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BIOCHIMIE CLINIQUE

2ème Année de Médecine

Pr. Mohammed Choukri


Cours 40h Année: 2021/2022
Objectifs généraux
Objectifs spécifiques et programme
Objectifs généraux
A la fin du cours l’étudiant doit être capable de :

-Connaitre l’organisation, le fonctionnement d’un laboratoire et les notions de bases


de l’assurance qualité en Biologie Médicale.

-Expliquer le fonctionnement biochimique de divers organes (foie, reins, pancréas,


glandes endocrines...).

-Décrire les principales voies métaboliques en identifiant les métabolites et les


marqueurs biologiques d’intérêt clinique.

-Evoquer les examens biochimiques nécessaires devant un contexte clinique précis.

- Comprendre les principes des techniques utilisées en biochimie clinique pour


évaluer ces marqueurs et les conditions de validité des résultats.

-Connaître l’ordre de grandeur des valeurs usuelles (normales) et les limites de


variations compatibles avec la vie.

-Intégrer les résultats de laboratoire dans leur contexte physiopathologique et


clinique.

-Discuter l’étiopathogénie et la physiopathologie des désordres biochimiques.


Objectifs spécifiques et programme
Biochimie clinique (1)

1. Introduction à la Biochimie Clinique

2. Exploration biochimique de l’équilibre hydroélectrolytique et acidobasique:


-Etude des ions sodium, potassium et chlorure dans le sang, les urines, le
L.C.R et la sueur.
-Etude des gaz du sang.
-Etude des bicarbonates sanguins : réserve alcaline, troubles acido-basiques.
-Exploration du métabolisme phosphocalcique.
-Etude du magnésium plasmatique et érythrocytaire.
Biochimie clinique (2)

3. Etude biochimique des protéines, des acides aminés, des enzymes sériques et
des immunoglobulines:
-Etude des protéines dans le sang, les urines et le L.C.R.
-Etude des protéines spécifiques sériques.
-Etude des immunoglobulines
-Etude des acides aminés

4. Etude des enzymes sériques :


-Les transaminases - intérêt dans les atteintes cardiaques et hépatiques
-Lactate déshydrogénase - iso enzyme - intérêt séméiologique
-Créatine phosphokinase - iso enzyme - intérêt séméiologique
-Gamma-glutamyl-transférase - intérêt en hépatologie
-Les phosphatases alcalines et Phosphatases acides
-Ornithine carbamyl transférase
-5’ Nucléotidase
-Amylase et lipase
Biochimie clinique (3)
5. Etude des composés azotés non protéiques :
-Exploration du métabolisme des ions ammonium
-Exploration du métabolisme de l’urée
-Etude de la créatine et de la créatinine : intérêt séméiologique
-Etude de l’acide urique -classification des hyperuricémies
-Etude des bilirubines plasmatiques - classification des ictères

6. Exploration biochimique du métabolisme des glucides :


-Détermination du glucose dans les milieux biologiques
-Diagnostic biologique des diabètes sucrés
-Surveillance biologique du diabète
-Exploration biochimique des hypoglycémies
-Complications métaboliques des diabètes sucrés : comas acidocétosiques,
comas lactiques et comas hyperosmolaires.
-Glycogénoses
-Galactosémies congénitales
-Fructosémie congénitale
-Intolérances aux disaccharides du nourrisson et de l’adulte
Biochimie clinique (4)
7. Exploration biochimique du métabolisme lipidique :
-Les lipoprotéines
-Classification des dyslipoprotéinémies
-Athérosclérose
-Anomalies du métabolisme des sphingolipides : sphingolipidoses
-Déficits enzymatiques du métabolisme des lipides

8. Les insuffisances rénales.

9. Le Syndrome néphrotique.

10. Le Foie :
-Les hépatites aigues et chroniques.
-La cytolyse hépatique
-La cirrhose
-L'insuffisance hépato cellulaire
- L’ictère.
Biochimie clinique (5)
11. Le syndrome coronarien aigue (SCA).

12. Exploration biochimique de la glande thyroïde.

13. Exploration biochimique des parathyroïdes.

14. Exploration biochimique de la médullosurrénale.

15. Exploration biochimique des corticosurrénales.

16. Exploration biochimique des testicules endocrines.

17. Exploration biochimique des ovaires :


-Dosage des œstrogènes sanguines et urinaires
-Dosage de la progestérone sérique et de ses principaux métabolites
-Fertilité
-Exploration biochimique de l’unité foetoplacentaire- diagnostic biologique de
la grossesse
- Marqueurs de la pré-éclampsie
-La ménopause.
Biochimie clinique (6)

18. Le métabolisme du fer, hémoglobinopathies et porphyries

19. Le Syndrome inflammatoire

20. Le syndrome métabolique

21. Stress oxydant et biochimie clinique du vieillissement

22. Les marqueurs tumoraux


Introduction à la Biochimie Clinique
Introduction à la Biochimie Clinique
Plan

Le Laboratoire de Biochimie Clinique


Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
Le Laboratoire de Biochimie Clinique
• Biochimie Clinique/ Chimie clinique/Biochimie
pathologique/Biochimie médicale…

• Branche de la médecine de laboratoire (Biochimie,


Hématologie, Microbiologie, Immunologie,
Parasitologie, Mycologie, Génétique, Biologie
moléculaire, Sérologie, Pharmacologie,
Toxicologie…)

• La biochimie clinique associe la chimie


physiologique, la chimie séméiologique ou
pathologique et la biologie moléculaire.

• Etude des maladies en appliquant des méthodes


de chimie, de biochimie et de biologie moléculaire;

• Biochimie représente plus d’un tiers des


investigations de laboratoire.
Patients Patients
Hospitalisés Restauration
Externes
Repos

Réception des Vestiaire


Accueil
échantillons

Attente Laverie
Salle de tri des
Salle de prélèvement échantillons

Sanitaire Echantillothèque
Stock réactifs Salles techniques
et consommables d’analyses
Salle pour
Compte rendus déchets
Secrétariat
Compte rendu

Elimination

Informatique
Biologistes Responsable
Archives
Biologiste
Chef du laboratoire

Biologistes Major
Résidants Responsable Gestion du Personnel
Qualité
Internes Gestion du stock

Techniciens
Préleveurs
Secrétaires
Coursiers
Agents de surface
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
Biomarqueur

Définition (HAS)
Caractéristique objectivement mesurée et évaluée comme un

indicateur de processus biologiques normaux ou pathologiques, ou

de réponses pharmacologiques à une intervention thérapeutique.


Marqueur Biochimique (1)

Définition
Composé présent dans les liquides
biologiques dont les teneurs chez un
ensemble homogène de malades, sont
statistiquement suffisamment
éloignées de celles d’un ensemble de
sujets sains donnant un caractère
discriminant à sa mesure.
Exemples:
-Enzymes: baisse, augmentation,
absence de l’activité enzymatique
-Métabolites: glucose, créatinine,
bilirubine…
-Marqueur tumoral
-Hormone
-Récepteur membranaire…
Marqueur Biochimique (2)

Mécanisme de variation d’un marqueur biochimique


Cas d’un métabolite:
• Anomalie de synthèse
• Anomalie d’un transporteur
• Barrage métabolique
• Dérégulation d’adaptation des gènes
Cas d’une protéine
• Surexpression
• Mort cellulaire
• Souffrance cellulaire
• Sécrétion
• Protéases extracellulaire
Marqueur Biochimique (3)

Différentes catégories de marqueurs


Marqueur de risque:
• Fait partie du mécanisme initial créant la maladie
• Intérêt dans les études épidémiologiques
Ex: Cholestérol LDL et athérosclérose
Marqueur d’exposition:
• Mesure l’exposition d’un individu à un agent toxique
Ex: tabagisme: dosage de la cotinine
alcoolisme: gamma glutamyl transférase (GGT)
Dosage du benzène dans les sang
Marqueur de l’immunité:
Ex: Marqueur d’une infection (AgHBs dans l’hépatite B)
Statut vaccinal
Détoxification (cytochromes, Glutathion transférases…)
Réparation de l’ADN
Marqueur Biochimique (4)

Différentes catégories de marqueurs (suite)


Marqueur de la nutrition
• Carence, normal, excédent
Ex: Dosage du nutriment dans le sang (vitamine B12, Folates…)
• Dosage d’un métabolite
• Activité enzymatique
Marqueur du polymorphisme génétique:
• Progrès de la biologie moléculaire et de la génétique
• Mutation ponctuelle, délétion, répétition…
• Application: Maladies héréditaires
Médecine légale
Recherche pharmaceutique
Marqueur Biochimique (5)

Différentes catégories de marqueurs (suite)


Marqueurs diagnostiques
• Aider le clinicien à établir un diagnostic
• Marqueurs précoce et marqueurs tardifs
Ex: Marqueurs cardiaques dans l’IDM
Marqueurs du suivi thérapeutique
• Evaluer l’efficacité d’un traitement
• Adapter la dose et la durée du traitement
• Toxicité: arrêt du traitement
• Ex: Dosage d’un paramètre biochimique (glycémie)
Dosage du médicament ou ses métabolites (ATB)
Marqueur de pronostic:
But: Evaluer: -Degré de gravité
-Rapidité d’évolution
-Chance de guérison ou de survie
-Peser le rapport bénéfice/risque
Diagnostic Traitement

Marqueur
biochimique

Dépistage Pronostic
Dépistage Diagnostic
Screening
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
Définition
Ensemble d'étapes successives allant de la prescription au compte rendu
final qui nécessitent une surveillance permanente (assurance qualité).

Etape 1: Phase préanalytique


-Prescription
-Prélèvement
-Transport
-Réception du prélèvement par le laboratoire
-Identification, enregistrement, conformité
-Prétraitement, aliquotage, conservation …

Etape 2: Phase analytique


C’est l'étape technique proprement dite avec tous les éléments du traitement de
l'échantillon.

Etape 3: Phase post-analytique


-Analyse des résultats bruts
-Validation des résultats;
-Compte rendu, Commentaire, interprétation
-Archivage
Prescription
L’ordonnance ou le Formulaire de
demande d’examen
Il doit mentionner:
• Nom, prénom, age et le sexe +/-
origine
• Identité de l’établissement
demandeur
• Service/clinique/cabinet/adresse
• Nom et signature (cachet) du
médecin demandeur (numéro de tél
pour les demandes urgentes)
• Nom de(s) examen(s) demandé(s).
• Nature, date et heure du
prélèvement.
• Diagnostic ou RC (renseignements
cliniques)
• Traitements médicamenteux en
cours
Prélèvement
• Prélèvement : acte de soin qui consiste à prélever un
échantillon biologique en vue de la réalisation d’une
analyse de biologie médicale.

• Objectif : réaliser un prélèvement de qualité, dans des


conditions d'hygiène et de sécurité pour le patient et le
personnel, en respectant les modalités pré-analytiques
propres à chaque paramètre à analyser.

• Indication : sur prescription médicale ou à la demande


du patient.

• Le préleveur identifie le prélèvement avec le Nom de


naissance, le prénom, la date de naissance le sexe du
patient et le nom d’usage.
Les milieux biologiques (1)
Sang
Les différents tubes utilisés:
Tube Sans anticoagulant:
• Tubes " secs« (+/-) (bouchon rouge) + activateur de la
coagulation : Biochimie, sérologie;
• Tubes avec gel de polymère séparateur de sérum
(bouchon jaune) : Sérologie +++
Tube avec anticoagulant:
Tube hépariné (bouchon vert) → Biochimie
Tube EDTA (bouchon violet) → BM, Hémoglobine
Tube fluoré (bouchon gris) → cycles glycémiques
Définitions
Le sang total : sang + anticoagulant
C’est le plasma et les éléments figurés. Il est utilisé pour
la BM, l’étude de l’hémoglobine, etc.…
Le plasma : sang + anticoagulant + centrifugation
Le sérum : sang sans anticoagulant + centrifugation
C’est le plasma sans le fibrinogène obtenu par
coagulation du sang et rétractation du caillot suivi
d’une centrifugation.
Les milieux biologiques (2)
Ordre et choix des tubes Utilisation

Tube Sec Rouge Biochimie : Acide urique, Albumine, Bilirubine, Calcium, Cholestérol, Cholestérol HDL, Créatinine, CPK, Fer sérique, GGT, Glycémie,
Electrolytes (Na, K, Cl,), LDH, Lipase, Magnésium sérique, PAL, Protides, Phosphore, Transaminases (ALAT, ASAT), Triglycérides,
Urée,…..
Ou Toxicologie : Acide valproïque (Dépakine), Carbamazépine, (Tégrétol) Digoxine, Lithium, Vancomycine, Amikacine, Gentamicine
Tube sec avec gel Hormonologie : Cortisol, FSH, LH, BHCG, Oestradiol, Progestérone, Testostérone, Prolactine, T3, T4, TSH,…
séparateur Jaune Marqueurs Cardiaques : Troponine, CK
Marqueurs Tumoraux : AFP, ACE, CA15-3, CA19-9, CA125, PSA, β2 Microglobuline….
Protéines spécifiques : Apo A1, Apo B, Haptoglobine, Immunoglobulines, Orosomucoïde, CRP, Transferrine, Pré albumine, Electrophorèse
des protéines, Immuno électrophorèse …
Sérologies: Hépatites, HIV, Toxo, Rubéole….
Divers : Folates, Vitamines B12, Ferritine, Fructosamine, CTX sérique, C3, C4, Facteurs Rhumatoïdes, Vitamines D, Insuline
Autoimmunité: Anticorps antinucléaires, Anticorps antithyroïdiens…
Allergie : IgE, IgE spécifiques…

Tube vert Biochimie : Biochimie de routine, contrôle de certains paramètres (potassium)


Héparine Marqueur Cardiaque : NT pro BNP, (Troponine pour contrôle)
de Lithium Divers : Magnésium érythrocytaire, Méthémoglobine, Ammoniémie
Tube violet Biochimie : contrôle de certains paramètres (potassium)
EDTA Biochimie : Hémoglobine glyquée (Hb A1c),
Biologie Moléculaire
En cas de prélèvement difficile, des tubes pédiatriques de plus faibles contenances sont à disposition.
Tube gris Biochimie : Glycémie (conservation optimale), Cycles glycémiques, Alcoolémie, Lactate
avec Fluorure
Les milieux biologiques (3)

Urines
Urines de 24h
• Au lever :Vider la totalité de la vessie dans les
toilettes (temps 0).
• Pendant 24 heures :Recueillir la totalité des urines
dans le flacon jusqu’à l’heure 24 (Recueillir donc les
urines du lever à J+1).
• Analyse de cretains paramètres de biochimie
urinaire (Protéinurie de 24h, créatinine urinaire…)
• Les résultats sont exprimés par 24h
Echantillon urinaire:
Biochimie urinaire ponctuelle (à un moment donné)
NB: on utilise souvent les urines de 24h car la diurèse
est variable au cours de la journée (résultats
imprécis).
Les milieux biologiques (4)
LCR: Liquide céphalorachidien
• Récupéré par ponction lombaire (PL)
dans un flacon stérile sans
anticoagulant
• Courber le dos en repliant les genoux
vers la poitrine
• Ponction entre L3 et L4
• La quantité totale de LCR est de l'ordre
de 150 ml. Il est intégralement renouvelé
toutes les 6 à 8 heures+++.
• Diagnostic: méningite aiguë, méningo-
encéphalites, abcès cérébraux,
myélites...
• Réalisé en urgence pour:
-Analyse cytobactériologique
-Analyse biochimique : dosage du
glucose, des protéines, des ions
chlorure, enzymes…
Les milieux biologiques (5)

Epanchement et liquides:
• Liquide pleural (plèvre): pleurésies
• Liquide d’ascite (cavité péritonéale): infection
• Liquide synovial (cartilage): inflammation
• Liquide intestinal (duodénal)
Autres milieux:
• Sang artériel: gaz du sang
• Sang capillaire:
-Abord veineux difficile: nouveau né et nourrisson
-Protection d'un capital veineux périphérique dans le cas de prélèvements
répétés.
• selles
• calculs
• salive, sueur, ...
Erreurs d’échantillonnage

Technique de prélèvement
-Hémolyse: le potassium est faussement augmenté
-Stase veineuse: concentration de l’échantillon (les protéines sont faussement
augmentées)
-Quantité insuffisante
Erreur de temps (urines temps<< 24h)
Récipient inadéquat (ex: dosage du calcium dans un tube citraté: citrate de
Ca)
Site de prélèvement inadapté (ex: glycémie au niveau du bras perfusé par le
glucosé)
Conservation ou transport incorrect (ex: gaz du sang→ transport à
température ambiante)
Causes d’altérations des prélèvements :
-Evaporation de composants volatils (ex: NH3).
-Lumière (ex: dégradation de la bilirubine).
-Froid.
-Hémolyse (ions érythrocytaires prédominants: K+, P).
-Contaminations microbiologiques (glycorrachie et méningite bactérienne).
Demande urgente
• Toutes les opérations doivent être respectées mais traités avec
urgence
• Acheminement des prélèvements en urgence
-Système pneumatique (cartouches ou télétubes)
-Coursiers (en urgence)
• Numéro de Tél ou fax du médecin demandeur pour communiquer
le résultat le plus vite possible
• Informatisation des services (intranet)
Echantillons dangereux
• VIH, hépatite B..
• Étiquette jaune « échantillon dangereux »
• Système abandonné
• Règle d’or: Tous les échantillons doivent
toujours être considérés comme
potentiellement dangereux.
Examens inutiles
• Pas de règle absolue pour la demande d’un
examen de laboratoire
• Compétence
• Conscience professionnelle
• Organisation et gestion (répétition inutile da la
demande)
• Eviter tout travail inutile sans bénéfice réel pour
le patient
• Parcimonie (réactifs souvent très chers)
Traitement de l’échantillon
• Réception de l’échantillon
• Triage et identification
(numéro, code-barres)
• Prétraitement, aliquotage,
conservation
• Flux: de qlqs
dizaines→plusieurs
milliers/jour
• Contrôle qualité pour toutes
les procédures analytiques
Analyse proprement dite (2)

Performances analytiques :
• Incertitude de mesure: Le résultat
d’une analyse ne peut pas être parfait:
Il est nécessaire de la quantifier pour
une bonne interprétation d’un résultat.
-Précision ou fidélité:
reproductibilité d’une méthode analytique
-Exactitude ou justesse:
définit à quel point la valeur mesurée est
proche de la valeur réelle
-Sensibilité:
la plus petite quantité détectable
-Spécificité:
capacité de discrimination entre la
substance à doser est ses
interférences.
Analyse proprement dite (1)

Principe de dosage:
Dizaines de techniques selon l’élément à doser, le milieu biologique, les
circonstances, équipement….
Matériels :
Appareil, réactifs, étalons primaires, spécimens de contrôle, calibrateurs…
Mode opératoire :
-Préparation de l’appareil, des spécimens, des réactifs, des calibrateurs,
conditions opératoires du dosage
-Mode du dosage: manuel, semi automatique, automatique+++.
Contrôle :
Valeurs cibles, limites d'acceptabilité, limites de rejet, limites d'alerte.
Résultats et Interprétation

Validation
Analyse, traitement, stockage et impression des données
(informatique+++)
Expression des résultats:
-1 chiffre après la virgule (ex: 14→14,1)
- Ou 2 chiffres après la virgule (ex: 14→14,00 et 14,1→14,10)
-Différentes unités:
Ex: g/l (glycémie)
mg/l (calcémie)
g/24h (protéinurie)
% (protéinogramme)
mEq/l ou mmol/l (électrolytes)
Valeurs usuelles : en fonction de l'âge, du sexe, des conditions
physiologiques.
Valeur séméiologique ou pathologique: Diagnostic, dépistage, pronostic,
traitement.
Echantillothèque/ Sérothèque: (stockage des prélèvements précieux)
NB: Une bonne communication et une bonne
coordination entre le prescripteur et le
biologiste permettraient de:
-Supprimer les éventuelles anomalies
résiduelles
- Parfaire l'interprétation
- Optimiser les éventuelles prescriptions
complémentaires
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
Assurance qualité (1)

Conforme (satisfaction aux exigences)

Non conforme
Assurance qualité (2)
Contrôle qualité:
-CIQ, CIE et EEQ : Contrôle des performances analytiques
-Audit interne: Demande de l’audit formulée par le laboratoire
-Audit externe: Demande formulée par un organisme externe : inter-laboratoires,
associations habilitées (National ou international)
Certification: C'est l'existence d'un SMQ (système de management qualité),
répondant aux normes internationales (ex: normes ISO 9000, ISO 9001…)
Accréditation: Reconnaissance de la compétence et de la maîtrise du processus
qualité mis en place, l'accréditation peut être alors délivrée par des organismes
habilités (Maroc: SEMAC, France le COFRAC).
Référentiels:
-ISO 15189 version 2012 : Accréditation des laboratoires de biologie médicale
-ISO 22870 : Accréditation de la Biologie délocalisée
-MAROC: Le GBEA (Guide de Bonne Exécution des Analyses: Septembre 2010)
est opposable à la différence de des référentiels d’accréditation (ISO 15189 et
ISO 22870) qui ne sont pas opposables
GBEA Marocain (: Septembre 2010)
• INTRODUCTION
• CHAPITRE I : ORGANISATION DU LABORATOIRE
– LOCAUX
– INSTRUMENTATION
– CONSOMMABLES
– DMDIV (Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro)
– PERSONNEL
• CHAPITRE II : FONCTIONNEMENT DU LABORATOIRE ET REALISATION
DES ANALYSES DE BIOLOGIE MEDICALE
– PRELEVEMENT-IDENTITOVIGILANCE-IDENTIFICATION-CONSERVATION
– PROCEDURES ET MODES OPERATOIRES
– COMPTE RENDU DES ANALYSES
– TRANSMISSION DES RESULTATS
– TRANSMISSION DE PRELEVEMENT ENTRE LABORATOIRES
– MAINTENANCES DES APPAREILS
• CHAPITRE III : ASSURANCE QUALITE
– CQI: contrôle qualité interne
– EEQ: évaluation externe de la qualité
• CHAPITRE IV : SECURITE ET HYGIENE
NF EN ISO 15189:2012
Cartographie des processus
Schéma du SMQ : Roue de Deming

Roue de
Deming
Schéma du SMQ : Roue de Deming

Méthode 5M ou
7M:
Matière
Matériel
Roue de Milieu
Deming Méthode
Mains d’œuvre
Moyens
financiers,
Management
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
Tests délocalisés
Tests effectués hors du laboratoire:
• Au cabinet médical ou infirmier;
• A la pharmacie;
• A domicile (glycémie);
• Au public (ex: alcoolémie);
• Au niveau d’un poste de soins (ex gazométrie dans le
service de réanimation)
• Avantages: Commodité, résultat rapide, économie (pour
certains)…
• Inconvénients:
-coût
-Responsabilité (compétence)
-Problèmes analytiques (étalonnage, nettoyage,
conservation…)
-Problèmes d’interprétation
A l’hôpital, le biologiste est le responsable de la
biologie délocalisée et il doit jouer le rôle d’expert
dans ce domaine
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Marqueur Biochimique
Examen Biochimique
Assurance qualité
Tests délocalisés
L’avenir
L’avenir
Recherche de nouveaux marqueurs:
• Progrès de l’électronique appliqué,
l’informatisation, les nouvelles technologies et les
techniques de biostatistiques
• Mesure globale d’un ensemble de constituants
biologique
• Résultat: milliers voire des millions d’informations
biologiques pour un même patient
• Biobanque
• Big Data
• IA (intelligence artificielle)

• Exemple: l’ère post-génomique et ses outils


-Gène (génome) par des puces à ADN ou microarrays
-ARN (transcriptome) par des puces à ADNc
-Protéines (protéome) par spectroscopie de masse et
par des puces protéiques
-Lipides (lipidomes) par des puces lipidiques
-Métabolites (métabolome)… Puce à ADN
Facturation
Gestion des
rendez vous Intégration des
résultats

Intégration des images


radiologiques

Sécurité et traçabilité des


informations
Dossier de soins

Communication externe
Prescriptions Exploitation des données Télémédecine, réseaux..
Centralisation et regroupement
Automatisation
Informatisation
Qualité

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