ( dont 1 comptable, 1
secrétaire, 2 techniciennes, 1 femme de ménage)

●
Période de stage : du 9 au 13 février 09
27/07/2010
 Le déroulement du stage
● Lundi : présentation du laboratoire, secteur chimie
● Mardi : secteurs bactériologie et hématologie
● Mercredi : secteurs bactériologie et hématologie
● Jeudi : secteur chimie
● Vendredi : tous les secteurs, majorité chimie
Remarque : les techniciennes ont leur propre secteur mais s'autorisent elles-même (sans
concertation avec le biologiste) à changer de temps à autre.

27/07/2010
 Objectifs du métier de technicien
en analyses biomédicales
● Effectuer des prélèvements sanguins (sous la responsabilité du pharmacien biologiste) [nécessite
l’obtention du certificat de capacité]

– Sur RDV, prescription du médecin ou à la charge du patient

● Traitement des échantillons, analyse des prélèvements et validation techniques des résultats

– Rendement : 50 échantillons en moyenne par jour

● Maintenance courante et préventive des appareils

● Communication des résultats aux autres services, aux médecins traitants,…

– Ici collaboration avec 3 médecins, une maison de retraite, et plusieurs infirmières.

● Accueil et encadrement des étudiants et des stagiaires

– Le laboratoire Bernez reçoit régulièrement de nouveaux stagiaires de tout niveau d'étude

27/07/2010
 CADRE & CONDITIONS DE
TRAVAIL
Bactériologie

Chimie

Hématologie
/ Vestiaire +
Coagulation local de stockage

Salle de Bureaux
prélèvement
Accueil

REZ DE CHAUSSEE L'ETAGE

27/07/2010
 Circuit d'un tube
1/ PRELEVEMENT
SANGUIN

2/CENTRIGUGATION

4/RESULTATS 3/Analyse

27/07/2010
 Secteurs et techniques (1)
Bactériologie
● Pas de machine-techniques manuelles
uniquement

● Analyses majoritaires: urines (90%)

● Autres analyses: pu, selles, etc.

● Technicienne gère son stock seule

● Préparation de quelques milieux (EMB)

● Milieux de cultures principaux : milieux

chromogènes (gain de temps:24h)

● LE BUT: privilégier la détermination de la

résistance du germe plutôt que sa nature

27/07/2010
 Quelques techniques
Bactériologie
PARA-SELLES/KOP-COLOR FUMOUZE par Fumouze Diagnostics
● But : Examen direct des éléments parasitaires dans les selles par coloration au Kop color Fumouze

● Principe: En utilisant le Kop-Color Fumouze (procédé de coloration différentielle des éléments parasitaires
par un mélange de colorant dont le lugol) on détecte facilement les éléments parasitaires colorés en jaune,
jaune orange ou jaune brun sur fond bleu

● Mode opératoire:

➔ 1/ Homogénéiser les selles

➔ 2/ Prélever une volume de selles (=un petit pois) et le déposer dans un tube à hémolyse contenant
1 mL de diluant(eau physiologique, eau distillée ou autre ...)
➔ 3/Agiter pour obtenir une suspension homogène (type vortex)
➔ 4/Déposer 10 µL de Kop color Fumouze sur une lame
➔ 5/A l'aide d'une pipette pasteur ajouter 1 goutte de la suspension de selles à examiner

27/07/2010
➔ 6/Observer au microscope
 Quelques Techniques
IMMUNOLOGIE
INNOTEST par Innogenetics
● BUT: test immuno enzyme destiné à la détection des anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C

● PRINCIPE: Les puits d' une microplaque contiennent préalablement un mélange d'antigènes HCV.
L'échantillon à tester est à incuber dans ces puits. Si l'échantillon possède des anticorps anti HCV, ceux si se
fixent à la phase antigénique solide. L'ajout d'un anticorps de lapin purifié (anti IgG humaine marqué à la
peroxydase de raifort) provoque une réaction positive s'il se fixe au complexe Ag-Ac. L'incubation avec le
substrat de l'enzyme produit une coloration bleue qui vire au jaune après l'ajout d'acide sulfurique. Dans le
cas contraire l'Ac marqué ne peut se fixé , seule une coloration légère de fond se développe.

● PROCEDURE: 1/ Distribuer 200 µL de DILUANT ECHANTILLON dans chaque puits. 2/Ajouter 20 µL

d'échantillon ou de contrôle aux puits appropriés. 3/Couvrir les barrettes avec une feuille adhésive. 4/
Incuber 1h à 37°C. 4/ 6 lavages . 4/Distribuer 200µL de SOLUTIONS DE TRAVAIL CONJUGUE. 5/Couvrir
avec une feuille adhésive. 6/Incuber 1h à 37°C. 7/ 6 lavages. 8/ Distribuer 200µL de Solution Substrat. 9/
Incuber 30 min à température ambiante à l'obscurité. 9/ Ajouter 50 µL de SOLUTION D'ARRET. 10/ Lecture
d'absorbance à 450 nm

27/07/2010
 Secteurs et techniques (2)
Hématologie

● Automate ABX PENTRA 60 relié à l'ordinateur

● Contrôle journalier ( rinçage avec le « blanc »

pendant 5min pour vérifier si présence saletés)

● Calibration si réactifs sont dépassés

● Automate contrôle la quantité et la taille des globules

rouges, globules blancs, et plaquettes en sachant que :

taille : plaquettes<gl. rouges<gl. Blancs

● Résultats sous forme de graphe et de pourcentage.

27/07/2010
 Quelques techniques
Coagulation
DOSAGE DE LA FIBRINE par AMAX
● Intérêt du dosage :Le fibrinogène est une protéine fabriquée par le foie qui est transformée en fibrine lors de la coagulation pour
aboutir à la formation d'un caillot. La production de fibrinogène est augmentée dans les états inflammatoires. Il existe des défauts
de production du fibrinogène (rares) ; son taux peut également être diminué en cas de défibrination.

● Principe de Clauss : quand le plasma dilué coagule en présence d'excès de thrombine(enzyme qui transforme le fibrinogène en
fibrine), la concentration en fibrinogène est inversement proportionnelle au temps de coagulation obtenu. La concentration en
fibrinogène est déterminée grâce à la droite d'étalonnage à l aide d'un fibrinogène de référence.

● Mode opératoire : 1/ reconstituer le réactif Thrombine. 2/Placer une bille dans chaque cuvette. 3/Introduire 100µL d'échantillon
dilué dans chaque cuvette. 4/Incuber entre 1 et 3 min. 5/ Introduire 50 µL de réactifs dans chaque cuvette. 6/Enregistrer le
temps de coagulation en seconde. 7/Lire la valeur de fibrinogène correspondante sur la courbe d'étalonnage

● Valeurs normales : entre 2 et 4 g/L

– Si faible : insuffisance hépatique sévère, fibrinolyse primitive ..

– Si élevé : syndrome inflammatoire: infections, cancers,...

27/07/2010
 Secteurs et techniques (3)
Chimie
Konelab

● Peu de manipulations

● 3 automates+ 1 centrifugeuse
Mini Vidas
● Automate à ionogramme: analyse la concentration en électrolytes d'un liquide
organique (sang, urine, liquide cephalo-rachidien) afin de dépister les troubles
ioniques qui surviennent dans les maladies rénales, hormonales ...Cette analyse
fait partie des éléments de surveillance d'un malade sous traitement.

● Le mini VIDAS : peut traiter jusqu'à 12 échantillons simultanément. Système

automatique de dosage immunologique. Calibration tous les 15 jours. Possibilité
d'effectuer plusieurs dosages différents en même temps. Réactifs dans une dose
unique.

– Ex: taux d'oestrogènes, de TSH, VIH, .. .

● Le konelab 20Xti : analyseur sanguin biochimique

Automate à
27/07/2010
IONOGRAMME
 Quelques techniques
TEST DE GROSSESSE Chimie
● Manipulation facile et rapide

● BUT: Immunodosage qualitatif de la

gonadotrophine chorionique humaine
(hCG) dans le sérum et l'urine pour la
détection précoce de la grossesse.

● Principe: Sérum ou urine est ajouté à l'aide d'une pipette

de transfert. Migration à travers la membrane. Celle-ci
mobilise l'anticorps monoclonal anti-hCG colloïde. Si l'hCG
est présente dans l'échantillon : formation d'un complexe avec
l'anticorps anti-colloïde. Les anticorps colloïde complexe
migre à travers la membrane et est captée par l'immobilisation
d'anticorps polyclonaux anti hCG dans la fenêtre de résultat,
en fournissant une indication visuelle de la présence d'hCG.
Ici résultat négatif
Lecture à t=5 min. Signe (+): hCG présent. Signe moins (-):
aucun hCG n'a été détecté.
27/07/2010
 Bilan
● Mon choix : pourquoi ce laboratoire?
● Qu'est-ce que j'ai appris?
● Que savais-je déjà?
● Conséquences du stage (impact sur mon orientation):
– GENERAL
– PERSONNEL
conclusion : perspective emploi, orientation...

27/07/2010
 Remerciements

à M. Bernez, et son personnel pour

m'avoir permis d'effectuer ce stage

27/07/2010