UMUFPN

Examen de Biochimie
Métabolique et Enzymatique
SVI S4 session
rattrapage, sept 2016, 90 min

1) Métabolisme biochimique 6
Rappeler le bilan de la réaction globale de la B oxydation d'un acide gras à 2 ncarbone.
Calculer l'énergie en Kcal emmagasiné sous fome d'ATP quant 1 g de
tripalmitylglycérol est complètement oxydé à 37°C.

I1) Enzymologie i
Le D-mannonate hydrolase catalyselaréaction suivante:

D-mannonate 2-céto, 3-désoxy-D-gluconate + H,0

La reaction est catalysée par une enzyme la D-mannonate hydrolase d' Escherichia Coli en

l'absence et en présence d'un inhibiteur le D-gluconate.

On mesure la vitesse initiale Vi (en umoles de D-mannonate consommé par min et par

litre) pour diffërentes concentrations initiales de D-mannonate.

Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous.

Vi en umoles de D-mannonate consommé /min/litre

D-gluconate en M

Concentration
de M 2. 10 M 3. 10 MM

D-mannonate

10 M 16.7 10 8,33
1,3. 10 M 20 12.5 10,5
2. 10 MA 25 16,7 14,3
2,5. 10 M 27,8 19,2 16,7
5. 10 M 35.7 27,8 25
10.10 M 41,7 35,7 33
 D-gluconate
3 valeurs de
et Burk pour
les
Lineweaver
Alade de la représentation de
Michaelis Km de l'enzyme
et la constate de
Determiner la vitesse maximum Vmax
pour le D-mannonate

la D-mannonate
sur
d'inhibition exercée par le D-gluconate
2) Préciser le type
hydrolase d'E.Coli

3) Déterminer la constate d'inhibition Ki de l'enzyme pour le D-gluconate

III) Question de TTP

On détemine l'activité de la glucose 6 phosphate déshydrogénase G6PDH par

spectrophotomtre UV à 340 nm selon la réaction suivante

G6P +NADP" 6-phosphogluconate +NADPH+H

Le coefficient d'extinction molaire du NADPH+H = 6,3 10* Vmole/cm à 340 nm

Dans une cuve de spectrophotomètre thermostatée à 25°C et de parcours optique 1 cm en

introduit:

-2 ml tampons pH 7,8

0,1 ml MgCl2
- 0,1 mi de NADP

- 0,2 ml de G6P

-0,1 ml de G6PDH

1) Comment on détermine la vitesse initiale en pratique. Justifier le choix des mesures et

des moyens.

2) Donner les conditions pratiques nécessaires pour déteminer la constante Km, donner
la signification de cette constante

Dans ces conditions, on mesure une variation d'absorbance å 340 de

nm 0,087 en 5 min
3) Calculer l'activité enzymatique de la G6PDH en mole//l/mn.
 CAenen9ac mie Rakpe
"&ndqe

sia pan FA
.
adhasoian pay lne adnae
nseee sroalian pan PA

Tih ne kio
FAD
ace Co
--R-- cos FADH

.cC
NABU,

- CAC -CA
NAD co

sacea (n}+ ATP n Co A$H -(n -4) FAD -\m-a)s &S-(m-A) A

m
ac Co ARP PiP + (m4) FADM +\m-A] NADHA

--Co- Coo
Lashuda & hipmilucoad H-o-Co-(C ao
cH o-Co-lc-Coo

CH-oH
CH-o cfcoo 4

CH-oN c-CA-Coo
 ARP +3 RP +2 FADH L NADH,4
Cdale le Bib, tergéiqe
aHgda da cAaime pitadane,n pat

24KE +{Axe) .(tAs-3 ATp daros on T

NAB O 4 ,
43-B P6
ATP ADP
cen acens3P2buEp. PE
P
3.pha

pephoude

ADP
AS4 AT
Acdl Co PyApade
NADHA
NAD LAOA
HaJe
Ho hade
FAOM
Fumanale
iyacnale
Kcinae
GTR
cWaqnd
suCC'ny Cot HACASH

Gbe Co

22P
 d8uBa, tnegi qe Tadad

sfavme d'Te dn 1q d atde qnos JGa coe

a A
tnegia emma qujnd
ahse modaine diase ohay
CH-0-Co-(cA,C
CH.o- Co- CH

C--ColC"C
Si (1ea.{6.iC) -eo¬q/me
moe d Ke
&Py6 ne mase de Bo6q p me éneqe de 4it

dane
8o - t t ma dare
X ma dATP

Xmsl &'AaT P 4x 4l2 moled'aT

omse d'ëTP

nSa que hoqu AT dneqie der -3s kimee. dac qs d RTP

e b dnenqie de -IS,ts kma

haae 4,18x mk

haqse - O,23 8e46 KCal

n appbq ne de daus équaienn

xkca -5, tsk

XKea -S,&Sx3884
x Kcad5S

4,18 A
-3,65 Kcof
 waaane ne nen de -3S Ko

.
Xoqie

Asy malL AlU Alu mlL

Sxl2 8x lo ,S
3. 77.to

x
4x

3,S l 4xt

3xi

.4/Vmak= 2xisanlDandelL Vma

2.mn |0nelL

-
-oSleLIm
4
. A|Vm -o, S ioLim
qtSxtoLnd

4"
Sxlsm L
./ o,t sloLlma - t xtoLime

Sa que: n 4

ioM
10
 : 2-eM

n'mA

Um-m

=2 leM
Wim-m

OT 3-H

i o n de Tp
ceie
A.d pou de da Caae en hoça La Tangeale . pui en meun a Uase dapte,

n chss meug, des mbuen Con NAB4u o abr a3uo nm ddc celk mesuwen

pem d'voen acide tnaumaiq

Le
Gsndilias plaiqus néceaiM d t

ESCES
Vm Ra cofae dedinetidien ytneJe datsmp
emne -Sulhat c' U

.L.c
w D.qo84do
www
A.E
&.L

63 Li AGA